Para começar, coloque todos os instrumentos cirúrgicos estéreis na plataforma de trabalho. Na cabine de biossegurança, desinfete a superfície do tubo contendo o cordão umbilical humano previamente coletado com etanol 75%. Remova a amostra em uma placa de Petri.
Mergulhe a amostra com os nós em etanol a 75% por 30 segundos. Em seguida, em uma nova placa de Petri, enxágue a amostra várias vezes com PBS estéril. Usando uma tesoura cirúrgica e uma pinça, corte os nós e, em seguida, corte o cordão entre dois nós transversalmente em pedaços curtos.
Perfunda a veia com PBS usando uma pipeta de um mililitro até que o fluido que sai da outra extremidade do cordão se torne completamente transparente. Transfira um dos pedaços já cortados de cordão umbilical para uma nova placa de Petri. Adicione a quantidade apropriada de PBS para manter o cabo úmido durante toda a operação.
Segure o cordão com uma pinça e puxe as artérias ao longo de seu eixo principal com a ajuda de grampos de mosquito. Para fixar o cordão horizontalmente com o lado mais grosso voltado para cima, insira uma lâmina da pinça na veia umbilical e prenda-a firmemente, garantindo que a pinça prenda no lado mais grosso. Usando um bisturi, faça uma incisão linear na camada do epitélio amniótico de uma extremidade à outra, ao longo da borda da outra lâmina da pinça.
A partir do canto da abertura de corte, levante o canto do epitélio amniótico com grampos dentários e continue a cortar horizontalmente um pouco mais com uma tesoura da córnea ao longo da superfície interna do epitélio. Separe a geléia de Wharton e o epitélio amniótico com grampos e expanda gradualmente para todo o círculo de uma extremidade do cordão umbilical. Retire a camada epitelial no sentido do comprimento.
Insira as duas lâminas da pinça dentro da veia. Prenda uma porção da geléia de Wharton e vire-a do avesso para expor o epitélio da veia umbilical. Retire o epitélio da veia facilmente.
Coloque a geléia de Wharton coletada em uma placa de Petri de 90 milímetros pré-rotulada e corte-a em pedaços de um a três milímetros com uma tesoura e uma pinça. Inverta o prato com a tampa no fundo e coloque-o em uma incubadora de 5% de dióxido de carbono a 37 graus Celsius por 30 minutos. Mudar o meio de cultura de células estaminais mesenquimais humanas de três em três dias.
Em comparação com a abordagem convencional, o procedimento exclusivo de dissecção romba mostrou um aumento significativo no rendimento de geléia de Wharton. Uma análise mais aprofundada, contando a quantidade total de células-tronco mesenquimais gelatinosas de Wharton por ambos os métodos, mostrou uma lacuna pronunciada na quantidade de células com o aumento do número de passagens. A taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais no novo método foi significativamente maior após dois dias.
