Agradecemos Kristin Johnson para o trabalho gráfico.

Todos os protocolos que envolvem animais são apresentadas e aprovadas pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais Institucional do Hospital Infantil de Boston e são conduzidas de acordo com as recomendações da Associação de Avaliação e Acreditação do Laboratório Animal Care (AAALAC). Certifique-se de usar a instrumentação estéril e techniqure asséptica durante a realização do procedimento. 1 Preparação de peletes <ol><li> Pesar 10 mg de sucralfato e 60 mg de Hydron com a espátula unbent estéril. Coloque em microtubos separados. </li><li> Coloque um pedaço quadrado de 1 cm da malha em um estéril prato de 10 cm. Inverter tão malha repousa sobre tampa rasa. Reserve. </li><li> Adicionar 500 mL de etanol para o hídron vórtice e para, pelo menos, 10 min. </li><li> Adicionar a quantidade apropriada de factor de crescimento (padrão: 20 mg para o bFGF, 50 ng de VEGF) para o sucralfato e vortex brevemente. Fator de crescimento da loja em um-80 ° C congelador a uma concentração de 1 mg / ml. Volumes de líquido adicionados deve ter um mínimo de 20 ul de assegurar o sucralfato é totalmente humedecido mas não deve exceder 50 ul. Maior volume faz com que a evaporação do líquido no próximo passo difícil. </li><li> Coloque a mistura de sucralfato no evaporador centrífugo definido em baixo até que a mistura está completamente seco, normalmente de 30-50 minutos, dependendo do volume do líquido utilizado. <ol><li> Verificar-se a mistura para a humidade residual com a extremidade cónica de uma espátula esterilizada. A mistura deve se sentir &quot;crocante&quot;. </li></ol></li><li> Utilizar a extremidade pontiaguda da espátula para separar a mistura de sucralfato no interior do tubo. </li><li> Adicionam-se 10 ul da hídron ao sucralfato. <ol><li> Devido à natureza viscosa de Hydron, cortar a extremidade de uma pipeta de ponta de 200 mL e, em seguida, extrair e libertar os 10 ul antes pipetando para cima e de novo para a adição de sucralfato. </li></ol></li><li> Rapidamente use briga dobradoula para misturar o Hydron e sucralfato e retire do tubo. <ol><li> Reunir a mistura ao longo do lado inferior da ponta de uma espátula e, em seguida, dobrado rodar o tubo, enquanto o desenho da espátula para fora ao longo da parede do tubo. A mistura vai secar rapidamente assim que esta etapa deve ser feito de forma eficiente. </li></ol></li><li> Espalhe a mistura sobre a malha preparado usando uma pinça para segurá-la no lugar. A mistura deve ser uma camada uniforme e encher os orifícios da malha. </li><li> Imergir a espátula dobrada para dentro do tubo que contém hídron e usá-lo revestimento de ambos os lados da malha. </li><li> Coloque a malha revestido inclinando-se sobre o lado contra borda do prato e deixe secar à temperatura ambiente durante 30-45 min. </li><li> Coloque a malha em freezer -20 ° C ou proceder de imediato para a próxima etapa. Mantenha malha dentro prato. </li><li> Coloque prato de 35 mm no interior do prato de petri maior, tampa. Utilizar o par de pinças para puxar cuidadosamente as fibras da malha entre si sobre o prato 35 milímetros. Pelotas Stray cum ser recolhidos a partir do prato maior no final. <ol><li> Verifique pelotas para a uniformidade sob escopo. O processo produz cerca de 250 pastilhas, assim, a dose padrão por pellet de bFGF e VEGF é de 80 ng e 200 ng, respectivamente. </li></ol></li><li> Pelotas de lojas em 35 milímetros prato em freezer -20 ° C por até 3 meses. </li></ol> 2. implantação cirúrgica de Pelotas <ol><li> Configurar uma área cirúrgica sob microscópio cirúrgico. </li><li> Anestesiar o mouse com avertin (400-500 mg / kg, intraperitoneal) e posicione o mouse sob o microscópio para que olho é visível. Realize toe pitada de garantir um nível suficiente de anestesia. </li><li> Anestesiar o olho do rato, colocando uma gota de solução proparacaina cima globo ocular. Aguarde 20-30 segundos e bata com uma compressa de gaze. </li><li> Proptose o olho do rato com o # entorpeceu um joalheiro fórceps sendo certo para deixar a pele entre fórceps e olho. É importante para avaliar a pressão aplicada correctamente.60; Segurando o olho com muita força fará com que ele se torne vermelha e irritada, enquanto muito solta um porão permitirá que olho para mover durante a cirurgia. </li><li> Utilizar a 30 ° microlanceta para fazer uma incisão na córnea de aproximadamente 1 mm do limbo. A incisão deve ser de 1-2 mm de comprimento. Incisão deve ser profundo o suficiente para penetrar além da camada epitelial em midstroma mas não tão profundamente para romper o olho. </li><li> Utilizar a faca von Graef para fazer um bolso perpendicular à incisão. <ol><li> Deslize a faca sob a camada córnea no local da incisão e trabalhar suavemente faca e movê-lo ao longo da incisão para ampliar o espaço, formando assim o bolso. Isso ajuda a mover o rato, assim como para ser capaz de trabalhar com a curvatura do olho. Tenha cuidado para não empurrar para baixo com a ponta para evitar a ruptura do olho. </li></ol></li><li> Molhe o fórceps # 5 do joalheiro com proparacaina e pegar uma bolinha para fora do prato. Coloque um sedimento no olho. </li&gt; <li> Umedeça a faca von Graef com proparacaina e transferir algumas de líquido sobre pellet para torná-lo elástico e flexível. Retire o excesso de umidade com gaze ou cotonete. </li><li> Insira o pellet no bolso usando a faca von Graef para empurrá-lo para dentro abaixo da camada córnea. Uma vez que todo o sedimento está dentro, execute o lado plano de von Graef faca sobre o local para verificar se o pellet é segura. </li><li> Cubra o olho com pomada antibiótica tripla. </li><li> Vire o mouse e repetir a cirurgia no olho oposto. </li></ol> 3 Quantificação de neovascularização da córnea. Deixe os animais para desenvolver vasos durante um determinado período de tempo. O dia de peneiração navio depende do factor de crescimento utilizado. Grau de bFGF no dia 5 e o mais fraco de VEGF no dia 6 o dia da implantação é o dia 0. <ol><li> Anestesiar o mouse com avertin (400-500 mg / kg, intraperitoneal). </li><li> Use o microscópio lâmpada de fenda para grading. Uma ocular tem uma retícula, linhas dentro da ocular usado como um auxílio de medição para quantificar comprimento do vaso e distância ao redor da circunferência do olho que as embarcações surgiram. <ol><li> Mantenha o mouse na frente do escopo, posicionando o mouse para que olho é visto na ocular com pellet em frente. Estabilize a cabeça entre o polegar eo dedo indicador de modo a pele é apertada no rosto e olho é ligeiramente proptose. </li></ol></li><li> Colocar o eixo y do retículo ao longo do vaso de limbo directamente abaixo do pellet. Meça o comprimento dos navios de ramificação para cima em direção pellets. Grave esta medida em décimos de milímetros e designar comprimento do vaso (VL) (Figura 1A). </li><li> Vire o mouse ou a bolsa para que a distância ao redor do olho que estes navios têm brotou se torna claro. É mais fácil pensar no olho, como um relógio, com intervalos de 1 a 12 designar este número relógio hora (CH) (Figura 1B). Ele pode ser um número inteiro ou fracções de 0,25 (por exemplo, 2, 2,25, 2,5 ou 2,75). Nota: CH é subjetiva. Por exemplo, alguns podem medir a distância em torno do olho para incluir todos os vasos germinados a partir do limbo, enquanto outros podem parar a medição no ponto onde o comprimento embarcação é metade máxima. O importante é ser consistente com a forma como se escolhe a classe. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1.jpg" /> Figura 1 A quantificação da neovascularização da córnea. (A) de 80 ng de bFGF pelota implantada em ratos C57BL / 6J rato mostrando lâmpada de fenda retícula orientada para medir o comprimento do navio. VL = 0,9 mm. (B) O mesmo mostrando olho lâmpada de fenda bolsa rodada para medir relógio hora. CH = 3,25. Área do vaso Calculado = 1,84 milímetros 2. Estas imagens digital ter sido aumentada para permitir a adição de esquema bolsa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada.</a> <ol start="5"><li> Calcule a área do vaso (VA) usando a fórmula a seguir, que é baseado na área de uma oval (Nota, é útil para manter isso em mente quando de classificação.) Expresso VA em milímetros quadrados. A fórmula é a seguinte: Hora x 0,2 π = área navio navio comprimento x Relógio </li></ol>

<ol>
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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+response+of+FGF-2+for+lymphangiogenesis.">Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).</li><li>Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+suppression+of+angiogenesis+following+radiation+exposure+is+independent+of+hematopoietic+reconstitution.">Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution.</a> Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).</li><li>Turner, P. V., Albassam, M. 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Os autores não têm nada a revelar.

Existem várias etapas críticas realização de um ensaio de córnea bem sucedido. A primeira é fazer pellets uniformes, capazes de ser implantado e estimular vasos. As partes mais importantes da preparação de pelotas são 1), utilizando o factor de crescimento isento de transportador; 2) garantir uma boa mistura de fator de crescimento com o sucralfato e Hydron e 3) movendo a mistura final rapidamente, mas cuidadosamente do tubo eppendorf à malha, onde as pelotas são lançados. Recomenda-se que os aglomerados de ...

O processo de angiogênese, formação de novos vasos sanguíneos formam os pré-existentes, é altamente complexa e é regulada por vários fatores endógenos que controlam diferentes etapas do surgimento navio e morfogênese. A angiogênese é acionado devido a uma mudança no equilíbrio entre fatores pró e anti-angiogênicos, um equilíbrio que normalmente mantém a vascularização em um estado inativo. A angiogénese ocorre em adultos em determinadas condições fisiológicas tais como durante o ciclo do ovário ou do sexo feminino em processos de reparação, tais como cicatrização de feridas e regeneração de tecidos. No entanto, é também uma característica de várias patologias, incluindo neoplasias, doenças autoimunes e doenças inflamatórias. O envolvimento da angiogênese nestas condições fisiológicas e patológicas torna um assunto importante para a pesquisa e um alvo atraente para a terapia. Devido à complexidade da angiogênese e do envolvimento de vários cells e fatores no processo, incluindo as células endoteliais, pericitos, células circulantes e células do estroma, in vitro modelos continuam a ser limitados e não pode recapitulam o microambiente única in vivo. A principal ensaios in vitro de angiogênese são amplamente focada na observação de efeitos diretos sobre as células endoteliais e medir determinadas etapas no processo de angiogênese em condições controladas. Estes ensaios incluem a quantificação da proliferação celular endotelial 1, migração 2, a formação da rede 3, a formação do tubo 4 e brotação de esferóides 5. Modelos ex vivo, ao contrário dos in vitro, são mais complexos e incorporar vários tipos de células de tecido, por exemplo, ser o ensaio do anel aórtico 6. No entanto, como os outros sistemas, que podem não captar a contribuição de células circulantes e o estroma natural das células endoteliais como existe in vivo. Tentativaspara estudar a angiogênese sob fluxo para imitar o ambiente in vivo são realizados utilizando sistemas microfluídicos 7, no entanto, mesmo esses ensaios, embora muito melhor, ainda não consegue dar conta de todos os compartimentos existentes in vivo. Devido às limitações do in vitro, ex vivo e modelos de angiogénese, em modelos in vivo, continuam a ser as escolhas mais fiáveis ​​para estudos de angiogénese. Exemplos destes modelos incluem a implantação de câmaras transparentes, &quot;janelas&quot;, que permitem a visualização de vasos sanguíneos que crescem sob microscópio 8, implantes subcutâneos injectáveis, tais como a formação de matrigel e recipiente em tecidos normais, tais como a orelha de rato e da membrana corioalantóica de frango (CAM ). No entanto, um dos modelos de angiogénese in vivo mais aceitáveis ​​e quantitativos é o ensaio de microbolsa neovascularização descrito aqui, o qual explora o naturalmente avascularcórnea como uma &quot;tela&quot; para visualizar e avaliar o novo crescimento angiogênico 9. Aqui nós descrevemos o ensaio microbolsa córnea desenvolvida em camundongos. Inicialmente, o modelo foi utilizado para medir a estímulos angiogênicos inespecíficos em córneas de coelhos. Isto foi feito através da introdução de peças tumorais no humor aquoso da câmara anterior do olho de coelho e medido a neovascularização induzida por tumores 11. No entanto, o ensaio foi mais tarde evoluiu para estudar os efeitos de crescimento específico fatores 10 para melhor especificar e padronizar o efeito angiogênico. A fim de libertar o factor de crescimento do olho, peletes de libertação lenta que contêm quantidades conhecidas de factores de crescimento angiogénicos foram usados ​​em vez de tecidos. A disponibilidade de proteínas recombinantes purificadas angiogénicos, tais como VEGF ou bFGF permitiu a sua utilização como alvos específicos de angiogénese modulaters 12. Inicialmente, o ensaio eralargamente utilizado em coelhos, que são mais fáceis de trabalhar devido ao seu tamanho, mas mais tarde o modelo foi traduzido em ratos; um modelo de animais mais pequenos e menos caros. Mudando de coelho para ratos proporcionou uma importante vantagem de ser capaz de usar animais geneticamente manipulados, criando assim uma nova área de pesquisa sobre os componentes genéticos que afetam a angiogênese 13. Além do uso de mais aceitável de ensaio córnea em estudar angiogénese, outros processos biológicos também podem ser investigadas utilizando ensaios modificados. Por exemplo, se tornaram possíveis estudos de lymphangiogenesis através da implantação de baixa dose de pelotas bFGF que permitiu a visualização dos vasos linfáticos por meio de marcadores moleculares específicos 14. Além disso, este ensaio tem fornecido um meio para avaliar os efeitos da radiação na angiogénese 15. Em suma, o ensaio microbolsa angiogênese corneal é uma quantitativa, reproducible, avaliação flexível de angiogênese in vivo. Uma vantagem principal deste ensaio é que a medição dos vasos de fundo é desnecessário, porque os vasos crescem no tecido avascular naturalmente. Descrevemos aqui o protocolo deste ensaio em detalhes e discutir diferentes cenários que podem ocorrer. O ensaio consiste em três segmentos distintos. A seguir, descreveremos a preparação de peletes de crescimento de factores, inclusive, o implante cirúrgico subsequente e, finalmente, o método utilizado para quantificar o crescimento neovascular resultante.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="612">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Section 1: Pellet preparation</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucralfate</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#S0652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hydron (aka Poly(2-Hema))</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#P3932-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:111px;">Pharmco Products Inc</td>
			<td style="width:119px;">#111000200CSGL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Growth factors:</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Must be carrier-free (no bovine serum albumin(BSA))</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;Fibroblast growth factor (FGF)</td>
			<td style="width:111px;">PeproTech</td>
			<td style="width:119px;">#AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vascular endothelial growth factor (VEGF)</td>
			<td style="width:111px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:119px;">#293-VE-050/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 mm dish</td>
			<td style="width:111px;">Becton-Dickson</td>
			<td style="width:119px;">#353001</td>
			<td>Used for storage of pellets</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 cm petri dish</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">#25384-342</td>
			<td>Used as work surface for preparing pellets</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mesh</td>
			<td style="width:111px;">Sefar America</td>
			<td style="width:119px;">#03--300/51</td>
			<td>300 um nitex nylon, cut into cm square pieces and sterilzed in autoclave</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Spatulas</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">#21-401-10</td>
			<td>Use tapered end of one to break up pellet mixture. Bend tapered end of other to help remove mixture from microcentrifuge tube.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">#05-408-146</td>
			<td>One for hydron, one for sucralfate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #5</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2315E</td>
			<td>Need 2 for pulling mesh apart</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifugal evaporator</td>
			<td style="width:111px;">ThermoSavant</td>
			<td style="width:119px;">DNA110 SpeedVac</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Section 2: Surgical implantation of pellets</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.5% Avertin</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>General anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Proparacaine hydrochloride ophthalmic solution 0.5%</td>
			<td style="width:111px;">Falcon</td>
			<td>NDC# 6131401601</td>
			<td>Eye anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Triple Antibiotic Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:111px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:119px;">NDC# 2420878055</td>
			<td>Contains neomycin, polymixin and bacitracin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ophthalmic microknife, 5 mm</td>
			<td style="width:111px;">Surgistar</td>
			<td style="width:119px;">#924501</td>
			<td>30 degree angle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">von Graef knife</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#3401E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #1</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2301E</td>
			<td>Must be blunted with sharpening stone for proptosing eye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #5</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2305E</td>
			<td>For picking up pellets and placing on eye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small curved scissors</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#5636E</td>
			<td>For trimming whiskers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For blotting eye after proparacaine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Section 3: Grading of Corneal Neovascularization</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.5% Avertin</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>General anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Slit lamp</td>
			<td style="width:111px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">FS-2</td>
			<td>Needs an ocular with a reticule to assist in measuring</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the corneal micropocket assay: a model of angiogenesis in the mouse eye

O ensaio microbolsa córnea do rato é um ensaio robusto e quantitativa in vivo para avaliar a angiogénese. A utilização de peletes de libertação lenta padronizadas, contendo factores de crescimento específicos que provocam o crescimento de vasos sanguíneos para a córnea naturalmente avascular, a angiogénese pode ser medida e quantificada. Neste ensaio, a resposta angiogénica é gerada ao longo de vários dias, dependendo do tipo e dose de factor de crescimento utilizado. A indução de neovascularização é normalmente desencadeada por qualquer factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF) ou factor de crescimento endotelial vascular (VEGF). Através da combinação destes factores de crescimento com o sucralfato e hídron (poli-HEMA (poli (metacrilato de 2-hidroxietil))) e lançando-se a mistura em grânulos, que podem ser implantados cirurgicamente no olho do rato. Estes peletes uniformes-se lentamente libertar os factores de crescimento ao longo de cinco ou seis dias (bFGF ou VEGF, respectivamente), que permite a resposta angiogénica suficiente necessário para a área do vaso quantification utilizando uma lâmpada de fenda. Este ensaio pode ser usado para diferentes aplicações, incluindo a avaliação de fármacos moduladores angiogénicos ou tratamentos, bem como a comparação entre diferentes origens genéticas que afectam a angiogénese. Um investigador perito depois de praticar este ensaio pode implantar um sedimento em menos de 5 minutos em cada olho.

Os resultados típicos para bFGF e VEGF nos peletes normais baixos angiogénicos C57BL / 6J são mostrados na Figura 2A e B, respectivamente. Figura 2E mostra a distribuição normal de área do vaso (VA) em C57BL / 6J estirpe com doses variáveis ​​de crescimento esses fatores. 80 ng de bFGF peletes normalmente resultam em um VA de cerca de 2,0 mm 2, apesar de os valores no intervalo de 1,8-2,4 mm 2 são aceitáveis. 200 ng pelotas de VEGF inc...

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The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

O protocolo descreve o ensaio de microbolsa corneal conforme desenvolvido em ratinhos.

A córnea microbolsa Ensaio: Um modelo de angiogênese no mouse Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

16.5K visualizações.  Boston Children's Hospital.  O protocolo descreve o ensaio de microbolsa corneal conforme desenvolvido em ratinhos. 