Somos gratos pela instrumentação e laboratório fornecidos por estender nossa gratidão à faculdade de medicina da Mongólia da Universidade Médica da Mongólia Interior, China. Este estudo recebeu apoio financeiro da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (Grant No. 81760762) e), o Projeto da Universidade Médica da Mongólia Interior da China (Grant No. YKD2022MS074), e o Projeto de Pesquisa Científica do Ensino Superior na Mongólia Interior, China (Grant No. NJZY22661) e o Projeto de Fundo Aberto do Laboratório Chave de Medicina Chinesa e Mongol na Região Autônoma da Mongólia Interior, China (Grant No. MYX2023-K07).

Os protocolos experimentais receberam aprovação do Comitê de Ética em Cuidados com Experimentos Animais da Universidade Médica da Mongólia Interior (YKD202301172) e aderiram às diretrizes do National Institutes of Health para cuidados e ética animal. O número de licença do nosso centro de animais é NO.110324230102364187. Vinte e quatro ratos Sprague-Dawley (SD) machos, cada um com 8 semanas de idade (200 g ± 20 g), foram adquiridos e alojados em ambiente controlado com temperatura de 22°C ± 2°C e umidade de 55% ± 15%. Alimente os ratos com uma dieta de manutenção de roedores e água pura com espigas de milho como cama. Os ratos foram submetidos a um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h por 1 semana antes da experimentação.
1. Estabelecimento do modelo de rato CUMS
<ol><li>Agrupamento<ol><li>Divida os 24 ratos aleatoriamente em 2 grupos: o grupo controle (CON), que não será exposto a isolamento ou estresse, e o grupo modelo (MOD). Cada grupo contém 12 ratos.</li>
		<li>Alojar os ratos em gaiolas padrão medindo 55 cm x 40 cm x 20 cm, com 6 ratos por gaiola. Manter a atribuição da gaiola durante todo o período de aclimatação, salvo indicação em contrário.</li>
		<li>Encha cada gaiola de criação com cama nova e substitua-a duas vezes por semana.</li>
		<li>Realize um período de aclimatação de 1 semana. Permita que os ratos tenham acesso irrestrito a comida e água, exceto durante a aplicação do estressor CUMS. Mantenha um ambiente constante com temperatura de 22°C ± 2°C, umidade de 55% ± 15% e um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h das 08:00 às 20:00, salvo indicação em contrário.</li>
		<li>Antes de iniciar o experimento, manuseie os ratos diariamente para aclimatá-los ao pesquisador e minimizar o estresse adicional durante a fase experimental.</li>
	</ol></li>
	<li>Isolamento com estresse leve imprevisível crônico<ol><li>Coloque simultaneamente os grupos MOD e CON em salas separadas. Alojar os ratos do grupo MOD individualmente, enquanto mantém os ratos do grupo CON juntos. Mantenha todas as outras condições constantes.</li>
		<li>Implemente um regime de estressor de 28 dias25. Para evitar a habituação e garantir a imprevisibilidade do estressor, administre um estressor aleatório por dia, evitando o uso do mesmo estressor em dias consecutivos.</li>
		<li>Aplique aleatoriamente um dos nove estressores a seguir 26,27 em dias diferentes: 24 h de privação de água, 24 h de privação de comida, enchimento úmido, inclinação da gaiola, inversão do ciclo claro/escuro, exposição ao frio a 4 °C, exposição ao calor a 45 °C, 1 min de pinçamento da cauda ou 15 min de agitação a 160 rpm. O desenho específico é descrito na Tabela 1.</li>
		<li>Durante a aplicação do estressor, restrinja o acesso a alimentos e água ao grupo MOD até que o estresse termine, exceto durante a inversão do ciclo claro/escuro. O grupo CON não foi obrigado a restringir a água e a dieta.</li>
	</ol></li>
	<li>Métodos de estresse<ol><li>Inicie o experimento aplicando estímulos de depressão em conjunto com isolamento de 28 dias em todos os ratos, excluindo o grupo controle. Alojar esses ratos em gaiolas individuais. Consulte a Tabela 2 para condições relacionadas a estímulos de depressão.</li>
		<li>Para executar o método de fixação da cauda, prenda a cauda de um rato do grupo MOD prendendo a cauda com um clipe de papel padrão a uma distância de 1-2 cm da raiz da cauda do rato. Meça o tempo de fixação por uma duração de 1 min (n = 12).</li>
		<li>No método de privação de água, retenha a água de um rato do grupo MOD removendo sua garrafa de água e registre por 24 h. NOTA: A hora de início da privação de água foi registrada para que a hora de término pudesse ser calculada com precisão; O comportamento dos ratos durante este período foi observado, incluindo atividade, apetite e estado mental.</li>
		<li>No método de privação alimentar, reter comida de um rato do grupo MOD e registar durante 24 h. NOTA: Registre a hora em que a privação de alimentos começa para que a hora de término possa ser calculada com precisão; Assegurar que os ratos estejam adequadamente hidratados durante este período; e observar o comportamento dos ratos durante este período, incluindo atividade e estado mental, etc.</li>
		<li>Para estimulação fria a 4 °C, coloque um rato do grupo MOD em um balde de água fria e registre por 5 min. Certifique-se de que a temperatura da água permaneça consistente durante todo o teste. Na conclusão do experimento, seque o rato com um soprador e devolva-o à sua gaiola original. NOTA: Mantenha a temperatura da água fria a 4 °C usando um termômetro e cubos de gelo para regular a temperatura da água quando ela subir. A água deve ser trocada regularmente para garantir que a qualidade da água seja limpa e a temperatura constante. Ao nadar, todos os membros e troncos dos ratos devem ser imersos em água fria, exceto a cabeça. A profundidade da água deve ser maior que o comprimento do corpo do rato para evitar que o rato pule para fora da água devido ao contato com o fundo do balde.</li>
		<li>Para administrar estresse térmico de 45 °C, coloque um rato do grupo MOD em uma incubadora e registre por 5 min, garantindo que a temperatura permaneça estável durante todo o teste.</li>
		<li>Na inversão do ciclo claro-escuro, envolva a gaiola em um pano preto por 1 h para simular a escuridão diurna. Em seguida, ilumine a gaiola por 12 h durante a noite para imitar a luz do dia. Registre o comportamento do rato, a ingestão de comida e água e os padrões de sono por 24 horas.</li>
		<li>Para o experimento de preenchimento úmido, introduza 200 mL de água em uma gaiola contendo 100 g de acolchoamento. Alojar um rato do grupo MOD na gaiola molhada e registrar o comportamento dos ratos sob estresse da cama úmida, incluindo atividade, apetite, ingestão de água, etc. Observe se há comportamentos anormais ou reações desconfortáveis, como a condição da pele e do cabelo dos ratos, que podem ser causados pelo acolchoamento úmido, e registre-os a tempo para análise subsequente por 24 horas. Após o teste, seque o rato com um soprador e coloque-o de volta em uma gaiola com aparas de madeira frescas.</li>
		<li>No método de inclinação da gaiola, coloque um rato do grupo MOD em uma gaiola inclinada em um ângulo de 45° contra uma parede e registre por 24 h. Use a estrutura da estrutura da gaiola para ajustar o ângulo e prender a gaiola no lugar. NOTA: Calcule o tempo do início ao fim e observe o comportamento dos ratos durante o período de inclinação da gaiola, incluindo atividade, apetite e estado mental, e certifique-se de que o ângulo da gaiola inclinada esteja definido corretamente e permaneça estável para garantir a precisão e reprodutibilidade do experimento.</li>
		<li>Para agitação em alta velocidade, coloque um rato do grupo MOD em um agitador mecânico ajustado para 160 rpm e registre o rato por 15 min. Métodos de teste comportamental são posteriormente utilizados para avaliar o estabelecimento bem-sucedido do modelo.</li>
		<li>Depois de aplicar estressores, reposicione as gaiolas do grupo MOD da sala CUMS de volta para a sala de alojamento. Durante o período de exposição ao estresse de 4 semanas, mantenha o grupo CON em suas gaiolas domésticas situadas na sala de alojamento.</li>
	</ol></li>
	<li>Precauções durante os experimentos<ol><li>Transfira as gaiolas do grupo MOD de volta para a sala de alojamento geral após a aplicação do estressor na sala CUMS.</li>
		<li>Monitoramento animal durante a modelagem CUMS<ol><li>Durante o clampeamento da cauda, é provável que o animal lute devido à estimulação induzida. Durante todo esse período, monitore continuamente o clamp. Se ele se soltar, pause o cronômetro, reaplique o clamp e retome o cronômetro por 1 min.</li>
			<li>Não imponha privação de água e estressores de cama molhada simultaneamente. NOTA: Evitar a imposição simultânea de acolchoamento úmido e privação de água ajuda a manter a integridade experimental, reduz variáveis de confusão e promove o bem-estar animal.</li>
			<li>A temperatura corporal do animal e a temperatura ambiente podem aumentar a temperatura da água durante a natação em água fria. Portanto, ajuste adicionando água gelada ou cubos de gelo para manter uma temperatura constante da água.</li>
			<li>Observe os ratos em intervalos de 30 min durante a aplicação dos estressores, exceto durante a reversão diurna. Preste atenção especial aos sinais de angústia incomum, como tremores, letargia ou falta de movimento. Se tais sintomas forem observados - particularmente hipotermia potencial durante natação em água fria a 4 ° C e cama molhada - remova imediatamente o rato do estressor. NOTA: Remova os animais experimentais do estudo quando eles tiverem problemas de saúde, como infecção, trauma grave, comportamentos agressivos, mobilidade anormal, etc., As condições para remover os animais do estudo geralmente giram em torno de proteger sua saúde e segurança, garantindo a integridade dos resultados experimentais.</li>
			<li>Realize inspeções diárias em busca de feridas ou outras anormalidades físicas ou comportamentais em cada rato. Se forem observadas anomalias, consultar o veterinário do laboratório para determinar se o rato deve ser excluído da experiência.</li>
			<li>Pese cada rato a cada 3 dias. Se um animal perder mais de 20% do seu peso corporal basal antes da alimentação, deve ser excluído da experiência.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. Testes comportamentais
<ol><li>Para começar, administre os estímulos de depressão em conjunto com o isolamento por 28 dias a todos os ratos, excluindo o grupo controle. Alojar os ratos em gaiolas individuais. Consulte a Tabela 2 para obter detalhes sobre as condições dos estímulos de depressão.</li>
	<li>Para o teste de campo aberto, divida uma caixa preta em 25 seções quadradas de área igual. Instale um sistema de análise de rastreamento de vídeo na caixa. Coloque o rato no quadrado central e monitore suas atividades horizontais e verticais por um período de 5 min. NOTA: As dimensões da caixa são 500 mm x 500 mm x 300 mm. Os dados de atividade serão coletados usando o sistema de rastreamento de vídeo para avaliar comportamentos relacionados à ansiedade nos roedores quando expostos a um novo ambiente.</li>
	<li>Posteriormente, contabilize o número de quadrados percorridos pelo rato, usando todas as patas, para quantificar a atividade horizontal. Conte os casos de ficar em pé e se arrumar como indicadores de atividade vertical. Após cada teste, higienize a caixa usando álcool 75% para eliminar quaisquer odores residuais de ratos para testes subsequentes.</li>
	<li>Em seguida, a anedonia é avaliada por meio do teste de preferência por sacarose. Coloque duas garrafas na tampa da gaiola: a garrafa A contém água pura, enquanto a garrafa B contém solução de sacarose a 1%. Permita acesso ad libitum a ambas as soluções para o rato. Pese as garrafas antes e depois do consumo para calcular as taxas de preferência de sacarose de 60 min nos dias 0, 7, 14, 21 e 28. A fórmula é a seguinte: Consumo de sacarose = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65889/65889eq01.jpg" style="margin: auto;"> × 100%</li>
	<li>Para medir a memória espacial e as habilidades de aprendizagem, empregue o teste do labirinto aquático de Morris. Divida a piscina em quatro quadrantes, numerando-os de um a quatro. Coloque uma plataforma de repouso submersa 1 cm abaixo da superfície da água no terceiro quadrante.</li>
	<li>Introduzir leite na piscina para aumentar a opacidade da água e manter uma temperatura da água de aproximadamente 23 °C durante todo o procedimento experimental.</li>
	<li>Coloque cada rato em vários quadrantes do labirinto, permitindo-lhes 120 s para localizar a plataforma oculta. Os ratos devem confiar na memória espacial e nas habilidades de aprendizado para lembrar a localização da plataforma. Depois de descobrir a localização da plataforma, eles podem nadar diretamente para ela. Registre o tempo de latência usando o sistema de rastreamento de vídeo do labirinto aquático Morris.</li>
	<li>Posicione o rato em um local fixo na piscina. Se o sujeito não conseguir localizar a plataforma oculta em 120 s, registre a latência como 120 s.</li>
	<li>Finalmente, remova a plataforma oculta, coloque o rato de volta na água e registre o número de cruzamentos de zona em um período de 120 s.</li>
</ol>3. Análise estatística
<ol><li>Para avaliar diferenças significativas nos parâmetros bioquímicos, empregue a análise de variância (ANOVA) unidirecional seguida pelo teste post hoc de Duncan. Apresente os dados como média ± erro padrão (EP) e considere um valor de p menor que 0,05 como estatisticamente significativo.</li>
</ol>

Estabelecendo e validando um modelo de rato de estresse leve imprevisível crônico

Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.

A depressão é um transtorno mental caracterizado por sintomas como mau humor, falta de prazer e redução de energia30. No campo da pesquisa sobre depressão, o estabelecimento de um modelo animal confiável é crucial para o avanço das intervenções terapêuticas. Dentre os vários modelos animais, o modelo CUMS é particularmente notável por sua alta confiabilidade, validade e congruência com as características da depressão humana31. É adequado para imitar os efe...

O transtorno depressivo maior (TDM) é uma doença mental prevalente, classificada como a terceira principal causa de incapacidade em todo o mundo e afetando mais de 300 milhões de pessoas1,2,3. Notavelmente, estima-se que pelo menos metade dos indivíduos afetados não receba tratamento adequado4. Diante dessa lacuna, os modelos animais servem como uma ferramenta crucial para investigar a etiologia da depressão. Até o momento, existem mais de 20 modelos animais diferentes para depressão5. Dentre estes, o modelo de estresse leve imprevisível crônico (CUMS), refinado por Paul Winer em 1987, é o mais utilizado6. O modelo CUMS opera com base na premissa de que expor roedores a uma gama diversificada de estressores socioambientais leva a sintomas semelhantes a ansiedade, tensão e depressão. A metodologia envolve a exposição dos animais a vários estressores leves ao longo de várias semanas, culminando em uma série de alterações comportamentais, incluindo anedonia e comportamentos depressivos7,8. Essas mudanças são acompanhadas por mudanças nos perfis endócrinos e de neurotransmissores, como uma redução no 5-HT9,10. Esses resultados refletem de perto aqueles observados em humanos diagnosticados com TDM, validando assim a utilidade do modelo. O modelo CUMS é particularmente valorizado por sua eficácia na avaliação de antidepressivos, manifestando altos níveis de validade superficial, estrutural e preditiva11,12. Ao contrário de outros modelos, a CUMS é sensível aos efeitos da administração crônica de antidepressivos monoaminérgicos. Por exemplo, inibidores seletivos da recaptação da serotonina (ISRSs), como citalopram, paroxetina e fluoxetina, demonstraram prevenir e reverter a anedonia em condições de estresse crônico12,13. Além disso, novos antidepressivos de ação rápida, como a cetamina, também demonstraram eficácia nesse modelo14,15. Em contraste, outros testes, como o teste de nado forçado (FST) e o teste de suspensão da cauda (TST), são menos confiáveis para modelar mudanças comportamentais de longo prazo, muitas vezes refletindo adaptações ao estresse agudo, em vez de sintomas duradouros de depressão16. Essas características ressaltam a validade robusta do modelo CUMS na pesquisa sobre depressão. Uma das características mais salientes do modelo CUMS, reconhecido por sua alta confiabilidade nos estudos clássicos, é a anedonia - a incapacidade de sentir prazer ou interesse nas atividades cotidianas17,18. Esse fenômeno é comumente avaliado usando testes de preferência por sacarose, e muitos antidepressivos demonstraram reverter o consumo reduzido de sacarose. Várias outras métricas também são comumente empregadas na literatura do CUMS, incluindo o teste de campo aberto (OFT), que avalia o comportamento motor voluntário, tendências exploratórias e tensão, medindo assim a gravidade da depressão19. Outros testes, como o labirinto em cruz elevado (EPM), avaliam comportamentos semelhantes à ansiedade, o teste do labirinto aquático de Morris (MWM) examina o funcionamento cognitivo20, e o FST avalia a suscetibilidade a emoções negativas e desespero comportamental20. Além disso, a maioria dos estressores que afetam os humanos são de natureza social. Indivíduos com relações sociais abaixo do ideal, caracterizadas por atividades sociais, redes e apoio limitados, correm um risco elevado de várias doenças21,22. Isso também é relevante no caso de roedores, que são animais sociais que vivem em grupos. Por exemplo, ratos alojados em isolamento exibem características do que é chamado de síndrome de isolamento, que induz estresse social e acelera o início da depressão23.
A medicina mongol, um ramo significativo da medicina chinesa, postula que o início da doença é uma interação complexa entre fatores intrínsecos e externos. Esses fatores externos, chamados de quatro condições auxiliares, abrangem mudanças climáticas, dieta, estilo de vida e eventos repentinos, como infecções, incidentes surpreendentes e distúrbios psicológicos. O processo de doença é conceituado como uma interação contínua entre três elementos - referidos como os três tipos de homors - e os Sete Constituintes Corporais em conjunto com as quatro condições auxiliares24. A medicina mongol sustenta que o corpo humano funciona como uma entidade integrada, mantida por um equilíbrio relativo entre os três homos. Uma ruptura nesse equilíbrio é considerada precursora da doença24. Dado o papel central da experimentação animal na ponte entre a medicina tradicional e moderna, é crucial desenvolver modelos animais que sejam relevantes para a pesquisa no campo da medicina mongol. Assim, empregamos uma metodologia de isolamento de 28 dias juntamente com CUMS para simular esses estressores fisiológicos e psicológicos. Selecionamos nove estressores imprevisíveis específicos e procuramos sustentar esse método de modelagem por meio da teoria dos Três Homors da medicina mongol. Estabelecer um modelo animal robusto é fundamental para o avanço da pesquisa básica na medicina mongol e contribuirá significativamente para seus estudos fundamentais.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>EP-150-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC021198160223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC012395160823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1250 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-1250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL centrifuge tube</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>EP-200-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC021029160323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300 &#181;L Multi-Channel Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC091006161022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 &#181;L Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>DS35110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic plate washing machine</td>
			<td>rayto Life Sciences Co., Ltd</td>
			<td>RT-3100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop High-Speed Freezing Centrifuge</td>
			<td>dalong construction Co., Ltd</td>
			<td>D3024R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic balance</td>
			<td>Mettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>ME203E/02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrothermal blast drying oven</td>
			<td>Labotery Experimental Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GEL-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Label Detector</td>
			<td>BioTeK Co., Ltd</td>
			<td>Epoch</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Tissue Grinder</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>KZ-<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65889/65889eq02.jpg" style="margin: auto;" />-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal Freezer</td>
			<td>Mellow Group Co., Ltd</td>
			<td>BCD-318AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Ultrapure Water Machine</td>
			<td>Jinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd&#160;&#160;</td>
			<td>AK-RO-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Morris water maze video trail analysing system&#160;</td>
			<td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td>
			<td>WMT-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat 5-HT ELISA Kit</td>
			<td>Lian Ke bio Co., Ltd,China</td>
			<td>96T/48T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF grade Sprague Dawley (SD) rats</td>
			<td>SPF (Beijing) Biotechnology Co&#160;</td>
			<td>SCXK(JING)2019-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Beijing Biotechnology Co., Ltd, China</td>
			<td>&#160;SCXK (JING) 2019-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Refrigerated Display Cabinet</td>
			<td>Xingx Group Co., Ltd</td>
			<td>LSC-316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>video tracking system</td>
			<td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td>
			<td>ZH-ZFT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vortex mixer</td>
			<td>Servicebio technology Co., Ltd</td>
			<td>MV-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chronic unpredictable mild stress in rats based on the mongolian medicine

A depressão é um transtorno afetivo prevalente e constitui uma das principais causas de incapacidade global. As limitações das intervenções farmacológicas atuais contribuem para a carga substancial de saúde atribuída a essa condição. Há uma necessidade premente de uma compreensão mais profunda dos mecanismos subjacentes da depressão, tornando os modelos pré-clínicos com potencial translacional altamente valiosos. A medicina mongol, um subconjunto da medicina tradicional, postula que a ocorrência de doenças está intimamente ligada ao equilíbrio do vento, bile e catarro. Neste estudo, apresentamos um protocolo para o método de estresse leve imprevisível crônico (CUMS) em ratos. Dentro dessa estrutura, os ratos são submetidos a uma série de estressores leves e flutuantes para induzir um fenótipo semelhante à depressão, imitando a patogênese da depressão humana. Os ensaios comportamentais empregados neste protocolo incluem o teste de preferência por sacarose (SPT), indicativo de anedonia - um sintoma central da depressão; o teste de campo aberto (OFT), que mede os níveis de ansiedade; e o teste do labirinto aquático de Morris (MWM), que avalia a memória espacial e as habilidades de aprendizagem. O método CUMS demonstra a capacidade de induzir anedonia e causar déficits comportamentais de longo prazo. Além disso, este protocolo está mais alinhado com a teoria médica mongol do que outros modelos animais projetados para provocar comportamento semelhante à depressão. O desenvolvimento deste modelo animal e pesquisas subsequentes fornecem uma base robusta para futuros estudos inovadores no campo da medicina mongol.

Major depressive disorder (MDD) is a prevalent mental illness, ranking as the third leading cause of disability globally and affecting over 300 million people1,2,3. Notably, it is estimated that at least half of the affected individuals do not receive adequate treatment4. Given this gap, animal models serve as a crucial tool for investigating the etiology of depression. To date, more than 20 different animal models for depression exist5. Among these, the chronic unpredictable mild stress (CUMS) model, refined by Paul Winer in 1987, is the most frequently utilized6. The CUMS model operates on the premise that exposing rodents to a diverse range of socio-environmental stressors leads to symptoms akin to anxiety, tension, and depression. The methodology involves exposing animals to various mild stressors over several weeks, culminating in a range of behavioral alterations, including anhedonia and depressive-like behaviors7,8. These changes are accompanied by shifts in endocrine and neurotransmitter profiles, such as a reduction in 5-HT9,10. These outcomes closely mirror those observed in humans diagnosed with MDD, thereby validating the model's utility. The CUMS model is particularly valued for its effectiveness in evaluating antidepressants, manifesting high levels of surface, structural, and predictive validity11,12. Unlike other models, CUMS is sensitive to the effects of chronic administration of monoaminergic antidepressants. For instance, selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) such as citalopram, paroxetine, and fluoxetine have been shown to prevent and reverse anhedonia under conditions of chronic stress12,13. Additionally, new rapid-acting antidepressants, such as ketamine, have also demonstrated efficacy in this model14,15. In contrast, other tests like the forced swimming test (FST) and tail suspension test (TST) are less reliable for modeling long-term behavioral changes, often reflecting adaptations to acute stress rather than enduring symptoms of depression16. These characteristics underscore the robust validity of the CUMS model in depression research. One of the most salient features of the CUMS model, recognized for its high reliability in classical studies, is anhedonia-the incapacity to experience pleasure or interest in everyday activities17,18. This phenomenon is commonly evaluated using sucrose preference tests, and many antidepressants have been shown to reverse reduced sucrose consumption. Several other metrics are also commonly employed in the CUMS literature, including the open field test (OFT), which assesses voluntary motor behavior, exploratory tendencies, and tension, thereby gauging the severity of depression19. Other tests such as the elevated plus maze (EPM) evaluate anxiety-like behaviors, the Morris water maze test (MWM) examines cognitive functioning20, and the FST assesses susceptibility to negative emotions and behavioral despair20. Furthermore, the majority of stressors that impact humans are social in nature. Individuals with suboptimal social relationships, characterized by limited social activities, networks, and support, are at a heightened risk for various diseases21,22. This is also relevant in the case of rodents, who are social animals living in groups. For example, rats that are housed in isolation exhibit characteristics of what is termed isolation syndrome, which induces social stress and expedites the onset of depression23.
Mongolian medicine, a significant branch of Chinese medicine, posits that the onset of disease is a complex interplay between intrinsic and external factors. These external factors, referred to as the four auxiliary conditions, encompass climate change, diet, lifestyle, and sudden events such as infections, startling incidents, and psychological disorders. The disease process is conceptualized as an ongoing interaction between three elements-referred to as the three types of homors-and the Seven Bodily Constituents in concert with the four auxiliary conditions24. Mongolian medicine holds that the human body functions as an integrated entity, maintained by a relative balance among the three homors. A disruption in this balance is considered to be a precursor to illness24. Given the pivotal role of animal experimentation in bridging traditional and modern medicine, it is crucial to develop animal models that are relevant for research in the field of Mongolian medicine. Accordingly, we employed a 28-day isolation methodology coupled with CUMS to simulate these physiological and psychological stressors. We selected nine specific unpredictable stressors and sought to underpin this modeling method through the Three homors theory of Mongolian medicine. Establishing a robust animal model is fundamental for advancing basic research in Mongolian medicine and will contribute significantly to its foundational studies.

Autor em destaque: Estabelecendo um modelo de roedor para investigar fatores de depressão na medicina tradicional da Mongólia

Estresse Leve Imprevisível Crônico em Ratos com base na medicina mongol

The scope of our research is Mongolian medical research. In this study, we are investigating the factors contributing to depression in Mongolian medicine, with a particular emphasis on the interaction between internal factors, such as wind, biofilm, and external factors. The problem of conforming to the lack of traditional Mongolian medical models was solved.This protocol addresses the establishment of an animal model based on Mongolian medical theory and then provides some suggestions for future research in Mongolian medicine. In a depressive disorder study, establishing an animal model is crucial for understanding new drugs'pathological mechanisms and effects. Compared with other techniques, this protocol is more in line with the pathogenesis and treatment principles of depression in traditional Mongolian medicine, which will help future research on the treatment of depression in Mongolian medicine.The protocol can demonstrate the relationship between external and internal factors interacting to produce disease and is in accordance with the theoretical system of Mongolian medicine. It will advance the basic research of traditional medicine on depression and provide some recommendations that will help subsequent researchers to research, develop, and utilize traditional medicines.

Resultados dos testes comportamentais no modelo de depressão de ratos induzida por CUMS Para corroborar a eficácia do procedimento CUMS para induzir comportamentos semelhantes à depressão, foi realizada uma verificação de manipulação. Ratos Sprague-Dawley (SD) machos foram alocados aleatoriamente para o grupo MOD ou CON por um período de 4 semanas, conforme descrito na etapa 1.2.3. Posteriormente, os ratos foram sacrificados e seus hipocampos foram completamente dissecados para avaliação de...

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Este protocolo descreve um modelo de estresse leve imprevisível crônico (CUMS) para depressão baseado na teoria médica mongol, juntamente com métodos para validar testes comportamentais.

Depression is a prevalent affective disorder and constitutes a leading cause of global disability. The limitations of current pharmacological ...

O escopo de nossa pesquisa é a pesquisa médica da Mongólia. Neste estudo, estamos investigando os fatores que contribuem para a depressão na medicina mongol, com ênfase particular na interação entre fatores internos, como vento, biofilme e fatores externos. O problema de se conformar com a falta de modelos médicos tradicionais da Mongólia foi resolvido.Este protocolo aborda o estabelecimento de um modelo animal baseado na teoria médica mongol e, em seguida, fornece algumas sugestões para pesquisas futuras na medicina mongol. Em um estudo de transtorno depressivo, o estabelecimento de um modelo animal é crucial para a compreensão dos mecanismos e efeitos patológicos de novas drogas. Comparado com outras técnicas, este protocolo está mais alinhado com a patogênese e os princípios de tratamento da depressão na medicina tradicional da Mongólia, o que ajudará em pesquisas futuras sobre o tratamento da depressão na medicina da Mongólia.O protocolo pode demonstrar a relação entre fatores externos e internos que interagem para produzir doenças e está de acordo com o sistema teórico da medicina mongol. Ele avançará na pesquisa básica da medicina tradicional sobre depressão e fornecerá algumas recomendações que ajudarão os pesquisadores subsequentes a pesquisar, desenvolver e utilizar medicamentos tradicionais.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Chronic Unpredictable Mild Stress in Rats based on the Mongolian medicine

526 visualizações.  Inner Mongolia Medical University. O escopo de nossa pesquisa é a pesquisa médica da Mongólia. Neste estudo, estamos investigando os fatores que contribuem para a depressão na medicina mongol, com ênfase particular na interação entre fatores internos, como vento, biofilme e fatores externos. O problema de se conformar com a falta de modelos médicos tradicionais da Mongólia foi resolvido.Este protocolo aborda o estabelecimento de um modelo animal baseado na teoria médica mongol e, em seguida, fornece algumas su...

Vídeo: Autor em destaque: Estabelecendo um modelo de roedor para investigar fatores de depressão na medicina tradicional da Mongólia

Depression is a prevalent affective disorder and constitutes a leading cause of global disability. The limitations of current pharmacological interventions contribute to the substantial health burden attributed to this condition. There is a pressing need for a deeper understanding of the underlying mechanisms of depression, making pre-clinical models with translational potential highly valuable. Mongolian medicine, a subset of traditional medicine, posits that disease occurrence is closely tied to the equilibrium of wind, bile, and Phlegm. In this study, we introduce a protocol for the chronic unpredictable mild stress (CUMS) method in rats. Within this framework, rats are subjected to a series of fluctuating, mild stressors to induce a depression-like phenotype, mimicking the pathogenesis of human depression. Behavioral assays employed in this protocol include the sucrose preference test (SPT), indicative of anhedonia-a core symptom of depression; the open field test (OFT), which measures anxiety levels; and the Morris water maze test (MWM), which evaluates spatial memory and learning abilities. The CUMS method demonstrates the capability to induce anhedonia and to cause long-term behavioral deficits. Furthermore, this protocol is more aligned with Mongolian medical theory than other animal models designed to elicit depression-like behavior. The development of this animal model and subsequent research provide a robust foundation for future innovative studies in the realm of Mongolian medicine.

This protocol outlines a chronic unpredictable mild stress (CUMS) model for depression based on Mongolian medical theory, along with methods for validating behavioral tests.

Medicina

Stress Induction Methods for Establishing the Chronic Unpredictable Mild Stress Rat Model

After dividing the rats into a control, or con, and model, or mod, group, house them in individual cages. For the tail-clamp method, secure the tail of a rat and measure the clamping time for one minute. In the water deprivation method, remove the feeding bottle from the cage and record the rat for 24 hours.For the food deprivation method, remove the food from the cage and record the rat for 24 hours. For cold stimulation at four degrees Celsius, place a rat in a bucket of cold water and monitor its activity for five minutes. Then dry the rat with a blower and return it to its original cage.To administer 45 degrees Celsius heat stress, place the rat in an oven and monitor for five minutes. For the inversion of the light-dark cycle, wrap the cage in a black cloth for one hour to stimulate daytime darkness. Subsequently illuminate the cage for 12 hours at night to mimic daylight and record the data for 24 hours.For the wet padding experiment, pour 200 milliliters of water into a cage containing 100 grams of padding. Place the rat in the wet cage and monitor for 24 hours. After drying the rat as demonstrated earlier, return it to a cage containing fresh wood shavings.In the cage incline method, place the rat in a cage angled at 45 degrees against a wall and monitor it for 24 hours. For high speed shaking, place the rat in the mechanical shakers set at 160 RPM, and record data for 15 minutes. After applying stressors, transfer the mod group cage from the CUMS room to the housing room.

Métodos de indução de estresse para estabelecer o modelo de rato de estresse leve imprevisível crônico

Behavioral Tests for Assessing Depression-Related Behaviors in Rats

After dividing the rats into a control, or a CON, and model, or MOD group, house them in individual cages. For the open field test, partition a black box into 25 square sections of equal area. Install a video tracking analysis system in the box.Place the rat in the central square and monitor its horizontal and vertical activities for five minutes. After the test, sanitize the box with 75%alcohol to remove any remaining rat odors. To assess anhedonia through the sucrose preference test, weigh bottle A containing water and bottle B containing 1%sucrose.Place both bottles on the cage lid and allow ad libitum access to both solutions for the rat. After consumption, weigh the bottles, and, using the given formula, calculate the 60 minute sucrose preference rates on given days. To perform the Morris water maze test, divide the pool into four quadrants, and number them from one to four.In the third quadrant, place a resting platform one centimeter below the water surface. Add milk to the pool to increase water opacity and maintain a water temperature of approximately 23 degrees Celsius throughout the experiment. Place the rat in one quadrant of the maze, and using the Morris Water Maze video tracking system, record the latency time to identify the platform for 120 seconds.Finally, remove the hidden platform from the pool. Then, place the rat into the water and record the number of zone crossings for 120 seconds. In the open field test, the MOD group exhibited lower vertical and horizontal scores compared to the CON group, indicating successful induction of anxiety.After 28 days, the MOD group showed a lower sucrose preference percentage than the CON group. The Morris water maze test revealed that the MOD group had a longer latency to locate the platform and crossed fewer times compared to the CON group. Further, the MOD group exhibited reduced hippocampal 5-HT levels compared to the CON group.