Coloração de células da medula óssea de camundongos com Hoechst para detectar células da população lateral por citometria de fluxo

Para começar, obtenha células da medula óssea do camundongo e adicione cinco microgramas por mililitro Hoechst 33342 a dois mililitros de suspensão celular. Prepare também o tubo de controle negativo. Incubar em banho-maria a 37 graus Celsius por 90 minutos com agitação suave a cada 30 minutos Após a incubação, resfrie as células no gelo por cinco minutos e, em seguida, centrifugue a 250G por cinco minutos a quatro graus Celsius.

Ressuspenda as células em uma solução de funcionamento a frio contendo a solução salina balanceada de Hank com 2% de FBS. Centrifugue novamente a quatro graus Celsius por cinco minutos. Em seguida, ressuspenda o pellet celular resultante em 500 microlitros de solução em execução por amostra.

Antes da análise por citometria de fluxo, suplementar as células com dois microgramas por mililitro de iodeto de propídio e colocá-las no gelo durante cerca de cinco minutos.