Para começar, transferir 500 para 1.000 vermes Caenorhabditis elegans sincronizados em estágio L1 em placa de ágar NGM e incubar a 20 graus Celsius até o dia do teste. Projete o cronograma de ensaio para dois grupos experimentais. Usando o tampão M9, colete vermes L4 e vermes da idade adulta no respectivo dia.
Transfira os vermes coletados para microtubos de 1,5 mililitro e espere que os vermes sedimentem por gravidade. Lave as minhocas três vezes com um mililitro de tampão M9, deixando aproximadamente 500 microlitros no tubo após a última lavagem. Usando uma pipeta automática, adicione 10 microlitros da suspensão de vermes a uma lâmina de microscópio e calcule o volume necessário para obter 100 vermes por microlitro.
Em um novo microtubo, adicione o volume necessário para 100 vermes e 100 microlitros de solução de sal dissódico de 25% de erioglaucina. Em seguida, adicione 200 microlitros de cultura de E.coli OP50 e aumente o volume para 500 microlitros usando um tampão M9. Incubar o tubo durante três horas com agitação num misturador, protegendo-o da luz.
Após a incubação, deixe os vermes sedimentarem por gravidade antes de lavá-los com um mililitro de tampão M9 até que a solução de coloração seja completamente removida. Após a última lavagem, ressuspenda os vermes em 250 microlitros de tampão M9 e transfira aproximadamente 50 microlitros para a lâmina. Coloque a lamínula e incube a lâmina a 20 graus Celsius por 10 minutos para paralisar os vermes.
Usando um microscópio estéreo, no modo Campo Brilhante, conte o número total de vermes e o total de vermes tingidos. O ensaio de permeabilidade intestinal exibiu uma forte barreira intestinal em vermes jovens, impedindo o vazamento de corante. Em contraste, os vermes envelhecidos exibiram extravasamento de corante por todo o corpo, indicando danos na membrana intestinal.