Гетеротопическая и Ортотопическая трахеи трансплантации в мышах используются в качестве моделей для изучения развития Облитерирующий заболевание дыхательных путей

Резюме

Это видео показывает и сравнивает два экспериментальных моделей для изучения развития облитерирующего заболевания дыхательных путей (ООО) у мышей, и гетеротопической ортотопической трахеи модель трансплантации.

Аннотация

Облитерирующий дыхательных путей заболевания (ООО) является основным осложнением после трансплантации легких, который ограничивает долгосрочное выживание (1-7).

Для изучения патофизиологии, профилактики и лечения ДОА, различных животных моделях трансплантации трахеи у грызунов были разработаны (1-7). Здесь мы используем две модели созданы из трахеи трансплантации, гетеротопической и ортотопической модели и продемонстрировать свои преимущества и ограничения.

Для гетеротопической модели, доноры трахеи, завернутый в большого сальника получателя, в то время как доноры трахеи anastomosed до конца в конец анастомоза в ортотопической модели.

В обеих моделях развития облитерирующего поражения гистологических похожа на клиническую OAD была продемонстрирована (1-7).

Это видео показывает, как выполнить оба, гетеротопической а также ортотопической трансплантации трахеи технику у мышей, и сравнивает время ход OAD развитию в обеих моделях с использованием гистологии.

протокол

1. Мужской Balb / C мышей (8-12 недель) приобретаются у Charles River Laboratories (Sulzfeld, Германия). Мышей размещаются в обычных условиях, кормили стандартной пищей мышей и без ограничений воды объявление.
2. 2% Isofluran используется для анестезии.

ДОНОРОВ ПОДГОТОВКА

1. Бритье волос брюшной и дезинфицировать области с помощью betaisodona.
2. Под микроскопический взгляд, выполняют средней линии шейки разрез от уровня гортани грудины.
3. Удаление подкожного жира и мышц ремень, чтобы получить четкое представление о трахеи.
4. Рассекают трахею от любых окружающих тканей, как пищевод, нервы, артерии, и соединительной ткани.
5. Удалить все трахеи (от гортани до развилки).
6. Флеш пересадки с холодной соленой и хранить трансплантата при 4 ° C.
7. Донор эвтаназии цервикальным сдвигом следующие урожай трахеи.

Получатель: гетеротопической ТРАНСПЛАНТАЦИИ

1. Бритье волос в брюшной большим отрывом вокруг разреза и дезинфицировать области в три раза использованием betaisodona (бетадин), а затем спиртом. Глаза должны быть смазаны мазью глазной продукт, чтобы предотвратить роговицы от высыхания.
2. Выполнить средний лапаротомии и место кишечника в стерильных, moistured перчатку.
3. Распространение большого сальника тщательно. Место трансплантата в центр и зафиксировать его с одного шва использованием 8-0 (Prolene, Ethicon, Германия).
4. Полностью покрытие пересадки с большого сальника и исправить трансплантата с одним швом 8-0 (Prolene, Ethicon, Германия).
5. Перемещение кишечника обратно в брюшную полость и промойте теплой, стерильного физиологического раствора до закрытия.
6. Крупным планом в 2 слоя - брюшной стенки и скин-слоя с непрерывной узора с помощью 7-0 Prolene для мышц и 7-0 Викрил для кожи.

Получатель: ортотопической трансплантации

1. Бритье волос в брюшной большим отрывом вокруг разреза и дезинфицировать области в три раза использованием betaisodona (бетадин), а затем спиртом. Глаза должны быть смазаны мазью глазной продукт, чтобы предотвратить роговицы от высыхания.
2. Разделите ремень мышцы визуализировать весь laryngotracheal комплекса.
3. Осторожно рассекают трахею из окружающих тканей, заботиться о сохранении возвратного гортанного нервов.
4. Разделите трахеи три кольца из хвостового перстневидного. Животное сохраняет физиологические дыхание через трахеостомии.
5. Обеспечить чистой трахеи ребер получателя, а также в трансплантата.
6. Трансплантат, расположенный между получателем трахеи дефектов и ориентирована на поддержание анатомических полярности.
7. Использование 8-0 (Prolene, Ethicon, Германия) анастомозируют донора трансплантата с дистальной (средостения) трахеи. Задней поверхности анастомоза осуществляется в непрерывной работы мода. Передняя затем закончить через прервал швов.
8. Удалите все выделениями из дыхательных путей.
9. Проксимального анастомоза затем завершается так же, как и дистального.
10. Обеспечить целостность дыхательных путей и адекватной, спонтанного дыхания.
11. Переместите ремень мышцы и близких подкожной клетчатке и коже слой с помощью 6-0 швов (Викрил, Ethicon, Германия) с непрерывным узором.
12. Использование инъекций анестезии для получателя, поэтому животное сохраняет физиологические дыхание через трахею. Сочетание 75/1/0.2 мг / кг пропофол, фентанил medetomidine и, соответственно, используется для анестезии ф у мышей.

Рисунок 1: Донор трахеи.
1А: Донор трахеи на месте после приготовления.
1В: подакцизных доноров трахеи.
1С: Донор трахеи после эксплантации.

Рисунок 2: Гетеротопическая модели.
2A: трансплантат находится в центре большого сальника.
2B: трансплантат фиксируется с обеих сторон с одним швом.
2С: взяточничество, завернутый в большого сальника и фиксированного с одним швом.

Рисунок 3: Ортотопическая модели.
3A: трансплантат, расположенный между получателем трахеи дефектов и задняя стена anastomosed непрерывной работы в моде.
3B: передней стенки завершена с помощью одного шва.

Рисунок 4: гистологии.
4А: Восстановленные гетеротопической трансплантировали трахею через 28 дней в Н + Е станцииining (15x). Обратите внимание на 100% просвета уничтожения.
4B: Восстановленные ортотопической пересаженной трахеи через 60 дней в Н + Е окрашивания (15x). Максимальная достигнута облитерация просвета составляет около 45%.

	Гетеротопическая трахеи Модель трансплантации	Ортотопическая трахеи Модель трансплантации
Преимущества	+ Легко выполнять + Люминал облитерации с полной окклюзии дыхательных путей через 28 дней + Отсутствие физической привязанности животных по ПССП	+ Физические вентиляции трансплантата + Ингаляционные приема препарата возможно + Сильный иммунологических реакций, таких как alloreactive антител класса IgM + Физиологические грудной среды + Трахеи-трахеи анастомоза имитирует клинических условиях
Недостатки	- Нет вентиляции пересаженной трахеи - Нет оценки ингаляционных патогенных возможно - Ингибирование мукоцилиарный клиренс и сохранили секреты - Перитонеального микроокружения, а не грудной среды	- Хирургическое подготовки, необходимой - Люминал облитерации просвета, приложение окклюзии. 45% после 60 дней - Животные и растения могут развиваться симптомы OAD

Таблица 1: Преимущества и недостатки Гетеротопическая и Ортотопическая трахеи трансплантации.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Мыши выпускаются в различных transgeneic и нокаут модели, и поэтому подходит для изучения механистической вопросы, связанные с ПССП (4).
Обе модели трахеи трансплантации показано в этом видео можно использовать в качестве надежных моделей для изучения OAD развития.
Однако, каждая модел...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.