Ортотопическая мышиной модели колоректального рака

Резюме

Два метода могут быть использованы для создания этой модели: введение суспензии клеток рака в слепой кишки стену или трансплантация части опухоли подкожной на слепой кишки. Эта модель полезна для изучения естественное развитие колоректального рака и тестирования новых лекарственных средств против колоректального рака.

Аннотация

Традиционные опухоли подкожной модели далеки от идеальных для изучения рака прямой кишки. Ортотопическая модели мыши колоректального рака, особенностью которой раковые клетки растут в их естественном месте, копировать человеческие заболевания с высокой точностью. Два метода могут быть использованы для создания этой модели. Оба метода схожи и требуют анестезии мыши и лапаротомию для выявления слепой кишки. Один метод предполагает введение колоректального рака суспензии клеток в слепой кишки стену. Раковые клетки вырастили первый в области культуры, собранных при subconfluent и готовят суспензии отдельных клеток. Небольшой объем клетки вводят медленно, чтобы избежать утечки. Другая техника включает в себя трансплантацию части опухоли подкожной на слепой кишки. Мышь с ранее установленной опухоли подкожной колоректального является эвтаназии и опухоль удаляется с использованием стерильной техники. Опухоль часть разделена на мелкие кусочки для пересадки на другой мыши. До трансплантации, слепой кишки стены слегка поврежденных чтобы облегчить опухолевой инфильтрации клеток. Время развитие первичной опухоли и метастазов в печень будет варьироваться в зависимости от техники, клеточной линии, и мышь видов, используемых. Это ортотопической модели мыши полезны для изучения естественное развитие колоректального рака и тестирования новых лекарственных средств против колоректального рака.

протокол

I. Подготовка сотовый

1. Колоректальный раковые клетки выращиваются в культуре и собираться после subconfluent.
2. Суспензии отдельных клеток готовят в фосфатном буферном растворе и держал на льду.

II. Опухоль подготовка

1. Мышь с ранее установленной опухоли подкожной колоректального является эвтаназии.
2. Опухоль подкожной удаляется с использованием стерильной техники и разделен на части 2-3 мм
3. Опухоль части хранятся в фосфатном буферном растворе на льду.

III. Мышь Подготовка

Примечание: В нашей лаборатории мы используем вдыхании изофлуран на анестезию мыши; альтернативно, можно использовать инъекционного наркоза, чтобы достичь того же эффекта

1. Глубины анестезии оценивается с помощью ног крайнем случае. Там должно быть никаких снять рефлекс с ног крайнем случае.
2. Антибиотики могут быть даны в этой точке.
3. Наркозом мыши, которая ранее была выбрита, правильно расположен.
4. Живот нацелен с бетадин решение.
5. Брюшной полости и хирургические сайта завернуто в стерильных моды.

IV. Лапаротомия

1. Небольшой ник выполнен в коже
2. Брюшная мускулатура стены схватил и поднял
3. Брюшную полость вводится и одного лезвия ножниц используется для передачи внутрибрюшного содержимого от
4. Разрез продлен до 2-3 см.

В. Воздействие Слепая кишка

1. Слепая кишка с ее слепой мешок окончание выявлены и экстериоризируется
2. Слепая кишка изолированы от остальной части мыши, используя нарезанные, стерильные марлевые
3. Теплые солевые используется для хранения влажного слепой кишки

VI. Введение клеток в слепой кишки стены

1. 27 G или тоньше игла для инъекций 50 мкл объема клеток в слепой кишки стену
2. Игла удаляется
3. Место инъекции осматривается, чтобы убедиться в отсутствии утечки
4. Слепая кишка возвращается в брюшную полость

VII. Трансплантация опухоли на Слепая кишка

Примечание: В дополнение к инъекционным клеток в слепой кишки стены, Альтернативный подход заключается в трансплантации опухоли на слепой кишки

1. Фигура 8 стежка помещается на слепой кишки использованием 6-0 или 7-0 размера шва
2. Слепой кишки стены слегка поврежденных
3. Затем опухоль кусок позиционируется
4. Стежка увязла
5. Слепая кишка возвращается в брюшную полость

VIII. Мышь брюшной Закрытие стены и восстановление

1. Мышь брюшной стенки закрыта с помощью трех прервал стежки использованием 3-0 или 4-0 размера шва
2. Кроме того, можно использовать простой работает стежка
3. Послеоперационные анальгетики и жидкости болюсно может быть дана в этом пункте
4. Мышь, допускается, чтобы оправиться от наркоза.

Примечание: При ингаляционных анестетиков это обычно занимает 30 секунд

IX. Результаты - Первичная опухоль и метастазы печени

Первичные опухоли - показано на месте () и с признаками неоваскуляризации (B), с окрашиванием H & E, опухолях локально инвазивной (С)

Метастазами в печень - показал бывший естественных условиях (D)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Хотя мышиные модели подкожной опухоли легко установить и контролировать, то ясно, что эта модель не может воспроизвести оригинальную анатомических сайт колоректального рака. Из-за разницы в микросреде, толстой кишки раковые клетки растущего под кожей, как было показано изменение их фенотипа и по...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cell culture media and components			will vary depending on cell line used
Phosphate Buffered Saline	BioWhittaker	17-512F	also sold by a number of other vendors
15 mL centrifuge tubes, polypropylene	Corning	430790
6 well plates with lid	BD Biosciences	353046
Iris forceps, straight, serrated tips	World Precision Instruments, Inc.	15914	best to have a pair of these instruments
Iris dissecting scissors, straight, sharp	World Precision Instruments, Inc.	14393
Needle Holder (regular)	World Precision Instruments, Inc.	14109
Needle Holder (Castroviejo)	World Precision Instruments, Inc.	14137
Cidex Plus	World Precision Instruments, Inc.	7364	instruments should be autoclaved periodically, but may also be sterilized by soaking in Cidex
6-0 or 7-0 suture			for cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF
3-0 or 4-0 suture			for abd wall; courtesy of Department of Surgery, UCSF
Anesthetic machine / Isoflurane	J.A. Baulch and Associates	3206	also sold by a number of other vendors
Heating Pad, disposable, 6" x 6"	Prism Technologies	20419
Tape, orange, 13 mm x 13 m	Fisher Scientific	15901F	for restraining anesthetized mouse
Pro-Cord/Cordless Trimmer	Oster Professional Products	78997-010	for shaving mouse fur
Betadine	Fisher Scientific	19-027132	may also be purchased at any medical supply store
2 x 2 gauze, 3-ply	Johnson & Johnson	7635	may also be purchased at any medical supply store
Sterile Field, Barrier, 16" x 29"	Johnson & Johnson	0905	may also be purchased at any medical supply store
Cotton tipped applicators, 6"	Fisher Scientific	14-960-3Q	may also be purchased at any medical supply store
Syringe, 10 cc, Luer lock tip	BD Biosciences	309604
Syringe, 1 cc, tuberculin, slip tip	BD Biosciences	309602
27 1/2 G needle	BD Biosciences	305109
30 G needle	BD Biosciences	305106