Extração de fluido de lavagem intercelular do apoplasto de trigo para análise de enzimas relacionadas à parede celular

Para começar, enxágue os pedaços de folha de trigo duas vezes em água destilada para remover qualquer contaminação citosólica das pontas cortadas. Insira os pedaços de folha em um tubo de vidro de parede espessa contendo um tampão de extração. Usando uma bomba de jato de água, aplique infiltração a vácuo por cinco minutos para impregnar as folhas com o tampão de extração.

Remova os pedaços de folhas do tubo de vidro e seque-os com uma toalha de papel. Insira os pedaços de folhas secas verticalmente em um tubo de centrífuga pré-resfriado equipado com um disco perfurado. Centrifugue as folhas a 500G por 10 minutos a 4 graus Celsius.

Usando uma pipeta de 100 microlitros, transfira o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga pré-resfriado de 1,5 mililitro. Conservar o sobrenadante recolhido a 20 graus Celsius negativos até à utilização.