Para começar, use equipamento de proteção individual adequado. Antes do procedimento, pese o rato para determinar a dose correta para medicamentos baseados em peso e configurações do ventilador. Depois de anestesiar o rato, coloque-o em decúbito ventral.
Para confirmar a profundidade da anestesia, use uma pinça para pressionar suavemente a pata do membro posterior e verifique a ausência de uma resposta de retirada. Agora aplique uma pomada à base de petróleo aprovada pelo veterinário nos olhos do rato para evitar o ressecamento. Observe a frequência respiratória e avalie as respostas de abstinência, conforme mostrado anteriormente.
Em seguida, usando uma tesoura, raspe o membro posterior do rato. Use fita adesiva para posicionar o membro com o tornozelo fixado em 90 graus de dorsiflexão, o joelho em extensão e o quadril em abdução. Em seguida, insira um par de agulhas monopolares isoladas de calibre 28 para estimular o nervo ciático com o cátodo colocado na região do membro posterior proximal e o ânodo posicionado mais proximalmente dentro do tecido subcutâneo, sobrepondo o sacro.
Em seguida, posicione um eletrodo de aterramento descartável no membro posterior ou cauda contralateral. Insira cuidadosamente um eletrodo de agulha de autoclave de calibre 27 e 25 milímetros, projetado especificamente para eletromiografia de fibra única no músculo gastrocnêmio direito. Insira o eletrodo da agulha de eletromiografia de fibra única em paralelo com as fibras musculares do gastrocnêmio para capturar o potencial de ação da fibra única.
Aplique estimulação de corrente constante no nervo ciático direito na frequência de 10 hertz, usando uma faixa de intensidade de 0,3 a 10 miliamperes e uma duração de pulso de 0,1 milissegundos. Ajuste o ganho de 200 microvolts para 1000 microvolts por divisão para melhorar a visualização do potencial. Configure a velocidade de varredura para ser de 500 microssegundos por divisão.
Para classificar uma resposta como SFAP, ela deve exibir um tempo de subida menor que 500 microssegundos, uma amplitude mínima de 200 microvolts e demonstrar o comportamento de todos ou nenhum. Calcule o jitter ou a variabilidade da latência do SFAP entre descargas consecutivas após pelo menos 50 estímulos usando a equação fornecida. Avalie e quantifique o bloqueio.
Depois de avaliar 10 sinapses de cada animal, calcule o jitter e determine os valores médios por animal. Ao registrar potenciais que apresentam bloqueio intermitente, aumente a intensidade do estímulo para confirmar que a falha da PASF não é devida à estimulação submáxima. Durante a administração de rocurônio, a EMG de fibra única mostrou aumento da variabilidade da transmissão e bloqueio da junção neuromuscular em comparação com indivíduos saudáveis.
