Para começar, prepare uma amostra de AAV tratada com DNA e a mistura master dd_PCR. Adicione 2,2 microlitros da amostra diluída a 19,8 microlitros de dd_PCR mistura principal em cada tubo da tira de oito tubos de PCR e misture bem. Transfira 20 microlitros da mistura para os poços contidos na linha de amostra do meio de um cartucho gerador de gotículas.
Em seguida, transfira 60 microlitros de óleo de geração de gotículas para os poços contidos na fileira inferior de óleo do cartucho gerador de gotículas. Coloque uma junta de borracha sobre o cartucho gerador de gotículas e, em seguida, coloque-o no gerador de gotículas. Depois que as gotículas forem geradas, use uma pipeta de oito canais para transferir lentamente 42,5 microlitros de solução do cartucho de geração de gotículas para uma placa de PCR de vários poços.
Sele a placa PCR com uma tampa de folha de alumínio usando uma máquina de selagem a quente por cinco segundos a 180 graus Celsius. Para amplificação, coloque a placa em um termociclador com um módulo de reação de poço de 96 profundidades e feche-o com segurança e execute o programa de PCR. Uma vez feito isso, carregue a placa em um leitor de gotículas, insira as informações necessárias no software do sistema e inicie a leitura.
Uma separação clara entre gotículas positivas e negativas foi observada no gráfico de amplitude 1D, sugerindo uma medição bem-sucedida. O segundo gráfico de amplitude 1D mostrou chuva de gotículas com gotículas espalhadas entre as nuvens positivas e negativas, indicando um problema potencial com a precisão da medição. Os dados de saída de uma execução AAV mostraram resultados consistentes quando uma amostra foi medida em duplicatas em duas diluições diferentes.
