Para começar, coloque um bloco pulmonar cardíaco de rato recém-excisado em uma folha de gaze sobre gelo. Disseque o excesso de gordura ao redor da aorta. Em seguida, apare a aorta, deixando cerca de três a cinco milímetros para a canulação.
Faça uma incisão de um a dois milímetros de comprimento na artéria pulmonar. Coloque o bloco coração-pulmão aparado no gelo diretamente abaixo das cânulas. Em seguida, use uma braçadeira de tubo de controle de fluxo para ajustar o fluxo do lado de Langendorff para canulação da aorta.
Canule cuidadosamente a aorta na cânula esquerda. Segure-o com uma braçadeira preta e amarre-o com uma sutura de seda 2/0. Abra completamente a braçadeira da tubulação de controle de fluxo para aumentar o fluxo da perfusão de Langendorff.
Em seguida, abra o grampo de pós-carga. Comece a monitorar a atividade cardíaca com software. Ajuste o bloqueio do coração-pulmão de forma que a superfície anterior dos pulmões fique voltada para o operador.
Amarre o lobo do pulmão esquerdo com uma sutura de seda 2/0. Amarre os lobos pulmonares restantes de uma só vez com uma sutura de seda 2/0. Em seguida, gire o coração para que os pulmões amarrados fiquem voltados para trás.
Com uma pequena tesoura vannas. Apare uma seção de dois a três milímetros do apêndice atrial esquerdo para criar uma pequena abertura nos átrios. Canule cuidadosamente o apêndice atrial esquerdo para a cânula esquerda.
Segure-o com uma braçadeira preta e amarre-o com uma sutura de seda 2/0. Ajuste a camisa de água da câmara cardíaca para que o coração fique no centro da câmara. Agora abra o transdutor de pressão para o ar.
Selecione a pressão aórtica no software. Em seguida, clique em amplificador de ponte, seguido de zero e OK para zerar o transdutor de pressão. Perfunda o coração no modo Langendorff por 10 minutos.
Em seguida, transfira a pedra de ar do reservatório tampão Langendorff Krebs-Henseleit para o reservatório tampão Krebs-Henseleit em funcionamento. Abra a torneira de três vias que sai do perfusato em funcionamento. Feche a pinça grande que leva à cânula aórtica e abra o fluxo que leva ao apêndice atrial esquerdo para alternar para o modo de trabalho.
Perfunda o coração no modo de trabalho por 15 minutos. Encha uma câmara de cardioplegia com 50 mililitros da solução de preservação cardíaca designada. Abaixe a camisa de água e feche a torneira de três vias no lado do modo de trabalho.
Feche a pinça para interromper o fluxo em direção à cânula atrial esquerda. Em seguida, abra o fluxo para a cânula aórtica. Agora feche o clamp do lado Langendorff e na pós-carga.
Abra a pinça da linha de cardioplegia. Retire 15 mililitros da solução de cardioplegia da linha de pressão. Lave o coração com cardioplegia através da cânula aórtica e colete o efluente coronário.
Após três minutos, feche a pinça de cardioplegia e a pequena pinça azul que leva à cânula aórtica. Coloque uma pinça bulldog na cânula aórtica e outra pinça bulldog na cânula esquerda. Desconecte o bloco da cânula cardíaca do circuito e coloque-o em um béquer contendo cardioplegia em uma caixa de gelo.
Para reperfundir o coração após o armazenamento estático a frio, prenda cuidadosamente o bloqueio coração-pulmão após o armazenamento a frio no circuito de perfusão. Use uma seringa de calibre 18 com ponta romba cheia de tampão Krebs-Henseleit para remover qualquer ar da cânula. Conecte a cânula aórtica primeiro.
Em seguida, abra a braçadeira de tubulação no lado Langendorff. Reconecte a cânula esquerda e certifique-se de que o ar foi removido da cânula antes de conectá-la ao circuito de perfusão. Mantenha o lado de trabalho clamp fechado até que seja hora de mudar do modo Langendorff para o modo de trabalho.
Um fluxo aórtico de 14 a 22 mililitros por minuto resultou em um bom fluxo de Langendorff. Quando mudado para o modo de trabalho, um fluxo aórtico de pelo menos 30 mililitros por minuto facilitou o armazenamento do coração. Apesar de bons traços de linha de base, alguns corações não produziram boa recuperação após armazenamento estático prolongado a frio.
