Para começar, remova a placa de cultura contendo vermes fêmeas hermafroditas adultas da incubadora. Depois de sincronizá-lo-5 minhocas, lave as minhocas cinco vezes com tampão M9. Transferir os machos adultos com um dia de idade da placa semeada para um tubo contendo tampão M9.
Coloque os vermes em uma placa NGM sem sementes para eliminar as bactérias residuais e evitar a interferência dos alimentos durante o ensaio. Prepare uma placa de ensaio de quimioatração com 1,5% de trado, cloreto de sódio 25 milimolar, 1,5 base Tris milimolar e cloridrato de Tris 3,5 milimolar. Aqueça o sem-fim na solução de quimioatração no micro-ondas até dissolver completamente.
Após o resfriamento, use uma pipeta para distribuir uniformemente a solução do sem-fim de quimioatração em placas de Petri. Deixe as tampas abertas em uma área limpa para permitir que a superfície da broca seque ligeiramente. Assim que a superfície secar adequadamente, feche as tampas.
Para realizar o ensaio de quimioatração, marque três pontos distintos na tampa e na parte inferior da placa de Petri. Aplique dois microlitros de azida sódica molar em cada ponto experimental e de controle na placa. Escolha 20 minhocas machos saudáveis e que se movem livremente com um selecionador de minhocas.
Sob um microscópio de dissecação, solte o verme no ponto de partida. Adicione rapidamente dois microlitros de tampão M9 ao ponto de controle e dois microlitros de feromônio sexual ao ponto experimental na tampa. Feche suavemente a tampa e coloque o prato em uma área silenciosa e estável à temperatura.
Após 30 minutos, marque o ensaio contando o número de vermes em cada ponto. Para uma avaliação aprimorada da quimiotaxia, registre as trajetórias dos vermes usando uma câmera. O índice de quimiotaxia para machos him-5 foi consistentemente acima de 0,5, indicando uma forte atração pela fonte de feromônio sexual, enquanto o índice de quimiotaxia para machos SRD-1 foi em torno de zero.
Ensaios de quimioatração bem-sucedidos mostraram machos him-5 se aproximando da fonte de feromônio ao longo do tempo, com trajetórias codificadas por cores indicando tempo, distância, velocidade, retidão e correção de direção.
