Para começar, coloque a tampa de detecção em uma placa receptora de 96 poços vazia e coloque-a na incubadora de cultura de células. Alinhe e monte o dispositivo na tampa de detecção e conecte-o ao hub por meio do cabo USB fornecido, criando um sanduíche Recypher. Agora acesse o site do Lucid Lab e clique no botão novo experimento no canto superior direito para criar um novo experimento.
Nomeie o título do experimento e insira quaisquer notas experimentais relevantes para o estudo. Em seguida, crie boas condições nos grupos de tratamento. Por exemplo, se estiver testando os efeitos de diferentes concentrações séricas na mídia na taxa de consumo de oxigênio, selecione soro no nome do grupo concentrações séricas intermediárias a serem usadas e adicione mais valores percentuais de soro clicando no botão de adição.
Em seguida, atribua quais poços receberão uma porcentagem específica de soro e selecione um padrão de cores para esses poços. Clique no botão adicionar grupo para adicionar mais grupos conforme necessário. Em seguida, defina a configuração da placa e selecione o dispositivo e o estilo de placa correspondentes.
Para fazer isso, clique no botão adicionar placa, escolha o dispositivo e selecione o tipo de placa. Selecione o tratamento e clique no poço correspondente. Agora, clique no botão iniciar agora para iniciar o experimento.
Verifique se o indicador no website e o diodo emissor de luz no hub estão verdes sólidos. Deixe o sistema funcionar por 15 a 60 minutos para permitir testar se cada sensor está bem calibrado e detectar o oxigênio atmosférico. Em seguida, remova o dispositivo da tampa de detecção e coloque-o de cabeça para baixo na incubadora para permitir que o motor do dispositivo seja reiniciado.
Agora, coloque a placa com a tampa de detecção de volta na capa de cultura de células, junto com uma placa de 96 poços contendo as culturas de EPR. Troque o meio na placa com culturas de EPR para o mesmo meio e volume para todos os poços para obter valores de taxa de consumo de oxigênio de linha de base para cada poço. Em seguida, transfira a tampa de detecção para a placa que contém as culturas de células e coloque a tampa padrão na placa que contém as culturas de células para a placa receptora vazia de 96 poços, para manter a esterilidade da tampa padrão.
Coloque a placa com culturas de células e a tampa de detecção de volta na incubadora de cultura de células. Alinhe e monte o dispositivo na tampa de detecção e conecte-o ao hub por meio do cabo USB fornecido. Verifique se os indicadores na interface do site e no hub estão todos em verde sólido.
Deixe o dispositivo medir as taxas de consumo de oxigênio ou OCR em cada poço por pelo menos 12 a 24 horas para capturar um OCR de linha de base. Após o experimento, mergulhe a tampa de detecção em etanol a 70% por 10 minutos em uma capa de cultura de células para esterilizá-la. Assim que o etanol e a água evaporarem totalmente, coloque a tampa de detecção em uma nova placa receptora de 96 poços.
