Para começar, centrifugue os tubos coagulados contendo sangue a 626 a 1.409 G por 20 minutos a dois a oito graus Celsius. Em seguida, recolha cuidadosamente o sobrenadante num novo tubo. Armazenar o sobrenadante a 80 graus Celsius negativos.
Em seguida, configure o padrão em branco e os poços de amostra. Pipetar 50 microlitros dos padrões diluídos na placa ELISA. Em seguida, transfira 40 microlitros das amostras diluídas para os poços de amostra.
Adicione 10 microlitros de soro nos poços de amostra. Agora, sele a placa com uma película de vedação. Coloque a placa selada em uma incubadora a 37 graus Celsius por 30 minutos.
Diluir a solução de lavagem concentrada 30 vezes com água destilada para obter uma solução de lavagem de força única. Em seguida, remova o filme de vedação da placa e descarte o líquido. Agora, encha cada poço com 200 microlitros de solução de lavagem cinco vezes.
Depois de descartar o sobrenadante pela última vez, bata para secar a placa. Pipetar 50 microlitros do reagente enzimático em todos os alvéolos, exceto os em branco. Em seguida, sele a placa com uma película de vedação antes de colocá-la em uma incubadora a 37 graus Celsius por 30 minutos.
Depois de lavar a placa mais cinco vezes, adicione 50 microlitros de cada um dos reveladores de cores, A e B.Agite a placa suavemente para misturar bem. Em seguida, incube a placa a 37 graus Celsius com pouca luz por 10 minutos. Agora, pipete 50 microlitros da solução de parada em cada poço para encerrar a reação.
Meça a absorbância de cada poço sequencialmente a 450 nanômetros. A concentração plasmática de homocisteína no grupo metionina foi duas vezes maior do que no grupo controle. As concentrações plasmáticas de homocisteína foram relativamente menores nos grupos de tratamento.
