Para começar, conecte uma ponta de pipeta grande cortada P200 a uma seringa de 10 mililitros e encha-a com PBS. Use uma pinça para inserir a ponta da seringa na abertura de um segmento intestinal isolado do camundongo sacrificado. Segure o segmento intestinal na seringa com a pinça e lave suavemente a uma taxa de aproximadamente 50 microlitros por segundo para remover o conteúdo.
Recolher o conteúdo intestinal num barco de pesagem vazio. Em seguida, coloque o segmento intestinal úmido em linha reta em uma tira de papel de filtro de celulose rotulado seco. Usando uma tesoura de dissecação, corte o intestino longitudinalmente ao longo da linha mesentérica, aproximadamente cinco milímetros de cada vez.
Use a borda inferior da tesoura ou um par de pinças para colocar o tecido cortado no papel de filtro. Agora coloque outro pedaço de papel de filtro em cima do segmento intestinal para evitar que ele enrole ou perca a forma durante a fixação. Para prender o tecido no lugar, grampeie as bordas do papel de filtro, evitando grampear o tecido.
Mergulhe os tecidos em formalina tamponada a 10% normal. Remova suavemente o pedaço superior de papel de filtro tocando o lado luminal do intestino. Use uma pinça para retirar cuidadosamente o intestino do pedaço inferior de papel de filtro antes de descartá-lo.
Em seguida, lave o tecido em PBS três vezes para remover a formalina do tecido. Usando uma pinça de ação reversa, pegue um pedaço de intestino ao longo da borda curta com o lado luminal voltado para cima e gire a pinça para rolar o tecido. Coloque o lenço em um barco de pesagem seca.
Segure o tecido no lugar com uma pinça em uma mão. Abra cuidadosamente a pinça de ação reversa e solte o tecido, usando a outra pinça para desalojar o tecido da pinça de ação reversa. Insira um pino de dissecação tamanho 00 no tecido.
Use um alicate para remover a ponta afiada do alfinete. Depois que todas as amostras forem enroladas, coloque todos os quatro rolos de tecido no mesmo e insira o em um processador de tecidos. Em uma estação de incorporação, coloque uma pequena quantidade de parafina em um molde.
Retire os quatro rolos suíços do e coloque-os em um molde individual, colocando-os o mais plano possível. Adicione mais parafina para preencher o molde. Mova o molde para a placa fria e certifique-se de que todos os rolos suíços estejam planos na parte inferior do molde.
Coloque uma pequena tampa de rotulada no molde. Assim que a cera solidificar, remova o bloco do molde.
