Preparação e classificação de células T-ALL de peixe-zebra coradas com CT-FR para transplante e rastreamento de tumores

Para a preparação da placa doadora, transfira 500.000 células de peixe-zebra CG1 do tipo selvagem para um tubo cônico de 15 mililitros. Adicione cinco mililitros de meio de peixe para diluir o estoque de células para 100 células por microlitro. Dispense 50 microlitros da suspensão celular em cada poço da placa de 96 poços e coloque a placa a quatro graus Celsius até a classificação.

Prepare controles sem manchas e de cor única para a configuração do experimento de classificação. Passe a suspensão celular dos controles e as amostras através de uma tampa de filtro de 35 mícrons para um tubo de fax no gelo. Centrifugue a placa de 96 poços a 2.500 G a quatro graus Celsius.

Remova cuidadosamente 45 microlitros do sobrenadante de cada poço, deixando cinco microlitros de líquido para trás. Ressuspenda as células com uma pipeta de 20 microlitros e, usando a microseringa Hamilton, injete as suspensões celulares no número desejado de peixe-zebra CG1. Após o transplante de peixe-zebra CG1 com células classificadas para a análise de diluição limitante, as células altas CT-FR tiveram uma frequência de células-tronco leucêmicas quatro vezes maior em comparação com as células baixas CT-FR.

Imagens representativas do peixe-zebra 28 dias após o transplante mostraram que 89% dos peixes-zebra CT-FR altos desenvolvem leucemia em comparação com 20% no grupo CT-FR baixo. O peixe-zebra alto CT-FR teve uma latência significativamente menor para leucemia. O peixe-zebra alto CT-FR teve uma sobrevida global significativamente menor em comparação com o peixe-zebra baixo CT-FR.