Para começar, insira a cauda do mouse na abertura superior do tubo de contenção. Puxe lentamente o mouse para dentro do tubo e coloque o plugue à frente do mouse para evitar que ele escape. Para fazer uma manga de contenção para um mouse menor, corte na extremidade do nariz do cone para garantir que o nariz do mouse não esteja obstruído e tenha espaço suficiente para respirar.
Em seguida, corte a parte de trás do cone semelhante ao comprimento do mouse. Coloque o mouse no limitador de tubo conforme descrito anteriormente. Enquanto segura a cauda do rato, deixe o rato entrar no cone.
Deslize o cone de retenção para dentro do tubo. Certifique-se de que a cauda do mouse esteja totalmente fora da parte de trás do tubo e que o mouse tenha espaço para respirar dentro do cone. Prenda o plugue do tubo imediatamente na frente da abertura do nariz do cone.
Encha o tubo cônico de 15 mililitros com água morna. Coloque o limitador de tubos com o mouse dentro dele na plataforma elevada. Mergulhe a cauda do rato contido em água morna por pelo menos um minuto até que as veias laterais estejam claramente dilatadas e visíveis.
Coloque o vírus adeno-associado sem tampa, ou AAV, contendo 1.7 mililitros de tubo de microcentrífuga no rack de tubos. Com a mão dominante, insira a agulha verticalmente no tubo. Assim que a agulha estiver dentro do tubo, segure o tubo com a mão não dominante.
Em seguida, levante o tubo e a seringa simultaneamente ao nível dos olhos, certificando-se de que a agulha não toca na parede do tubo. Descanse os dois braços sobre a mesa e puxe lentamente a dose para a seringa. Expulse as bolhas de ar da seringa sobre uma almofada absorvente descartável.
Segure o injetor por 40 segundos para aquecê-lo. Depois de garantir que as veias da cauda estejam claramente visíveis, remova o limitador do tubo da plataforma elevada e coloque-o diretamente sobre a mesa. Posicione o mouse no limitador com os pés para baixo para facilitar o manuseio da cauda.
Limpe rapidamente a cauda com gaze para secá-la. Em seguida, limpe a cauda com um cotonete embebido em álcool e seque-a novamente com gaze seca. Gire a cauda aproximadamente 90 graus para a esquerda ou para a direita para que uma das duas veias laterais fique voltada para cima.
Localize um local de injeção adequado no terço médio da cauda. Segure a cauda com a mão não dominante usando o polegar e o indicador imediatamente distais ao local da injeção. Dobre a cauda sobre o dedo indicador para que o local da injeção fique plano no dedo indicador.
Em seguida, puxe a cauda para trás para esticá-la e o local da injeção fica completamente horizontal. Segure a seringa usando os dedos indicador e médio da mão dominante em ambos os lados do flange do cilindro da seringa, mantendo o polegar pronto no êmbolo. Apoie as duas mãos sobre a mesa e coloque a agulha diretamente sobre e paralelamente à cauda e à veia com o chanfro voltado para cima.
Agora aplique pressão para baixo na agulha e deslize-a para frente na veia para injetar a solução de AAV na veia. Após a administração da dose, retire lentamente a agulha e aplique imediatamente pressão com gaze no local da injeção durante pelo menos 10 segundos até que a hemorragia pare. A imagem histológica da proteína repórter fluorescente pós-injeção mostrou que o tdTomato foi expresso difusamente em todo o fígado e quadríceps, indicando que o AAV9 atingiu e transduziu amplamente diferentes regiões de ambos os tecidos.
