Para começar, obtenha o caldo de lisogenia ou meio LB e adicione os antibióticos ao meio. Alíquota de cinco mililitros do meio em tubos de ensaio estéreis com tampas. Inocular o meio com estirpes de Escherichia coli que expressam plasmídeos retirados de arcas congeladoras e incubar a cultura num agitador durante a noite.
Em seguida, prepare uma solução de tiofeno sulfonamida a 10 milimolares em DMSO e vórtice para misturar bem. Dilua as culturas de 1 a 100 vezes em 10 mililitros de meios tomados em tubos cônicos de 15 mililitros. Vórtice brevemente para misturar.
Adicione culturas aos poços apropriados de uma placa de 96 poços. Após a mistura, preparar uma série de diluições das linhas A para E, transferindo 50 microlitros da solução de cada vez. Cubra a placa com fita microporosa e incuba-a.
Depois de remover a fita, usando um leitor de placas, leia a densidade óptica em 600 nanômetros GFP e mCherry. Por fim, registre e plote os dados como fluorescência normalizada por célula. Os dados para os compostos de 3-tiofeno sulfonamida sugeriram que os compostos 1A e 3B eram inibidores de LuxR / HapR em diferentes graus, enquanto 2B não tinha nenhuma atividade.
