Medindo mudanças no metabolismo mitocondrial em EPR hipóxico usando o sistema Resipher

Para começar, monte a tampa de detecção com a placa de cultura de células no exaustor e transfira-as para a câmara de hipóxia. Configure o sanduíche na câmara de hipóxia. Depois disso, coloque uma placa de Petri com água estéril na câmara de hipóxia para ajudar a manter a umidade.

Finalmente, coloque um sensor de oxigênio portátil na câmara de hipóxia. Em seguida, sele a câmara de hipóxia. Certifique-se de que o cabo USB esteja saindo da câmara de hipóxia e que o orifício por onde o cabo sai esteja vedado com massa ou graxa de silicone.

Conecte a câmara de hipóxia a um cilindro de gás com uma concentração hipóxica de oxigênio e uma concentração padrão de dióxido de carbono para cultura de células. Troque lentamente o ar na câmara de hipóxia com o ar de 1% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono do cilindro até que o sensor de oxigênio mostre a concentração de oxigênio desejada, geralmente entre 1% e 10% Agora, feche as válvulas de entrada e saída da câmara de hipóxia e transfira toda a câmara para a incubadora. Em seguida, configure e inicie o experimento.

Os meios equilibrados com o oxigênio atmosférico demoraram mais para atingir o equilíbrio em volumes mais altos. A câmara de hipóxia mostrou um vazamento lento, fazendo com que os níveis de oxigênio se aproximassem da concentração atmosférica em 30 horas. A solubilidade em oxigênio foi idêntica entre os meios frescos e condicionados, indicando que as mudanças na composição do meio ao longo do tempo não afetaram a solubilidade em oxigênio.