Измененный Техника для лигирования коронарной артерии у мышей

Резюме

Хирургическая процедура используется, чтобы вызвать экспериментального инфаркта миокарда у мышей начинается с левой торакотомии между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого. Левой коронарной артерии лигируют, грудь закрыта, а мышь имеет право восстановить спонтанно.

Аннотация

Инфаркт миокарда (ИМ) является одной из наиболее важных причин смертности в организме человека ^1-3. В целях повышения заболеваемости и смертности у пациентов с ИМ нам нужны лучшие знания о патофизиологии ишемии миокарда. Это знание может быть полезным для определения новых терапевтических мишеней для лечения сердечно-сосудистых инновационных ^4. Экспериментальная модель MI у мышей становится все более популярным малого модели животных в доклинических исследованиях, в которых MI индуцируется с помощью постоянной или временной перевязкой левой коронарной артерии (ЛКА) ^5. В этом видео мы опишем шаг за шагом метод, как вызвать экспериментальный MI у мышей.

Животное первый наркоз с 2% изофлурана. Бессознательном мыши, затем интубированных и подключен к аппарату искусственной вентиляции легких для искусственной вентиляции легких. Левая грудь побрился и 1,5 см разрез по середине подмышечной линии выполнен в коже. Левый большой грудной мышцы прямо dissociated до ребра подвергаются. Мышечные слои тянут в сторону и фиксируют веко-втягивающим. После этих приготовлений, левой торакотомии выполняется между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого. Проксимального отдела артерии ДМС затем лигировали с 7-0 ethilon шов, который обычно вызывает инфаркт размером ~ 40% левого желудочка. В конце концов, грудь закрыта и животные получают послеоперационного обезболивания (Temgesic, 0,3 mg/50 мл, IP). Животные находятся в теплых клетке, пока спонтанное выздоровление.

протокол

1. Текст протокола

1. Прежде чем приступить к операции, анестезию самца мыши (C57BL / 6), что составляет 6 недель и старше при вдыхании 2-5% изофлурана. Выполните ноги щепотку, чтобы подтвердить, что животное достаточно наркозом.
2. Бессознательном мыши помещается на спине на теплом площадку для поддержания постоянной температуры 37 ° C. Грудных груди с левой стороны побрился.
3. Закрепить мыши, чтобы интубации устройство с изофлуран заполненные камеры. Вставьте трубку в 0,2 внутреннего диаметра в трахею мыши через рот, затем поместите интубированных мыши на асептическую хирургической области (37 ° С регулятором температуры) и подключить эндотрахеальной трубки, чтобы вентилятор (скорость 120 в мин, давление 4-6 MMH ₂ O); дезинфекции области с бетадин и 75% этанола.
4. Применение глазной мази для глаз мыши. Место стандартных ЭКГ-электродов на лапах и подключить мышь к записи ЭКГ.
5. Используйте стерильные ножницы, чтобы сделать 1,5 см разрез по средней подмышечной линии. Ножницы используются, а не скальпелем, чтобы избежать повреждения подлежащих тканей у мышей. Затем, с помощью тупого кончика ножниц судна, чтобы анализировать и отказаться от грудных мышц от стенки грудной клетки.
6. Выполните левой торакотомии между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого
7. Далее убрать грудной стенки с использованием подходящего втягивающего в целях улучшения визуализации и доступность. Удалить перикарда с помощью зубчатого щипцы и тупым наконечником ножницы.
8. Лигируют левой коронарной артерии, поставив иглу (с приложением 7-0 шва ethilon) под артерией с группой миокарда между лигатурой и артерии. Успешное окклюзии коронарной артерии проверяется гипокинезия / акинезия из передней стенки левого желудочка и изменений ЭКГ (например, с подъемом сегмента ST, QRS broadeniнг)
9. Закройте груди, поставив два стежка (6-0 ethilon шва) на третьем и четвертом ребрах.
10. Используйте 5-0 ethilon шов, чтобы закрыть кожи.
11. Для послеоперационного обезболивания, администрирование однократного внутрибрюшинного введения бупренорфина (0,05 мг / кг). Животные спонтанно выздоравливают в течение 2-5 мин после остановки изофлуран анестезии. Наконец, поместите курсор в теплую клетку и обеспечивает 0,6 мг / мл бупренорфина в питьевой воде (наложение текста: 0,6 мг / мл в питьевой воде), чтобы предотвратить послеоперационные бедствия. Внимательно следить за мышь в течение первых 24 часов после операции.
12. Эхокардиография проводится для оценки функции сердца через 3 дня после инфаркта миокарда. Успешная процедура проверяется акинезия в передней стенки левого желудочка (см. прилагаемую видео в результаты). В конце эксперимента, в центре будут собираться и храниться в-80oC для дальнейших исследований. Т.е. экспрессии генов.

Результаты

Инструмент	Описание функций
Blunt наконечником ножницы	Используется для резки кожи, межреберных мышц груди, и швы
Глаз втягивающего	Используется для подвергать хирургическому зрения
Blunt наконечником щипцы	?...

Обсуждение

Хирургические процедуры ДМС перевязки, как показано в настоящем докладе является надежным и воспроизводимым методом индукции экспериментального инфаркта миокарда у ^{3 мышей, 6.} Перевязка ДМС в соответствии с этим протоколом вызывает ишемию миокарда привлечения обычно ~ 40% левого ...