Название сотовый Инкапсуляция воздушно-капельным путем

Резюме

Аннотация

протокол

NIH3T3 клетки подготовки:

А. Клетки для выброса

1. Trypsinize клетки, затем разбавить 1:1 с ячейки СМИ, и переход от T75 колбу на 15 мл трубки Сокол
2. Спином вниз клеток в гранулах центрифугированием, супернатант аспирацию и промыть клетки с DPBS
3. Спином вниз клеток в гранулах снова, и аспирата супернатант
4. Ресуспендируют клеток в СМИ
5. Определить плотность клеток с гемоцитометра (~ 200 X 10 ⁴ клеток / мл в колбе T75)
6. Решение Центрифуга клетки, аспирацию супернатант, и ресуспендируют в соответствующую сумму средств массовой информации для различной концентрации клетка

Б. сотовый выброса

1. Vortex клетки, прежде чем использовать для выброса
2. Передача 200 мкл клеточного раствора в шприце
3. Установить соответствующий режим генератора импульсов
   1. Для извлечения одной капли и несколько капель (очередей), установить генератор импульсов, чтобы "Е. БУР" режиме
   2. Для непрерывного выброса капли, установить генератор импульсов, чтобы "НОРМА" режиме
4. Изменение параметров сигнала
   1. Установить высокий уровень и низкий уровень выходного напряжения: HIL до 5 В и LOL 0 В и убедитесь, что "LIM" светодиод
   2. Установить сигнал как прямоугольный импульс
   3. Изменение количества времени электромагнитный клапан открыт для выброса капли, изменив значение для "WID" или изменение рабочего цикла («Долг»)
   4. Изменение частоты выброса, изменив значение для "ЗА"
   5. Изменение количество капель, выброшенных в порыве, изменив значение для "БУР"
5. Извлечь решение ячейки на подготовленное основание для работы с изображениями с микроскопом

С. Окрашивание

1. Макияж раствор красителя с 0,5 мкл кальцеин-AM и 2 мкл гомодимера этидия на мл DPBS
2. Погрузите подготовленное основание в раствор красителя
3. Разрешить образец для инкубации в течение 10 минут при 37 ° С до визуализации

Эксперимент Проверка

1. На Nikon Eclipse TE-2000 U Флуоресцентный микроскоп
   1. Пятно передовое программное обеспечение (Diagnostics, Inc)
   2. Live / Мертвые Пробирной

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture