Ортотопической трансплантации печени у крыс

Резюме

Приведем простой в создании пересмотра классических две манжеты техника для ортотопической трансплантации печени у крыс.

Аннотация

Клинический прогресс в области трансплантации печени в значительной степени поддерживается на ^1,2 животных моделях. С момента публикации первого ортотопической трансплантации печени крысы в 1979 году Камада и др. ^3., Эта модель остается золотым стандартом, несмотря на различные предлагаемые альтернативные методы ^4. Тем не менее, его широкое использование ограничено его крутой кривой обучения ^5.

В этом видео работе мы показываем, простой и легкий в создании пересмотра две манжеты техника Камада в. Suprahepatic полой вены анастомоза производится вручную с непрерывным швом, а также переносные и полой infrahepatic полой вены анастомозы выполняются использованием быстрого компоновщик манжеты системы ^6. Производство быстрый компоновщик комплект показан в отдельном документе видео.

протокол

1. Донор операции

1. Обезболить крысах-самцах массой 200 ± 20 г с ИФ на конус маски (3% для индукции, 2% во время операции, 1 л / мин воздуха, FiO2 70%).
2. Выполняет большой средний и поперечной лапаротомии и прижечь эпигастральной судов с обеих сторон.
3. Разрежьте серповидной связки, и отделить левую диафрагмальная вены от suprehepatic полой вены. Наконец, разделите диафрагмальная вены между двумя лигатурами 7-0 шелка.
4. Разрежьте левой треугольной и желудочно-печеночной связки.
5. Разделите гепато-пищевода и артерии связки между 7-0 лигатуры (коагуляция является реальной альтернативой).
6. Изолировать infrahepatic полой вены до левой почечной вены. Отделите право почечную вену из окружающих тканей и разделить его между 10-0 и 7-0 лигатуры на его проксимального и дистального концов, соответственно.
7. Разделите право вены надпочечников между 7-0 ligaturх годов и свободные печень от его задних связок, сокращая при легком тяги.
8. Изолировать желудочно-селезеночный вены и разделить его между 10-0 и 7-0 лигатуры на его проксимального и дистального концов, соответственно.
9. Разделите надлежащего печеночной артерии между 7-0 связей.
10. Изолировать дуодено-панкреатический вены и разделить его между 10-0 и 7-0 лигатуры на его проксимального и дистального конца, соответственно.
11. Вставьте 22G, 3,5 мм стентов в общий желчный проток, практикуя небольшой надрез на расстоянии 1 см расстояние от печеночной воротах. Закрепите стента в положение 7-0 лигатуры.
12. Вводите 10 UI гепарина, разбавленного в 1 мл физиологического раствора, через спинной вены полового члена.
13. Вводить иглу полой Порта (насколько это возможно в воротах) с иглой 21G и аккуратно очистить печень с 20 мл холодного раствора Рингера (или другие решения, сохранение). В то же время, сокращение полой вены ниже почечных вен, чтобы адекватные outflвл. Печень холодной перфузии должна длиться от одного до двух минут.
14. Разрежьте полой переносные ниже дуодено-панкреатический вены.
15. Сокращение общего желчного протока дистальнее лигатуры вокруг стента.
16. Заполните разрез infrahepatic полой вены.
17. Разрежьте suprahepatic полой вены обезжиренного диафрагмы и удалить печень.
18. Поместите печень в бассейн заполнен холодной Рингера и лежал в бассейне на ледяной площадке.

2. Подготовка трансплантата

1. Вставьте полой Порта в своей манжеты, то выворачивать наизнанку судна по краям, чтобы разоблачить интима. Закрепите вывернутые сегмент на манжете с 7-0 лигатуры.
2. Повторите ту же операцию на infrahepatic полой вены.
3. Установить микро-зажим (4-6 мм длиной) на проксимальной части infrahepatic полой вены. Эта операция позволяет избежать потери крови после того, как портал реперфузии.
4. Переворачиваем печени и вставить два проленовой 8-0 швовна противоположной боковой края suprahepatic полой вены, снаружи внутрь.
5. Хранить трансплантата (погружения в раствор Рингера) в холодильнике при температуре 0-4 ° C.

3. Получатель операции

1. Обезболить крысах-самцах массой 200 ± 20 г с ИФ на конус маски (3% для индукции, 2% во время операции, 1 л / мин воздуха, FiO2 70%) и держатся на теплую панель. Следует отметить, что доноры и получатели весов должны соответствовать (± 40 г).
2. Вводите 10 мл физиологического раствора подкожно и 0,03 г пиперациллин / тазобактам внутримышечного до лапаротомии.
3. Выполнение средней линии xipho-лобковой лапаротомии.
4. Обратный мечевидного отростка с автоматической статической щипцы для того, чтобы лучше выявить печени.
5. Вырезать передней связки и разделить левую диафрагмальная вены между двумя связями 7-0.
6. Разделите гепато-пищевода и артерии связки между 7-0 лигатуры (coagulatioN является допустимым альтернативным). Не показано в видео (идентичный донор операции).
7. Изолировать infrahepatic полой вены до правой почечной вены.
8. Разделите право вены надпочечников между 7-0 лигатуры и освободить печень от задних связок, сокращая при легком тяги (не показано на видео (идентичный донор работы)).
9. Поместите 7-0 лигатуры вокруг общего желчного протока, чуть ниже ее разделения. Иными лигатуры на один миллиметр ниже и сократить между ними.
10. Изолировать печеночной артерии в воротах и ​​разделить его между 7-0 лигатуры.
11. Аккуратно разделить левую и правую ветви портала. Обратите внимание, чтобы не повредить общей печеночной артерии или желудочно-селезеночной вены.
12. Установите полой кольцо вокруг полой вены, краниально справа почечной вены. Затем зафиксируйте стенки сосуда на ринг, разместив четыре стороны света 9-0 швов.
13. Повторите ту же операцию с порталом кольцо на поле Порта.
14. Вводите 10 UI гепарина, разбавленного в 1 мл физиологического раствора, через спинной вены полового члена.
15. Установить анестезии на 0,25% и FiO2 на 100%.
16. Зажмите infrahepatic полой вены чуть выше правой почечной вены, затем зажать полой переносные чуть выше желудочно-селезеночной вены. Наконец зажать suprahepatic полой вены будучи уверенным, по крайней мере 2 мм диафрагмой.
17. Разрежьте suprahepatic полой вены близко к паренхимы.
18. Сокращение левого и правого портала филиалов и разделить перегородкой между ними.
19. Разрежьте infrahepatic полой вены близко к паренхимы, обращая внимание не надрезать любой швов ранее установлены. Удалить печени и поместить трансплантата в брюшной полости.
20. Выполните из конца в конец анастомоз между полой вены suprahepatic трансплантата и реципиента. Начните с непрерывным швом по задней стенке слева направо, а затем перейдите на передней стенке справа лефутов Держите передний шов свободно до конца, чтобы позволить щедрый промывки внутренней полости перед затягиванием концах.
21. Вставьте хвостовом отделении аппроксиматора в портал ручке кольцо, а затем вставьте поле Порта трансплантата в щель черепной филиала аппроксиматора с портала манжеты найти свое место в слоте.
22. Закройте аппроксиматора время промывки пола получателя Порта с физиологическим раствором и дайте манжеты, чтобы вставить в сосуд. Закрепите полой получателя переносные вокруг манжеты с 7-0 окружной галстук.
23. Удалить аппроксиматора. Откройте зажим на suprahepatic полой вены и полой Двери в порядке: портал поток в настоящее время восстановлено.
24. Снимите кольца портал, сокращая 9-0 лигатуры с очень тонкой ножницами.
25. Вставьте хвостовом отделении аппроксиматора в полой ручке кольцо, а затем вставьте infrahepatic полой вены трансплантата в щель черепа Филиал аппроксиматора с полой манжеты найти свое место в слоте.
26. Закройте аппроксиматора время промывки infrahepatic получателя полой вены с физиологическим раствором и дайте манжеты, чтобы вставить в сосуд. Закрепите полой вены реципиента вокруг манжеты с 7-0 окружной галстук.
27. Удалить аппроксиматора. Откройте microclamps на infrahepatic полой вены трансплантата и реципиента в порядке: венозного кровотока в настоящее время восстановлено.
28. Осуществить частичный разрез общего желчного протока получателя, применяется нежная тяга к голове, и вставьте свободный стороны стента ранее вставлен в желчных протоках трансплантата. Закрепите стента с окружной 7-0 галстук.
29. Закройте животного слои с 5-0 швов. Разрешить свободную воду и пищу от пробуждения.
30. Администрирование эффективное обезболивание в соответствии с местными институциональными протоколов. Минимальная продолжительность 24 ч рекомендуется.

_content "> Следует отметить: из конца в конец печеночной артерии анастомоза может быть выполнена, когда этого требует экспериментального проектирования (артерии не требуется для долгосрочного выживания после трансплантации печени крысы).

4. Представитель Результаты

Описанный метод может быть успешно освоен нашей командой после того, как около 10 операций подготовки. Это позволило на 100% длительно (> 21 дней) выживание на 36 последовательных Льюиса к Льюису и темных агути-на-Льюис трансплантации, после короткого периода обучения (количество получателей сингенных трансплантат печени были сохранены живыми более 12 месяцев). После пересадки сингенных 1 день функции печени показали средний трансаминазы АСТ (AST): 84 Ед / л (51,7 - 92,7) и средний аланин-трансаминазы (АЛТ): 172.5 Ед / л (127,5 - 240,2). Средний этап беспеченочного (с полой переносные зажима привить реперфузии) был 14 ± 2 мин, с максимальным шагом является suprahepatic полой вены анастомоза (работает сuture) время, 9 ± 2 мин.

Быстрый компоновщик системы позволило позиционирования 1,55 мм диаметра манжеты на полую переносные и 2,40 мм, диаметр манжеты на полой вены (получателей весом 200 ± 20 г). С другой стороны, когда мы попытались с помощью техники пересадки Камада, они не могли превышать 1,40 мм и 2,16 мм соответственно (для крыс для деформации и веса). Как показано на рисунке 7, быстрый компоновщик кольца предназначены для держать суда получателя по оптимальному растяжение, позволяя минимальный суппорт и длина истощения, в результате чего ближе к физиологическим гемодинамические результаты.

Рисунок 1. Кольца меры.

Рисунок 2. Microclamps меры.

3. Быстрый набор компоновщик.

Рисунок 4. Быстрый компоновщик вооружены.

Рисунок 5. Быстрый компоновщик закрыты.

Рисунок 6. SHVC зажимом.

Рисунок 7. Классический против быстрый компоновщик помощью манжеты анастомоза гемодинамики.

Рисунок 8. Донора и реципиента кожи подготовке и разрез.

Обсуждение

Настоящая крыса трансплантации печени модель может быть легко установлена. По нашему опыту, некоторые ключевые моменты помогут свести к минимуму риск смерти (≤ 20%). Ранние смерти, происходящих в течение первых трех часов с реперфузии, чаще всего в связи с инфарктом кишечника, в результате долгого портал зажима. Поэтому рекомендуется держать беспеченочного этап в идеальных пределах 15 минут (20 минут еще приемлемо). Центральная воздушная эмболия может также быть причиной внезапной смерти, и это обязательно промойте все вены до анастомоза.

Смертей в период послеоперационного дня и три часто из-за отказа печени или тромбоз полой вены. Поэтому следует избегать любых агрессивных трансплантата промывки до эксплантации в донора (мы на одном уровне с 20 мл в течение примерно 60 секунд), а также обеспечения надлежащего сохранения холодной (полное погружение в 0-4 ° C лактата Рингера раствор). Риск тромбозаможет быть уменьшен путем сведения к минимуму манипуляции интима и сохранения его целостности. Мы не рекомендуем использование антикоагулянтов после операции.

Смертей от послеоперационного дня четыре и девять часто связаны с бактериальной холангит ^7. Основываясь на нашем опыте, разовая доза piperacilline / тазобактам (0,03 г), заданная до лапаротомии достаточно, чтобы свести к минимуму риск общего желчного протока инфекции.

Смерть является редким событием после 10-й день. Однако, в связи с отсутствием артериального кровотока, некоторые проблемы желчных протоков может наблюдаться с cholastasis ^8. В зависимости от потребностей следователя артериализации можно считать ^9. Следует отметить, что холодное время ишемии в течение 24 часов может считаться приемлемым ^10.

Быстрый компоновщик система изначально была разработана для выполнения трансплантации печени с тремя манжеты анастомозов (очень короткий беспеченочного фаза). Тем не менее, три-дэ манжетыchnique требует использования очень маленький калибр для suprahepatic полой вены (SHVC) манжеты и она не была широко принята в связи с риском оттока проблемы печени ^11-14. Поэтому мы выступаем за быстрый компоновщик помощью трех манжет технику только тогда, когда теплое время ишемии меньше, чем за десять минут не требуется. В большинстве исследований, однако, имплантация фазы до 15-18 минут приемлемым, что позволяет использовать две манжеты техники и более физиологическим SHVC дренажа. Как показано в этом видео работе обычно используют быстрый компоновщик системы во второй части только имплантация. Хотя некоторые дополнительные хирургические времени требуется, чтобы позиционировать быстро компоновщик ручки, эта часть процедуры связаны с минимальными рисками и обеспечивает сокращение критической фазы беспеченочного благодаря легче манжеты вставками. Другие преимущества быстрого компоновщик системы лучше трансплантат получатель судна выравнивания и использования широкой манжеты лучше гемодинамические результаты по сравнению сранее описанных методов (в том числе, описываются Камада и др.). ⁶ (рис. 7).

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Инструмент / реагент	Компания	Каталог л.	Комментировать
Портал манжеты	altecweb.com или кузнецов-medical.com	Катушка 01-96-1729 800/100/420	Диаметр: 1.55mm Стены: 0.30mm Длина: 3,5 мм
Infrahepatic против вены манжеты	altecweb.com или кузнецов-medical.com	Катушка 01-96-1733 800/100/540	Диаметр: 2.40mm Стены: 0.30mm Длина: 3,5 мм
Общего желчного протока стентом	общий 22G venflon
7-0 связей шелка	georgetiemann.com	160-1226-7 / 0
10-0 проленовой	ethicon.com
9-0 проленовой	ethicon.com
8-0 проленовой	ethicon.com
Прямо микро щипцы	с-и-т. Чистая	FRC-15RM-8
Изогнутые микро щипцы	с-и-t.net	FRS-15-RM-8
Вскрытие иглы держатель	с-и-t.net	B-15-8.2
Анастомоз иглы держатель	rumex.net	8-021T
Micro зажимы	finescience.com	18055-03	6 х 1 мм
Micro аппликатор зажимы	finescience.com	18057-14
Suprahepatic против вены зажимом	pharmap.ch	13.349.14
Быстрый компоновщика кольца	dltchiropody.co.uk	PAR 10	изменение лезвий скальпеля
Быстрый компоновщика аппроксиматора	pharmap.ch	UD-04-275	изменения Кохера forcep