Пройдя без человеческого мозга приматов в стереотаксической космического

Резюме

Не-человеческое приматов является важным поступательное видов для нашего понимания нормальной обработки головного мозга. Анатомической организации мозга приматов может предоставить важную информацию о нормальных и патологических состояний у человека.

Аннотация

Использование не человеческих приматов обеспечивает отличную поступательного модель для нашего понимания развития и процессы старения в организме человека

протокол

Часть 1: Предварительная обработка тканей

1. Ткань должна быть хорошо озарен параформальдегида, глутаральдегида или формалина. Это может быть достигнуто с помощью стандартных transcardial перфузии обычно используется для сбора других органов. В настоящем исследовании тема глубоко седативные с кетамин гидрохлорид (10 мг / кг, внутримышечно), эвтаназии с передозировкой натрия фенобарбитала (25 мг / кг, внутривенно) и перфузии transcardially 0,1 М PBS до полного exsanguinated.This следует на 4% параформальдегида решение в PBS в течение 5 мин (~ 1 литр).

Часть 2: стереотаксической блокировки

1. Перед размещением голову в кадре стереотаксической координаты Horsley-Clarke/interaural нулевой плоскости должны быть приняты. Это теоретическая середина между ушами. Для измерения этой плоскости, ухо баров должны быть одинаково установлены в аппарате, затем поместите лезвие скальпеля в стереотаксического манипулятора и измерения средней точки между ухом баров. Это важно для определения, где блокировать ткани на основе исследований потребностей. Как только это будет завершена черепа необходимо быть готовым к фиксации в стереотаксического аппарата.
2. Для того чтобы разместить голову в стереотаксическая рама нижняя челюсть должны быть удалены с костью rongeurs и скальпеля. Кроме того, кожа, мышцы и соединительную ткань должна быть удалена, чтобы разоблачить черепа. Как только соединительная ткань удаляется из черепа, подвергать мозг постепенное уничтожение черепа (табличной части затылочной кости, а также теменные, лобные кости объявление). В настоящей части эксперимента черепа имеет все готовы были удалены. Будьте осторожны, не полностью удалить височных костей, потому ушных каналов необходимо будет в целости и сохранности места голову в стереотаксической раме. Остальные вопрос оболочки должны быть удалены из открытых мозга. Череп теперь готовы быть помещены в стереотаксической раме.
3. В том же порядке, в котором можно было бы выполнять стереотаксической хирургии, отрегулируйте глаза, неба и уха баров, что голова надежно фиксируется в стереотаксического аппарата. Место стереотаксического манипулятора в заданном передний / задний (/ P) координирует и переместите манипулятор для наружной стороны головного мозга. Медленно опустите лезвие в мозг, полностью поднять лезвие от мозга, а затем перейти медиально и нижнего лезвия снова. Повторите эти два шага, пока лезвие достигло наружной стороны противоположного полушария. Это завершает первый корональных блока. Для последующих корональных блоки двигать манипулятор 1 см в / P оси и повторять, пока весь мозг был заблокирован.

Часть 3: Удаление мозг от черепа

1. Удалите головы от стереотаксической рамы и провести подвергается мозг в ладони. Постарайтесь обеспечить мозг, слегка размещения нянчиться мозга в ладони и оформить мизинец через лобные доли, это сводит к минимуму движение мозга в черепе. Для того, чтобы предотвратить высыхание пиальных поверхности мозга, место кусок PBS смоченной марлей через мозг. Держите голову крепко черепа и постепенно избавляться от оставшихся затылочной и височной кости вместе с позвоночником. Это подвергает базы и боковые стороны головного мозга. Наконец удалить все оставшиеся лобной кости и кости носа, которая позволит доступ к обонятельной луковицы. Важно, чтобы удалить лобной кости последний потому что, как вы удалите основания черепа мозг движется немного и лобных долей могут быть повреждены на зубчатые края Fontal кости. Срежьте и удалить оставшиеся оболочки материи. Аккуратно поднимите переднюю часть мозга, слайд-под скальпеля мозга и свободный мозг от черепа.

Часть 4: Измерения

1. Есть ряд полезных измерений, которые могут быть сделаны до замораживания. Например, / P оси мозга с суппортом. Кроме того, удельная плотность может быть измерена путем взвешивания мозг, измерения объема по перемещению воды в мерный цилиндр последующим делением веса по объему перемещения (табл. 1).

Часть 5: Готово блокирование мозгом.

1. Как правило, когда лезвие скальпеля вставляется в мозг она не достаточно долго, чтобы полностью проникнуть полный спинно-вентральной степени мозга. Как только мозг удаляют, а валовой измерений получены, возьмите ткани квантования лезвие и закончить блокирование мозгом через брюшную сторону мозга (рис. 2).
2. До замораживания блоков, необходимо cryoprotect ткани в градуированных PBS-буферных растворах сахарозы (10, 20 и 30%) поддерживается на уровне 4 ˚ С до раковины мозга. Это обычно занимает ночной инкубации в 10%, 2-3 дней в 20%, а дополнительные 3-5 дней в 30% для блоков опускаются на дно сосуда. Ежедневная смена йE 30% раствором сахарозы рекомендуется.

Часть 6: Представитель Результаты

Есть ряд грубых морфологических измерений, которые могут быть сделаны как только мозг был удален из черепа. Они включают / P длины, веса и удельной плотности (табл. 1). Как правило, мы блок мозга в 6-7 блоков размером 1 см (рис. 1). Каждое изделие затем сфотографировали (рис. 2) и могут быть дополнительно расчлененные в зависимости от потребности в научных исследованиях или подготовленные для замораживания в градуированных решения сахарозы.

Тема	/ P Длина (Мм)	Вес (В граммах)	Водоизмещение (Мл)	Удельная плотность (Г / мл)
O2303-2-1-1	64,3	28,1	24	1,171
O5180-1	71,3	38,7	34	1,138
O2708-3-1	62,8	28,7	26	1,104
O9184-4-2	65,3	29,5	24	1,229
N459-1-14-2	68,2	31,6	26	1,215
СРЕДНЯЯ	66,38	31,32	26,8	1,171
STD DEV	3,38	4,33	4,17	0,052

Таблица 1. Валовой Морфологические Измерения Right Hemisphere из 5 месяца Vervets

Рисунок 1. Схемы для корональных самолеты использовались для блокирования мозга. Это пример вовне мозга vervet взрослых. Пример блокирование процедуры. Вертикальные линии здесь располагается на 1 см, как правило, производит 7 корональные кварталах от каждого полушария.

Рисунок 2. Блоки мозговой ткани в стереотаксической пространства. Каждый блок даст около 200 разделов, принятые на 50 мкм. С помощью этой схемы выборки более 1200 разрезы коры будут предприняты и дополнительные 400-500 из мозжечка, когда нарезанный в поперечной плоскости.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Сент-Китс vervet (Chlorocebus aethiops sabeus) является Старый приматов мира с аналогичной модели и цены коры и подкорковых развитие мозга, что и люди. Этот вид был использован для моделирования сложных человеческих поведенческих расстройств, таких как беспокойство поведению, гипертония ^{8, 9}...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Scalpel blades	Fine Science Tools	10011-00
Scissors	Fine Science Tools	14090-11	Any surgical scissors are sufficient
Rongeurs	Fine Science Tools	16121-14
Forceps	Fine Science Tools	11027-12
Filter paper	Fisher Scientific	09-924-150
Stereotaxic Frame	Kopf Instruments
Tissue slicing blade	Thomas Scientific