Após a decapitação, esterilize o corpo do camundongo recém-nascido anestesiado com etanol a 70%. Usando fórceps e tesouras cirúrgicas de ponta fina, faça uma incisão entre o abdômen e as patas traseiras. Em seguida, remova a pele puxando-a em direção ao pé dos membros posteriores.
Raspe o tecido conjuntivo e o músculo preso aos ossos usando uma pinça afiada. Corte a tíbia e o fêmur com uma tesoura. Use uma pinça para colocar a tíbia e o fêmur em um tubo de meio de cultura MEM no gelo.
Transfira os ossos para uma peneira de 40 mícrons com um tubo de coleta. Esmague os ossos com um êmbolo de seringa de três mililitros contra a peneira para liberar a medula. Centrifugar a suspensão celular a 350 G durante cinco minutos a quatro graus Celsius.
Aspire o sobrenadante e ressuspenda suavemente as células em cloreto de sódio a 0,2% para fazer uma solução hipotônica para a lise dos eritrócitos. Adicione imediatamente um volume igual de cloreto de sódio a 1,6% para tornar a solução isotônica. Centrifugar o sobrenadante e remover a solução de lise.
Ressuspenda as células no DMEM completo e conte as células em um contador de células automatizado.
