Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Здесь мы опишем основные протокол для флуоресцентной маркировки различных элементов сердце труб из личинки и взрослых Дрозофилы. Эти образцы хорошо подходят для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Эта техника позволяет детальный структурный анализ особенностей сердца от могучий организм модели.
Перед тем как начать
Флуоресцентные Окрашивание
Монтаж для взрослых сердца
Монтаж для личинок сердца
Представитель Результаты
При выполнении правильно, все компоненты и связанные с ними тканей спинного сосуда должно оставаться неповрежденным и легко визуализировать. Фоновой флуоресценции должно быть минимальным. Для взрослых, вентральной продольные пятна мышечный слой очень хорошо, и производит существенный сигнал (рис. 1 и 2). Лежащий в основе круговой кардиомиоцитов однако, как правило, не производят, как интенсивный сигнал, что и вышележащих вентральный слой. Миоцитов в передней "конической палата" взрослого сердца содержат значительное количество сократительных материала и, следовательно, этот регион представляется как наиболее надежные по отношению к остальной части сердечной трубки. Личиночное сердце показывает расположение спирали миофибриллярных похож на взрослого сократительной кардиомиоцитов (рис. 3).
Рисунок 1: Top. Флуоресцентные микрофотография показывает весь сердечной трубки взрослых дрозофилы, что выражает миозина-GFP. Снимок был сделан с Zeiss Imager Z1 флуоресцентный микроскоп оснащен скользящей Apotome модуля. Миозина-GFP отображается зеленым цветом, актин окрашивается AlexaFluor ® 594 фаллоидином (красный) и α-актинина помечена с анти-α-актинина антител (синий). Обратите внимание на процедуру препаративной разрешений восстановления сердечной образцов с хорошо сохранившимися структурами. CC = конической камеры; AM = крыловидный мышцы, V = внутренний клапан; VLL = вентральный продольный слой мышц. Bottom. Области взрослого сердечной трубки из ЦК через 3-й сегмент брюшка сердца прямо под вентральной продольный слой показывающие расположение миофибрилл спирали из сократительных кардиомиоцитов. Пожалуйста, нажмите здесь для увеличения рисунка 1а, и здесь для большей версии рисунке 1b
Рисунок 2: Представитель конфокальной штабеля передняя часть взрослого сердце окрашивали AlexaFluor ® 594 фаллоидином (красный) и анти-Pericardin (коллагена типа IV) (зеленый) антител. Pericardin связано с сердцем вдоль брюшной поверхности, вероятно, происходящих из продольно ориентированные миофибриллы брюшной мышечный слой. Пожалуйста, нажмите здесь для увеличения на рисунке 2.
Рисунок 3: флуоресцентный микрофотография сегмента А7 сердца собственно третьей стадии личинки дрозофилы. Снимок был сделан с Zeiss Imager Z1 флуоресцентный микроскоп оснащен скользящей Apotome модуля. Актина помечена AlexaFluor ® 594 фаллоидином (зеленый) и α-актинина окрашивается с анти-α-актинина антител (красный). Пожалуйста, нажмите здесь для увеличения на рисунке 3.
Здесь мы приводим протокол полезно для подготовки и окраски спинной дрозофилы судна и связанные с ними тканей для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Мы предоставляем краткий отчет о шагах уточнены и обычно используются в нашей лаборато...
Авторы выражают благодарность С. И. Бернштейн (San Diego State University) за критическое прочтение и полезные предложения по подготовке этой рукописи. Эта работа была поддержана грантами NIH С. И. Бернштейн, СДСУ и Р. Бодмер, BIMR; и пост-докторские стипендии с партнерской западных государств Американской ассоциации сердца к Г. Фоглер и А. Cammarato.
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich | E4378 | |
Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12381 | |
Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1200 | |
Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены