Calibração de Instrumento de Respirometria de Alta Resolução para Medição da Respiração Mitocondrial em Amostras Murinas

Para começar, ligue a respirometria de alta resolução e o sistema de vácuo. Remova as rolhas e, em seguida, usando um sistema de vácuo, remova a solução de armazenamento de etanol a 70%. Reabasteça a câmara com água ultrapura de grau molecular.

Após a lavagem final, adicione dois mililitros de MiRO5 sem creatina ou blebbitatina em cada câmara. Abra o software de respirometria. Na caixa pop-up, defina a velocidade do agitador da câmara para 750 rpm, a temperatura para 37 graus Celsius e o intervalo de gravação de dados para dois segundos.

Defina o ganho para um e a tensão de polarização para 800 milivolts para os sensores de oxigênio. Clique em Conectar ao Oxígrafo para estabelecer comunicação com o instrumento. Na caixa de diálogo solicitada, nomeie e salve o arquivo experimental com os dados e a calibração atuais.

Registre a concentração de oxigênio por pelo menos 30 minutos para permitir que as câmaras aqueçam e registre sinais para calibração do ar. No final da calibração, segure a tecla shift e o botão esquerdo do mouse e arraste por uma região na linha do tempo para marcar uma região estável de concentração de oxigênio. Navegue até Oxigraph, seguido por Calibração de oxigênio.

Para calibração de ar, selecione a marca de concentração de oxigênio estável e clique em Calibrar e copiar para a área de transferência. Pare a gravação da calibração do ar e salve o arquivo.