Para começar, insira uma micropipeta no extrator de micropipetas e puxe uma agulha de microinjeção. Alinhe a ponta da agulha com as divisões do micrômetro de platina sob um escopo de dissecação. Com o micrômetro como guia de medição, use uma pinça afiada para quebrar a agulha em um tamanho de furo ligeiramente maior que o diâmetro da célula.
Usando uma seringa de 50 mililitros equipada com um enchimento de pipeta, encha completamente a agulha com o óleo mineral. No aparelho de transplante, gire a torneira de três vias de modo que seu braço longo fique voltado para a bomba de microsseringa. Pressione o êmbolo da seringa do reservatório para liberar todas as bolhas de ar da linha hidráulica.
Mantendo uma leve pressão no êmbolo, gire a torneira de três vias para que o braço longo fique voltado para a seringa do reservatório. Em seguida, insira a agulha no suporte sem introduzir bolhas de ar. Ajuste a agulha de forma que ela fique voltada diretamente para a esquerda em um ângulo de 10 a 15 graus em relação à horizontal.
Usando os micromanipuladores grossos e finos, manobre a ponta da agulha sob a objetiva do microscópio para colocá-la em foco. Se o líquido estiver fluindo para dentro ou para fora da ponta da agulha, ajuste a pressão usando a bomba de seringa até que um menisco estável entre o óleo e o RPT seja observado. Se uma bolha de óleo permanecer, mova a agulha para a direita para retirar sua ponta do RPT e, em seguida, de volta para a esquerda para reposicionamento.
Mova o palco para a direita até que o animal doador seja trazido de volta à vista. Centralize e concentre-se nas células a serem transplantadas, alinhando a agulha com as células do lado de fora do animal. Em seguida, insira a agulha no animal doador e, se necessário, reestabilize o menisco de óleo na ponta da agulha com a bomba de microsseringa.
Posicione a ponta da agulha contra as células de interesse e aplique uma sucção suave com a bomba de microsseringa. Depois de retirar as células adequadas, remova a agulha do doador e reestabilize o material na ponta da agulha. Reposicione o palco para trazer o primeiro animal hospedeiro à vista/centro e concentre-se na área em que as células devem ser colocadas e alinhe a agulha com essa região do lado de fora do animal.
Em seguida, insira a agulha no animal hospedeiro e reestabilize o menisco de óleo na ponta da agulha. Posicione a ponta da agulha no local de deposição e aplique uma leve pressão com a bomba de microsseringa até que o número correto de células doadoras seja liberado da agulha. Por fim, remova a agulha do hospedeiro.
Às 12 horas após o transplante, um neurônio doador foi observado com sucesso na região anterior do núcleo motor vago do hospedeiro, mostrando sinais de protrusões de neuritos saudáveis. Dois dias após o transplante, o neurônio transplantado não apenas permaneceu posicionado corretamente, mas também começou a estender um novo axônio em direção ao quarto arco faríngeo, indicando uma integração bem-sucedida no hospedeiro.
