<p class="jove_content"&gt; Os autores gostariam de agradecer a Jennifer Strange e Greg Bauman para a sua assistência com a análise de Citometria de Fluxo e classificação. Este trabalho foi financiado pelo NIH Grant Número 2P20 RR020171 do NCRR e pela Universidade de Kentucky fundos de inicialização para FM; GIE agradece o apoio da Sociedade de Pós-Graduação Presidencial e da Irmandade Opportunity Kentucky.</p

1. Isolamento de Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de Buffy Coat <ol><li> Adquirir uma unidade de revestimento buffy do hospital ou centro de localização nas proximidades de sangue. Nosso centro de sangue nos fornece cerca de 40-60 mL de buffy coat por unidade obtido a partir de doadores de sangue normais. </li><li> Derrame sangue em uma garrafa de vidro esterilizada contendo 500 mL PBS estéril para diluir buffy coat. O volume final de PBS + buffy coat deve ser de 250 mL. </li><li> Encha dez 50 mL tubos cónicos cada uma com 20 mL solução de Lymphoprep. </li><li> Suavemente sobrepor a solução Lymphoprep com 25 mL de buffy coat diluída, tendo cuidado para não perturbar a solução Lymphoprep. </li><li> Girar tubos durante 30 minutos à temperatura ambiente a 500 x g. Assegure-se para desligar o freio de centrífuga, de modo a não perturbar a fracção de linfócitos. </li><li> Recolher as PBMCs na interface entre o Lymphoprep e as camadas de plasma médio com uma pipeta. Aspirar o off plasma médio até cerca de 1 mLainda cobre a camada de buffy coat contendo as CMSPs. Usar uma pipeta 10 mL de transferir para um tubo de PBMCs mL novo 50. </li><li> Lave as células duas vezes com PBS e em seguida, ressuspender as células em 50 mL de RPMI frio para contagem num hemocitómetro. Recuperação típica é de 8 x 10 8 - 1 x 10 9 PBMCs. </li></ol> Este procedimento pode ser reduzida para pequenos volumes de sangue. A diluição das amostras de sangue total é de 1:1 em PBS. 2. Seleção Negativa magnética de células CD4 + Total de células T, CD4 + CD45RA células T naive ou CD4 + CD45RO + células T de memória de PBMCs utilizando Kits de enriquecimento EasySep (células-tronco Technologies) Passos a seguir para 1 x 10 8 a 4,25 x 10 8 PBMCs. <ol><li> PBMCs Ressuspender a uma concentração final de 5 x 10 7 por mL em PBS contendo 2% de FBS e 1 mM de EDTA. Mover células para a 14 mL de polipropileno novo tubo de fundo redondo. <ol class = &quot;lalpha&quot;&gt; <li> Isolamento do total de células CD4 + de células T humanas por selecção negativa: adicionar T CD4 + humanas de cocktail de Enriquecimento Célula de anticorpos (50 uL por mL de PBMCs), misturar e incubar durante 10 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Isolamento de células T humanas naive por selecção negativa: adicionar 50 ul de anti-CD45RO anticorpo por mL de suspensão de células PBMC, misturar e incubar durante 15 minutos à temperatura ambiente. Adicionar cocktail de enriquecimento fornecido com o kit (50 uL de por mL de PBMCs), misturar e incubar à temperatura ambiente durante 10 minutos. </li><li> Isolamento de células T humanas de memória por selecção negativa: adicionar CD4 + humanas de memória T Cocktail Enriquecimento Célula de anticorpos (50 uL por mL de PBMCs), misturar e incubar durante 10 minutos à temperatura ambiente. </li></ol></li><li> Misture bem para partículas magnéticas igualmente distribuí-los em toda a solução. Faça nanopartículas não vórtice de kit ingênuo. </li><li> Adicionar as partículas magnéticas (100 uL por mL de PBMCs para CD4 + totais e selecção de células T ingénuos, 50 uL por mL de PBMCs para a memória de selecção de células T). Mix com cuidado pipetando 2-3 vezes e incubar à temperatura ambiente por 10 minutos para a selecção de células T naïve ou 5 minutos de memória ou total T CD4 + de seleção de célula. </li><li> Adicionar PBS contendo 2% de FBS e 1 mM de EDTA para levar o volume até 10 mL por tubo. Misture com cuidado pipetando 2-3 vezes antes de colocar tubo sem tampa em prata ímã EasySep para 5, 10 ou 2,5 minutos para CD4 total de células T, subconjuntos ingênuos e memória, respectivamente. </li><li> Com tubo ainda no ímã EasySep, despeje o líquido em novo tubo de 50 ml para isolar as células de interesse. </li><li> Repita os passos 2.5 e 2.6 para uma melhor recuperação. </li></ol> 3. Condições de cultura celular para induzir as células T reguladoras <ol><li> Um dia antes passos 1 e 2, o revestimento placas de cultura de tecidos por primeira diluição anticorpo anti-CD3 (OKT3 clone) a uma concentração de 1 ug / mL em PBS estéril. Para uma placa de 6 poços adicionar 2 mL de PBS + anti-CD3 por poço, para uma placa de 12 poços adicionar 1 mL ou para uma placa de 24 poços adicionar 500 uL por poço. Manter a placa revestida a 4 ° C até à utilização. </li><li> Preparar meio de polarização através da adição de 10% inactivado pelo calor de soro fetal bovino (FBS), 100 U / mL de penicilina, estreptomicina 100 ug / mL e 50 uM β-mercaptoetanol para RPMI-1640 pré-suplementado com 2,06 mM mM Glutamax-I e 25 tampão HEPES. Em seguida, adicionar 2 ng / mL de TGF-β e 5 ng / mL de IL-2. Aqui, pode-se adicionar ligantes ou inibidores de interesse para a mídia. Ressuspender as células a partir do passo 2, a uma concentração de 2 x 10 6 células / ml de meio de polarização. </li><li> Pré-aquecer as placas a 37 ° C e aspirar o PBS de anti-CD3 poços revestidos antes de adicionar as células. Adicionar 4 mL por poço de suspensão de células para uma placa de 6 poços, 2 mL de células para uma placa de 12 poços ou 1 mL de células para uma placa de 24 bem. Encha poços vazios com PBS para reduzir a evaporação demeios de comunicação. Incubar durante 3 dias a 37 ° C / 5% de CO 2. </li><li> No dia 3 pós de revestimento, girar para baixo da placa numa centrífuga durante 5 minutos a 500 x g. Sem perturbar as células T na parte inferior da placa, remover metade dos meios de comunicação e substituir com meios frescos. Alternativamente, se o bem torna-se cheia com células (concentração acima de 3 x 10 6 / mL), dividir o volume igualmente em outra placa de anti-CD3 revestido e adicionar meios frescos para trás até ao volume original. Incubar durante dois a três dias mais a 37 ° C / 5% de CO 2. </li></ol> 4. Fluorescência-activated cell sorting (FACS) de três populações de células T <ol><li> Preparar tampão de lavagem de FACS pela adição de 0,5% (w / v) de albumina sérica bovina (BSA) e 2 mM de EDTA para PBS estéril. Tampão a 4 ° C para obter a frio. </li><li> Remover as células de cultura de células bem e enxaguar cada poço com 2 mL de PBS para assegurar a recuperação completa das células. Coloque todas as células em 50 tubos de polipropileno mL e centrifugar a 500 xg durante 10minutos a 4 ° C. </li><li> Contar as células em um hemocitómetro para determinar a densidade celular. </li><li> O local de 3-5 x 10 células por tubo 5 em quatro separadas 5 mL tubos de fundo redondo de poliestireno para os controlos de compensação. Coloque células restantes em tubos de 50 ml de polipropileno, não mais do que 35 x 10 6 células por tubo. </li><li> Girar para baixo células durante 5 minutos a 4 ° C e meios de comunicação aspirado. Ressuspender as células a serem classificados em 90 uL de tampão de lavagem fria por 1 x 10 6 células. Ressuspender em 100 L de tampão de lavagem a frio dos tubos de controle de compensação. </li><li> Para as células a ser ordenados, combinar 2 uL de anti-CD25-PE, 3 uL de anti-CD45RA-PE-Cy5 e 1 uL de anti-CD127-APC por 1 x 10 6 células. Adicionar nenhum anticorpo para o primeiro tubo de compensação de controlo, 2 uL de anti-CD25-PE para o segundo tubo, 3 uL de anti-CD45RA - PE-Cy5 ao terceiro tubo uL de anti-e1 CD127-APC para o tubo de quarto. Incubar todos os tubos em gelo durante 45 minutos no escuro. </li><li&gt; Adicionar 10 mL de tampão de lavagem a frio para as células a ser ordenados e 1 ml para os tubos de controlo de compensação. Centrifugar todos os células a 500 xg durante 5 minutos a 4 ° C. </li><li> Aspirar células tampão e ressuspender a uma concentração de 1 x 10 células por 7 mL de tampão de lavagem. Adicionar 1,5 ul de DNase II por mL de células antes de filtrar através de um coador de 40 uM de células de nylon. Mover as células a várias 5 mL redondos tubos de polipropileno de fundo com não mais do que 3,5 mL por tubo. Ressuspender as células controle de compensação em 300 uL de tampão de lavagem. </li><li> Defina a compensação em MoFlo citômetro de fluxo para minimizar a detecção cruzada pela, PE APC e PE-Cy5 filtros. Definir portas para classificar iTregs (CD25 CD127 Hi -/LOW CD45RA - células), virgens (CD25-CD45RA +) e memória (CD25 - CD45RA -) células T em 5 mL tubos de fundo redondo de isopor contendo 1 mL soro de bezerro recém-nascido. </li></ol> 5. Ensaio de supressão <ol><li> Faça SUPPRession meio de ensaio por adição de 100 U / mL de penicilina, 100 ug / mL de estreptomicina, 5 ng / mL de IL-2 e 2 ng / mL de TGF-β ao AIM-V. </li><li> No dia do ensaio, purificar CD4 + de células T heterólogas a partir de buffy coat, como indicado nos passos 1 e 2. Estas serão as células alvo para o ensaio de supressão e não contém células CD25 + Treg, como pode ser visto na Figura 2, dia 0. </li><li> Células de etiqueta com CellTrace kit como as instruções do fabricante, excepto utilizando apenas 1 ul de solução-mãe 5 mM por mL de células, em vez de 2 uL. Mantendo fora da luz directa, adicionar 18 uL de DMSO a fornecida pelo kit CellTrace para um frasco de CFSE para fazer uma solução estoque de 5 mM. Ressuspender o número necessário de células alvo (até um máximo de 1 x 10 7) em pré-aquecido PBS + 0,1% (w / v) de BSA para uma concentração final de 1 x 10 6 células / ml. Adicionar 1 mL de 5 mM CFSE por mL de células e incubar em um banho de água 37 ° C durante 5 minutes. Adicionar 5 volumes de completa, gelada RPMI com FBS 10% para extinguir a coloração e incubar em gelo durante 5 minutos. Lave as células duas vezes mais com frio RPMI completo e ressuspender 1 x 10 células por 5 100 uL de meio de ensaio de supressão. </li><li> Grânulos inspector Treg supressão são a uma concentração stock de 2 x 10 7 grânulos / mL. Pellet um número de pérolas igual ao número total de células por experimento por centrifugação rápida em um tubo de Eppendorf. Lavar uma vez com RPMI grânulos e re-sedimento. Após a aspiração de RPMI, grânulos Ressuspenda de modo que a quantidade apropriada de grânulos por poço estão em 8 uL de meio de ensaio de supressão. </li><li> Para uma placa de fundo redondo bem 96 cultura de tecidos, adicionar CFSE coradas células (1 x 10 5 células / mL), grânulos de inspector e células polarizadas e ordenadas (1 x 10 5 células / mL) em meio de ensaio fresco de supressão de um alvo desejado (manchado CFSE): razão (ordenadas) efectora em um volume final de 200 uL. Todas as condições são definidas em tripliCates. </li><li> Preparar a primeira de duas condições de controlo por adição de 100 uL de células coradas CFSE, 8 uL de pérolas de inspector e 1 x 10 5 de fresco, de células não coradas em 92 uL de meio de ensaio supressor por poço. Preparar o segundo controlo com os mesmos componentes celulares, como acima, mas sem Tregs grânulos inspector. </li><li> Cobrir a placa em folha de alumínio e incubar a 37 ° C / 5% de CO2 durante cinco dias. </li><li> No escuro, colete células de cada poço por pipetagem e coloque em um tubo de 5 mL de poliestireno de fundo redondo. Centrifugar células a 500 xg durante 5 minutos a 4 ° C, aspirado meios, e ressuspender em 300 ul de FACS frio tampão de lavagem a partir do passo 4. Analisar o primeiro 3 x 10 4 CFSE + eventos ao vivo a partir do portão de linfócitos representando as células-alvo em um histograma com software da Quest Cell. </li></ol> 6. Os resultados representativos Exemplo de pseudo de citometria de fluxo pontilham parcelas ao longo de um tempo de cinco dias-coudiferenciação iTreg rse monitorização com base na relação co-expressão de CD25 com FoxP3, CTLA-4 e CD45RA pode ser visto na Figura 2. O histograma na Figura 3 mostra um ensaio de supressão sucesso, em que ordenadas iTregs (CD25 Hi CD45RA - CD127 células -/LOW). São apenas o subconjunto de uma cultura de cinco dias, que adquiriu capacidade reguladora / supressor A Figura 4 mostra a indução de Tregs a partir de uma piscina ingénuo de células T (painéis superiores) e uma memória de pool de células T (painéis inferiores), após cinco dias de cultura em meio de iTreg padrão. CFSE coloração de células iniciais demonstram que tanto as células T naive (painel superior direito) ou memória (painel inferior direito) para diferenciar iTregs (mais FoxP3-células que expressam) somente após várias rodadas de divisão celular. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3738/3738fig1.jpg" /> Figura 1. Esquemática do procedimento experimental. PBMCs are separados do sangue periférico humano através de centrifugação de gradiente de antes da seleção negativa magnética de células CD4 + CD25 - células T. Depois de cinco a seis dias em cultura, as células submetidas FACS e são co-incubados com heterólogos CFSE células alvo marcadas para medir a actividade supressora. <img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/3738/3738fig2.jpg" /> A Figura 2 humana purificada CD4 + primárias CD25 -. Células T são cultivadas em meio iTreg. Uma alíquota de células são recolhidas apenas depois do isolamento (dia 0) e nos dias 1, 3 e 5 de cultura de células para monitorizar o progresso de CD45RA, FoxP3, CTLA-4 e CD25 marcadores. O perfil corresponde a iTreg CD45RA -, FoxP3 Hi, Hi CTLA-4 e CD25 Hi (em destaque na janela de gráfico). <img alt="A Figura 3" src="/files/ftp_upload/3738/3738fig3.jpg" /> Figura 3. Purificada CD4 + CFSE lacélulas Beled (1 x 10 5 / poço) são cultivadas com Tregs grânulos inspector de supressão, na presença de ordenados células de memória, ou ingénuo iTreg (3 x 10 4 / poço). Após cinco dias, as células são colhidas e do perfil de CFSE das células coradas é analisada por citometria de fluxo. A presença de células iTreg completamente abolida a proliferação de células T CD4 +. Os números são indicativos de percentagem de células CFSE-rotulados que tenham sido submetidos a divisão. <img alt="A Figura 4" src="/files/ftp_upload/3738/3738fig4.jpg" /> Figura 4 purificada humana primária ingênuo. (CD4 + CD25 - CD45RA +) e memória (CD4 + CD25 - CD45RO +) células T são corados com CFSE e cultivadas em iTreg médio. Após cinco dias, as células são fenotipado e as taxas de divisão celular estimado. Como indicado na Figura 2, o subconjunto iTreg diferenciados a partir de ambos os subconjuntos corresponde àCD45RA - CD25 FoxP3 Hi Hi e CTLA-4 Hi (dois últimos não mostrado). Perfis de coloração comparativos CFSE identificar iTregs (aqui como mais elevados nas células que expressam Foxp3 T) como as células mais proliferativas durante a cultura de cinco dias.

<ol>
	<li>Powrie, F., Correa-Oliveira, R., Mauze, S., Coffman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+interactions+between+CD45RBhigh+and+CD45RBlow+CD4++T+cells+are+important+for+the+balance+between+protective+and+pathogenic+cell-mediated+immunity.">Regulatory interactions between CD45RBhigh and CD45RBlow CD4+ T cells are important for the balance between protective and pathogenic cell-mediated immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 179, 589-600 (1994).</li><li>Tarbell, K. 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Os autores não têm nada a revelar.

Enquanto a transferência Treg promissora terapêutico no combate enorme rejeição do enxerto autoimunidade e outras desordens imunitárias ou inflamatórias mediadas, métodos para a sua geração eficiente e manutenção estável ainda não tenham sido desenvolvidos. Como apenas 1-5% de circulação de células T humanas são Tregs, a sua expansão controlada e diferenciação supera esta escassez como um impedimento principal da aplicação de Tregs na clínica. Por outro lado, como aprendemos com o julgamento TGN14...

<table border="1"><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Lymphoprep </td><td> Axis-Shield </td><td> 1114547 </td><td> Manter a temperatura ambiente </td></tr><tr><td> Centrífuga de bancadas refrigerado </td><td> Eppendorf </td><td> 5810R </td><td></td></tr><tr><td> Brilhante-Line hemocitômetro </td><td> Hausser Científico </td><td> 3110 </td><td></td></tr><tr><td> CD4 + T EasySep Humanos Kit Enriquecimento celular </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 19052 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep Humanos da Memória + T CD4 Kit Enriquecimento celular </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 19157 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep Humanos CD4 + T Naïve Kit Enriquecimento celular </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 19155 </td><td></td></tr><tr><td> The Big Easy EasySep Magrede </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 18001 </td><td> Prata </td></tr><tr><td> 5 mL tubos de poliestireno de fundo redondo </td><td> BD Falcon </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml de centrífuga tubos de polipropileno </td><td> VWR </td><td> 89004-368 </td><td></td></tr><tr><td> 14 mL de polipropileno de fundo redondo Tubos </td><td> BD Falcon </td><td> 352059 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml de centrífuga tubos de polipropileno </td><td> VWR </td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr><td> Anticorpo anti-CD3 humano </td><td> Cell Bio X </td><td> BE0001-2 </td><td> Clone: ​​OKT3 </td></tr><tr><td> 24 Bem celular placa de cultura de poliestireno </td><td> BD Falcon </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 96 Bem fundo redondo placa de cultura de tecidos </td><td> Grenier Bio-One </td><td> 650180 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 com Glutamax-I e tampão HEPES </td><td> Gibco </td><td> 72400 </td><td></td></tr> &lt;tr&gt; <td> Soro fetal de bovino (FBS) </td><td> Gibco </td><td> 16000 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoetanol </td><td> Sigma </td><td> M7522 </td><td></td></tr><tr><td> Recombinante Humana TGF-β1 </td><td> eBioscience </td><td> 14-8348-62 </td><td></td></tr><tr><td> Human IL-2 recombinante </td><td> eBioscience </td><td> 14-8029-63 </td><td></td></tr><tr><td> Albumina de soro bovino (BSA) </td><td> MP Biomedicals Inc. </td><td> 810531 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA 0,5 M </td><td> Amresco </td><td> E177 </td><td></td></tr><tr><td> Rato anti-humano CD25-PE </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-091-024 </td><td> Clone: ​​4E3 </td></tr><tr><td> Rato anti-humano CD45RA-PE-Cy5 </td><td> eBioscience </td><td> 15-0458-42 </td><td> Clone: ​​HI100 </td></tr><tr><td> Rato anti-humano CD127-APC </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-094-890 </td><td> Clone: ​​MB15-18C9 </td></tr><tr><td> DNase II </td><td> MP Biomedicals Inc. </td><td> 190370 </td><td></td></tr><tr><td> MoFlo citómetro de fluxo </td><td> Beckman Coulter </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FlowJo Software </td><td> Árvore Star, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Célula Quest Software Pro </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Recém-nascido Calf Serum </td><td> Gibco </td><td> 16010 </td><td></td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> AIM-V </td><td> Gibco </td><td> 0870112 </td><td></td></tr><tr><td> CFSE CellTrace Kit Proliferação de Células </td><td> Invitrogen </td><td> C34554 </td><td></td></tr><tr><td> Treg Contas Inspetor de Supressão </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-092-909 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilina-Estreptomicina </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> 40 estirpe celular iM Nyloner </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr></table>

generation of induced regulatory t cells from primary human na&iuml;ve and memory t cells

O desenvolvimento e manutenção das células T CD4 + de imunossupressores células T reguladoras (Tregs) contribuem para a tolerância periférica necessária para permanecer na homeostase imunológica com a grande quantidade de antigénios próprios e comensais e no corpo humano. Perturbações no equilíbrio entre Tregs e inflamatórias células T convencionais podem resultar em imunopatologia ou cancro. Embora a injecção terapêutica de Tregs foi mostrado para ser eficaz em modelos murinos de colite 1, diabetes tipo I 2, artrite reumatóide e doença do enxerto versus hospedeiro, 4 várias diferenças fundamentais em humanos versus rato Treg biologia 5 tem, até agora impedida a utilização clínica. A falta de um número suficiente, pureza, estabilidade e especificidade de homing terapêutico Tregs exigiu uma plataforma dinâmica do desenvolvimento Treg humana em que para optimizar as condições para a sua expansão ex vivo 6. Aqui nós Dcircunscrever um método para a diferenciação de induzida Tregs (iTregs) a partir de um único dador de sangue periférico humano, que pode ser dividido em quatro etapas: isolamento de células mononucleares do sangue periférico, a selecção magnética de células T CD4 +, em cultura celular in vitro e fluorescência activado separação de células (FACS) de subconjuntos de células T. Uma vez que o factor de transcrição Treg assinatura P3 caixa forkhead (FoxP3) é um factor de transcrição induzida por activação em seres humanos 7 e sem outros marcadores únicos existe, um painel de combinatória de marcadores, deve ser utilizado para identificar as células T com actividade supressora. Depois de seis dias em cultura, as células no nosso sistema pode ser demarcada em naive células T, células T de memória ou iTregs com base na sua expressão relativa de CD25 e CD45RA. Como as células T de memória e naïve têm diferentes requisitos de polarização relatados e plasticidades 8, pré-triagem da população inicial de células T em CD45RA + e CD45RO + subconjuntos pode be usado para examinar essas discrepâncias. Consistente com os outros, nossa CD25 Hi CD45RA - níveis elevados de iTregs expressas FoxP3 9, GITR e CTLA-4 11 e baixos níveis de CD127 12. Na sequência de FACS de cada população, as células resultantes podem ser utilizados num ensaio de supressor que avalia a capacidade relativa para retardar a proliferação de carboxifluoresceína succinimidil éster (CFSE)-rotulado células T autólogas.

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Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&amp;#239;ve and Memory T Cells

Nós descrevemos um método para a geração de células T de memória, regulamentar e ingénuos a partir de um único dador de sangue humano. Tregs polarizada pode ser então comparada com outros subconjuntos de uma variedade de aplicações genéticas e funcionais com homogeneidade genética, incluindo um ensaio de supressão também detalhados aqui.

Geração de Células T reguladoras induzidas a partir de células T humanas primárias Naïve e Memória

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

23.9K visualizações.  University of Kentucky. Nós descrevemos um método para a geração de células T de memória, regulamentar e ingénuos a partir de um único dador de sangue humano. Tregs polarizada pode ser então comparada com outros subconjuntos de uma variedade de aplicações genéticas e funcionais com homogeneidade genética, incluindo um ensaio de supressão também detalhados aqui.