JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В настоящем исследовании использованы микрофлюидных многопартийной системы и пластины, что значительно увеличивает пропускную способность исследований клеток качения под физиологически соответствующего сдвигового течения. Учитывая важность клеток прокатки в многоступенчатом клетки самонаведения каскад и важность клеток самонаведения следующий системной доставки экзогенных популяциях клеток у пациентов, эта система предлагает потенциал в качестве скринингового платформы для улучшения клеточной терапии.

Аннотация

Одна из основных задач для клеточной терапии является невозможность системно целевой большое количество жизнеспособных клеток с высокой эффективностью в тканях интерес после внутривенного или внутриартериального вливания. Следовательно, увеличение клеток самонаведения в настоящее время изучается как стратегии по улучшению клеточной терапии. Сотовый прокатки на эндотелий сосудов является важным шагом в процессе клеточного самонаведения и может прощупываться в пробирке с помощью параллельного проточную камеру пластина (PPFC). Тем не менее, это крайне утомительной, низкой пропускной анализ, с плохо контролируемых условий потока. Вместо этого мы использовали микрофлюидных многопартийной системы и пластины, что позволяет изучение свойств сотовой прокатки в более высокой пропускной способности при точно контролируемой, физиологически соответствующего сдвигового течения 1,2. В этой статье мы покажем, как The Rolling свойства HL-60 (промиелоцитарный лейкоза человека) клеток на P-и E-селектина покрытием поверхностей, а также на однослойных покрытием поверхностей клеток может быть readilу рассмотрели. Чтобы лучше имитировать воспалительных состояний, микрофлюидных поверхность канала была покрыта эндотелиальных клеток (ECS), которые затем были активированных фактор некроза опухоли-α (ФНО-α), что значительно увеличивает взаимодействия с HL-60 клеток в динамических условиях. Повышенная пропускная способность и интегрированная многопараметрический анализ программная платформа, которая позволяет быстрый анализ параметров, таких как прокатки скорости и подвижного путь, являются важными преимуществами для оценки свойств ячеек прокатки в пробирке. Разрешение быстрый и точный анализ инженерных подходов, направленных на влияние клеток прокатки и самонаведения, эта платформа может способствовать продвижению экзогенный клеточной терапии.

Введение

Одна из основных проблем в успешной клинической переводе клеточной терапии является неэффективным поставки или адресности системно переплетаются клеток к желаемым сайтов 3,4. Следовательно, существует постоянный поиск подходов к повышению клеток самонаведения, и, в частности клеток прокат, в качестве стратегии для улучшения клеточной терапии. Сотовый прокатки на кровеносные сосуды является ключевым шагом в клетки самонаведения каскада, классически, определенной для лейкоцитов, которые набраны на сайты болезни 5. Этот шаг регулируется специфических взаимодействий между эндотелиальными селектинов, то есть P-и E-селектина (P-и E-SEL), и их лиганды счетчик на поверхности лейкоцитов 5,6. Лучшее понимание и повышение эффективности клеточной самонаведения, и, в частности подвижного шаг, имеют большое значение в поиске новых платформ для улучшения клеточной терапии. На сегодняшний день это было достигнуто с помощью параллельных камер потока пластина (PPFCs), включающий два плоских Platэс с прокладкой между ними, с притоком и оттоком порт, расположенный на верхней пластине, через которые клеточную суспензию перфузии с помощью шприцевой насос 7,8, 9. Поверхность нижней пластины могут быть покрыты соответствующими монослой клеток / подложек и взаимодействие между клетками и перфузии поверхности под сдвиговом потоке затем исследовали 7. Тем не менее, PPFC является низкая пропускная способность, реагент трудоемкий, и довольно утомительно метод, с образованием пузырьков, утечки, и плохо контролируемым потоком, представляя основные недостатки.

Альтернативный метод с традиционным PPFC является многопрофильным лунками микрофлюидных система, позволяющая более высокую пропускную способность сотовых анализов (до 10 раз выше, чем PPFCs) под точной, сдвигового течения с компьютерным управлением, с низким потреблением реагента 1,10. Эксперименты Cell прокатки выполняется внутри микроканалов, которые могут быть покрыты клеточных монослоев или модифицированных субстратов и отображаемого USIнг микроскоп, с прокатных свойств легко проанализированы с использованием подходящего программного обеспечения. В этом исследовании мы демонстрируем возможности этого мульти-луночного планшета микрофлюидных системы от изучения прокатки свойства человеческого промиелоцитарного лейкоза (HL-60) клеток на различных поверхностях. HL-60 прокатки на подложках, таких как P-и E-SEL, а также на монослои клеток, экспрессирующих различные рецепторы прокатки, была проанализирована. Кроме того, антитела (Ab) блокирование был использован, чтобы продемонстрировать непосредственное участие конкретных селектинов в посредничестве прокатки движение HL-60 на тех поверхностях. Прокатные Эксперименты проводились с повышенной пропускной способности, при устойчивом сдвиговом потоке, с минимальным потреблением реагента / клеток, что позволяет проводить эффективный анализ ключевых параметров прокатки, таких как скорости качения, количество прокатных клеток и прокатных свойств пути.

протокол

1. Культура клеток

  1. Человека промиелоцитарный лейкоз (HL-60) клетки
    1. Культура HL-60 клеток в 75 см 2 колбы с 15 мл Искова модифицированной Дульбекко среды (IMDM), дополненной 20% (объем / объем) фетальной бычьей сывороткой (FBS), 1% (об / об) L-глутамина и 1 % (объем / объем) пенициллин-стрептомицин.
    2. Изменение СМИ каждые 3 дня путем аспирации половину объема клеточной суспензии и заменить его полной IMDM СМИ.
    3. Для Карбоксифлуоресцеин диацетат, сукцинимидил эфир (CFSE) окрашивание, центрифуге HL-60 клеточной суспензии (400 XG, 5 мин), ресуспендируют в растворе 1 мкМ CFSE (полученного в предварительно нагретом PBS) и инкубировали в течение 15 мин при 37 ° С Тогда центрифуги клетки, аспирации супернатант и ресуспендирования клеток в свежей нагретого среды в течение 30 мин. Вымойте клеток в PBS, а затем использовать для прокатки экспериментов (см. рис 1В для представительного образа CFSE окрашенных HL-60 клеток на P-сель покрытием поверхности).

Примечание: окрашивание CFSE не является обязательным, и представлена ​​здесь, чтобы продемонстрировать качению явление в микрофлюидных канала. Анализ прокатки параметров, представленных в этой рукописи была выполнена на неокрашенных клеток с использованием стандартного изображений светлое.

  1. Легких эндотелиальные клетки микрососудов (LMVECs)
    1. Coat 100 мм чашки Петри с 0,1% раствора желатина (об / об) в ЗФР ​​и инкубируют при 37 ° С в течение по крайней мере 30 мин.
    2. Культура LMVECs на покрытые желатином 100 мм чашках Петри в полной среде роста эндотелия (эндотелиальный базальный среда-2 (EBM-2)) с добавлением определенного набора добавок рост см. реактивов). Изменение носителя через день и суб-культуры клеток по достижении 80-90% слияния.
    3. Для субкультуры, мыть клетки с PBS, а затем отделить клетки с 4 мл 1х трипсин-ЭДТА в течение 3 мин при 37 ° С и нейтрализуют в равном объеме полных EBM-2 сред. Передача клеточной суспензии в 15 мл пробирку и centrifugе (400 XG, 5 мин). После центрифугирования ресуспендируют осадок в 1 мл полной эндотелиальных информации и подсчета клеток с помощью гемоцитометра. Не более-проход клетки, так как это влияет на их морфологию и функцию-использование только ячейки при переходе 7 для всех экспериментов.
  1. Яичника китайского хомячка-P-селектин (CHO-P) Клетки
    1. СНО-P клетки, которые являются СНО, стабильно трансфицированные выразить человеческую P-Сель, были предоставлены сотрудниками (Beth Израиля Медицинский Центр Диаконисы, Гарвардской медицинской школы) 11,12.
    2. Культура СНО-P клетки в T175 см 2 колбы в 25 мл F-12 средств массовой информации.
    3. Для пассирования, мыть клетки с 10 мл PBS в течение 4-5 сек, а затем Trypsinize в 10 мл 1х трипсин-ЭДТА в течение 3 мин при 37 ° С, с последующей нейтрализацией в полном объеме средств массовой информации.
    4. Центрифуга клеточной суспензии (400 XG, 5 мин), тщательно аспирата супернатант, ресуспендируют осадок клеток в 1 мл полной информации и подсчет клеток сгемоцитометр.

2. Работы интегрированной плиты на нескольких хорошо микрофлюидных системы

  1. Убедитесь, что все оборудование подключено и включите различных модулей: компьютерные, контроллеров, инвертированный микроскоп, и ПЗС камеры.
  2. Откройте для обработки изображений; убедиться, что модуль пластина нескольких хорошо и модуль визуализации правильно представлены на экране.
  3. Подключите трубы к пароблокировки (подключенного к контроллеру), а также соединить их к интерфейсу давления.
  4. Поместите пластину мульти-а в своей тарелке отопителя / адаптера. Добавить реагентов в лунки (см. ниже) и прикрепить интерфейс на верхней части пластины. Поместите пластину для работы с изображениями на автоматизированной этапе.
  5. Интерфейс прикрепляется к верхней части пластины и применяет пневматическое давление от контроллера к верхней части скважин, движущей текучей среды через микроканалов на определенной скорости потока, легко управлять с помощью мульти-луночный планшет сМодуль экрана под ручном режиме.
  6. Реагенты в потоке канала через смотровой площадке, расположенной между скважинами. Микрофлюидных размеры канала являются 350 мкм в ширину х 70 мкм в высоту. Длина линейного канала составляет 1 мм, а нижний из каналов содержит покровное стекло 180 мкм, который совместим с светлого, фазы флуоресценции и конфокальной микроскопии.
  7. Приобретать видео с помощью ПЗС-камеры (приобретение поток, 11 кадров / сек) и анализировать с помощью совместимого программного обеспечения.

3. Покрытие микроканалов с белковым субстратом или клеточный монослой

  1. Покрытие микрофлюидных канал с фибронектина или P-/E-selectin
    1. Подготовка 1 мл 20 мкг / мл фибронектина раствора в PBS. Изменение громкости в зависимости от количества каналов для нанесения покрытия (25-50 мкл использовать фибронектина на канал).
    2. Добавить 25-50 мкл фибронектина решение для каждого входе хорошо. Применить сдвига силу 2 дин / см 2в течение 5 мин, чтобы заливать канал. Пожалуйста, обратите внимание борт жидкости появляются на выходе хорошо. Инкубировать в течение 30-45 минут при комнатной температуре
    3. Аспирируйте решение от скважин (не аспирации непосредственно из средней окружности, которая кормит канал) 1,13. Добавить 200-500 мкл PBS в выходе хорошо и мыть канал с PBS, применяя поток сдвиг 2 дин / см 2 в течение 5 мин. Теперь канал должным образом покрыты фибронектина и готов к использованию.
    4. Для пальто с P-или E-SEL, подготовить 5 мкг / мл раствор желаемого человеческого рекомбинантного белка в PBS, и пальто каналов, как описано выше, с 1 ч инкубации при 37 ° С, чтобы позволить покрытие поверхности.
  2. Создание СНО-P или LMVEC монослоя внутри микрожидкостных канал
    1. Осторожно Trypsinize клетки из культуральных чашек в течение 3 мин, погасить с помощью 2-кратный объем полных сред и центрифуге (5 мин при 400 х г). Ресуспендируют клеток с 10 мл полной информации и центрифуги (5 мин при 400 х г) Агаин.
    2. Граф клеток для определения концентрации клеток в суспензии. Чтобы обеспечить формирование сливной LMVEC монослоя внутри канала, довести концентрацию клеток до 15-20 млн. клеток / мл. Для сливной СНО-P клеточный монослой, использовать 50-60 миллионов клеток / мл. Использование 25-50 мкл клеточной суспензии для каждого канала - определить начальное число клеток использовали для эксперимента соответственно.
    3. Добавить 25-50 мкл клеточной суспензии в соответствующей концентрации к впускному отверстию скважины. Место пластины на столик микроскопа и ввести клетки в канал (2 дин / см 2), пока клетки наблюдаются на экране занимает весь каналов, а затем остановить поток.
    4. Заполните как выход и вход с 200 мкл либо полной LMVEC или СНО СМИ. Пусть клетки осесть и придерживаться в течение 3 ч в инкубаторе (37 ° C, 5% CO 2).
    5. После 3 ч инкубации, мыть канал с полным СМИ (2 дин / см 2, 10-15 мин), чтобы удалить одинокихклетки. Теперь Клетки должны появиться полностью сливающиеся и канал готов к использованию. В зависимости от начальной плотности посева клеток, дополнительные 2-3 часа заселения время может потребоваться для обеспечения полного охвата поверхности с клетками.

4. LMVEC провоспалительных Активация и антител Блокирование P-/E-selectin

  1. Подготовка TNF-α раствор (10 нг / мл) в LMVEC основных сред.
  2. Чтобы индуцировать воспалительный активацию LMVEC в каналах, добавьте 100 мкл TNF-α раствора к входному отверстию хорошо и вводить раствор в канал с применением сдвиговом потоке 2 дин / см 2 в течение 5 мин. Для каналов управления (неактивированных ECS), добавить 100 мкл LMVEC основных сред на вход хорошо и ввести в канал (2 дин / см 2 в течение 5 мин). Канал готов к прокатного анализа.
  3. Чтобы заблокировать P-Сель и E-Сель на LMVECs и СНО-P клеток, ввести нейтрализации P-SEL (клон AK4, 5 мкг / мл в басал носитель) или E-SEL (клон P2H3, 5 мкг / мл в базальной среде) антител в канал и инкубировать в течение 1 часа при 37 ° С. Затем промыть каналы с базальной СМИ (2 дин / см 2 в течение 5 мин). Каналы теперь готовы для прокатки анализа.

5. HL-60 Роллинг Анализ на Субстрат / клеточный монослой покрытием микроканалов

  1. Тщательно изучить каналов под микроскопом, чтобы подтвердить, что каналы должным образом с покрытием (в случае покрытия с клетками, полностью сливной монослой клеток следует соблюдать).
  2. Для подготовки HL-60 клеточной суспензии для прокатных экспериментов, центрифуги HL-60 клеточной суспензии (5 мин при 400 х г) и мыть один раз с базальных СМИ. Граф клеток и ресуспендируют в IMDM (базальные средств массовой информации, содержащие Са 2 + и Mg 2 +), чтобы создать HL-60 клеточной суспензии с 5 миллионов клеток / мл. Использование 25-50 мкл клеточной суспензии для каждого канала для выполнения прокатки анализа.
  3. Добавить 25-50 мкл клеточной suspension к выходу хорошо, место пластину внутри контролируемой температурой держателе (37 ° C) и места на столик микроскопа. Затем ввести клетки в канал с применением сдвига силу 2 дин / см 2 (клетки должны соблюдаться в пределах 10-15 сек, вытекающей из розетки, чтобы вход).
  4. Для изучения качению ответ в зависимости от напряжения сдвига, уменьшить сдвиг до 0,25 дин / см 2 и приобрести 20-30 секунд видео (с помощью функции "приобретения поток") в каждой требуемой сдвига (увеличение сдвига постепенно от 0,25 до 5 дин / см 2. Кроме того, можно использовать более высокие ножницы).
  5. Приобретать видео с помощью ПЗС-камеры (приобретение поток, 11 кадров / сек) и анализировать прокатных пути и подвижного скорости через совместимое программное обеспечение.

6. Проточной цитометрии для обнаружения экспрессии поверхностных молекул

  1. После трипсинизации, подготовить суспензии клеток (с помощью 1-2 × 10 5 клеток / образец) желаемого типа клеток (HL-60, СНО-P или LMVECs) в PBS (- / -), с добавлением 2% FBS. Вымойте клетки дважды и принести объем образца 50 мкл (используя тот же буфер).
  2. Инкубируют каждый образец с желаемым флуорофора, конъюгированным АВ (см. прилагаемую таблицу для более подробной информации) при 4 ° С в течение 20 мин (покрывают алюминиевой фольгой).
  3. Вымойте клетки дважды (тот же буфер) и принести окончательный объем окрашенных клеточной суспензии в 200 мкл. Анализ образцов использованием проточного цитометра, чтобы обнаружить экспрессию поверхностных молекул.

Результаты

HL-60 клеток кататься по P-и E-селектина поверхностей, но не на фибронектине

HL-60 клетки считаются золотым стандартом "ролики", как они выражают различные самонаводящихся лигандов, в том числе подвижного лигандов P-гликопротеинов SEL лиганд-1 (PSGL-1) и сиалил-Льюиса X (Slex) 5,14

Обсуждение

Одна из основных проблем в успешного перевода экзогенного клеточной терапии является невозможность эффективно доставлять клетки к местам повреждения и воспаления с высокой эффективностью приживления 3. Сотовый прокатки представляет собой важный шаг в процессе клеточного само...

Раскрытие информации

Авторы заявляют никакого конфликта интересов.

Благодарности

СНО-P клетки были своего рода подарок от доктора Барбары Furie (Бет Израиль медицинский центр Deaconess, Гарвардской медицинской школы). Эта работа была поддержана Национальным институтом здравоохранения гранта HL095722 чтобы JMK Эта работа также была частично поддержана в Movember-рака простаты фонда Вызовы премии к JMK

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Human Lung Microvascular Endothelial CellsLonzaCC-2527
P-selectin-expressing Chinese Hamster Ovary Cells (CHO-P)Kind gift by Dr. Barbara Furie11,12
HL-60 CellsATCCCCL-240
Cell Culture Reagents
Endothelial Basal MediumLonzaCC-3156
EBM-2 MediaLonzaCC-3156
Endothelial Basal Medium SupplementsLonzaCC-4147
EGM-2 MV SingleQuotsLonzaCC-4147
IMDM - Iscove's Modified Dulbecco's Medium 1xGibco12440
F-12 (1x) Nutrient Mixture (Ham)Gibco11765-054
Penicillin Streptomycin (P/S)Gibco15140
L-Glutamine (L/G) 200 mMGibco25030
Fetal Bovine Serum (FBS)Atlanta BiologicalsSa550
Petri DishesBD FalconBD-353003
100 mm Cell Culture Dish, Tissue-Culture Treated Polystyrene
Centrifuge Tubes (15 ml polypropylene conical tubes)MedSupply PartnersTC1500
T75 FlasksBD Falcon353136
Gelatin Solution (2%)SigmaG1393
dPBS (without calcium chloride and magnesium chloride)SigmaD8537
Trypsin-EDTA Solution (10x)SigmaT4174
Antibodies
Anti-hE-Selectin/CD62ER&D SystemsBBA21
FITC Conjugated Mouse IgG1R&D SystemsBBA21
Anti-hP-SelectinR&D SystemsBBA34
FITC Conjugated Mouse IgG1R&D SystemsBBA34
FITC Mouse IgG­1 κ Isotype ControlBD Bioscience555748
Anti-SLeX /CD15s Ab, Clone: 5F18Santa CruzSC70545
FITC ConjugatedSanta CruzSC70545
Normal Mouse IgM-FITC Isotype ControlSanta CruzSC2859
PE Mouse Anti-Human CD162, Clone: KPL-1BD Pharmingen556055
PE Mouse IgG1 k Isotype ControlBD Pharmingen550617
Anti-P-Selectin Ab (AK4)Santa CruzSC19996
Anti-E-Selectin Ab, Clone P2H3MilliporeMAB2150
Mouse IgG1 Isotype ControlSanta CruzSC3877
Other Reagents
Recombinant Human TNF-alphaPeproTech300-01A
Cell Trace CFSE Cell Proliferation Kit - For Flow CytometryInvitrogenC34554
Human P-selectin-FC recombinant proteinR&D Systems137-PS-050
Human E-selectin-FC recombinant proteinR&D Systems724-ES-100
Fibronectin Human, PlasmaInvitrogen33016-015
Equipment
Bioflux 1000Fluxion BiosciencesBioflux Montage was the software used to run the experiments and analyze the data
BioFlux 48-well platesFluxion Biosciences
BD Accuri C6 Flow CytometerBD BioscienceCFlow Plus was the software used to run the experiments and analyze the data
Nikon Eclipse Ti-SNikon
CoolSnap HQ2 CCD cameraPhotometrics

Ссылки

  1. Conant, C. G., et al. Well plate microfluidic system for investigation of dynamic platelet behavior under variable shear loads. Biotechnol. Bioeng. 108, 2978-2987 (2011).
  2. Conant, C. G., Schwartz, M. A., Ionescu-Zanetti, C. Well plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays. J. Biomol. Screen. 15, 102-106 (2010).
  3. Ankrum, J., Karp, J. M. Mesenchymal stem cell therapy: Two steps forward, one step back. Trends Mol. Med. 16, 203-209 (2010).
  4. Karp, J. M., Leng Teo, G. S. Mesenchymal stem cell homing: the devil is in the details. Cell Stem Cell. 4, 206-216 (2009).
  5. Luster, A. D., Alon, R., von Andrian, U. H. Immune cell migration in inflammation: present and future therapeutic targets. Nat. Immunol. 6, 1182-1190 (2005).
  6. Ley, K. The role of selectins in inflammation and disease. Trends Mol. Med. 9, 263-268 (2003).
  7. Sperandio, M., Pickard, J., Unnikrishnan, S., Acton, S. T., Ley, K. Analysis of leukocyte rolling in vivo and in vitro. Methods Enzymol. 416 (06), 346-371 (2006).
  8. Brown, D. C., Larson, R. S. Improvements to parallel plate flow chambers to reduce reagent and cellular requirements. BMC Immunol. 2, 9 (2001).
  9. Lawrence, M. B., McIntire, L. V., Eskin, S. G. Effect of flow on polymorphonuclear leukocyte/endothelial cell adhesion. Blood. 70, 1284-1290 (1987).
  10. Conant, C. G., Schwartz, M. A., Nevill, T., Ionescu-Zanetti, C. Platelet adhesion and aggregation under flow using microfluidic flow cells. J. Vis. Exp. (10), e1644 (2009).
  11. Furie, B., Furie, B. C. Role of platelet P-selectin and microparticle PSGL-1 in thrombus formation. Trends Mol. Med. 10, 171-178 (2004).
  12. Tchernychev, B., Furie, B., Furie, B. C. Peritoneal macrophages express both P-selectin and PSGL-1. J. Cell Biol. 163, 1145-1155 (2003).
  13. Conant, C. G., et al. Using well-plate microfluidic devices to conduct shear-based thrombosis assays. J Lab Autom. 16, 148-152 (2011).
  14. Larsen, G. R., et al. P-selectin and E-selectin. Distinct but overlapping leukocyte ligand specificities. J. Biol. Chem. 267, 11104-11110 (1992).
  15. Varki, A. Selectin ligands: will the real ones please stand up. J. Clin. Invest. 100, S31-S35 (1997).
  16. Bohnsack, J. F., Chang, J. Activation of beta 1 integrin fibronectin receptors on HL60 cells after granulocytic differentiation. Blood. 83, 543-552 (1994).
  17. Lawrence, M. B., Kansas, G. S., Kunkel, E. J., Ley, K. Threshold levels of fluid shear promote leukocyte adhesion through selectins (CD62L,P,E). J. Cell Biol. 136, 717-727 (1997).
  18. Moore, K. L., et al. P-selectin glycoprotein ligand-1 mediates rolling of human neutrophils on P-selectin. J. Cell Biol. 128, 661-671 (1995).
  19. Lawrence, M. B., Springer, T. A. Neutrophils roll on E-selectin. J Immunol. 151, 6338-6346 (1993).
  20. Yao, L., et al. Divergent inducible expression of P-selectin and E-selectin in mice and primates. Blood. 94, 3820-3828 (1999).
  21. Sackstein, R. Glycoengineering of HCELL, the human bone marrow homing receptor: sweetly programming cell migration. Ann. Biomed. Eng. 40, 766-776 (2012).
  22. Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. Analysis of physiologic E-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium. J. Vis. Exp. , e1009 (2009).
  23. Muller, W. A., Luscinskas, F. W. Assays of transendothelial migration in vitro. Methods Enzymol. 443, 155-176 (2008).
  24. Bakker, D. P., vander Plaats, A., Verkerke, G. J., Busscher, H. J., vander Mei, H. C. Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces. Appl. Environ. Microbiol. 69, 6280-6287 (2003).
  25. Benoit, M. R., Conant, C. G., Ionescu-Zanetti, C., Schwartz, M., Matin, A. New device for high-throughput viability screening of flow biofilms. Appl. Environ. Microbiol. 76, 4136-4142 (2010).
  26. Varki, A. Selectin ligands. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 7390-7397 (1994).
  27. Ramos, C. L., et al. Direct demonstration of P-selectin- and VCAM-1-dependent mononuclear cell rolling in early atherosclerotic lesions of apolipoprotein E-deficient mice. Circ. Res. 84, 1237-1244 (1999).
  28. Yago, T., et al. Core 1-derived O-glycans are essential E-selectin ligands on neutrophils. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, (2010).
  29. Yago, T., et al. E-selectin engages PSGL-1 and CD44 through a common signaling pathway to induce integrin alphaLbeta2-mediated slow leukocyte rolling. Blood. 116, 485-494 (2010).
  30. Simone, G., et al. Cell rolling and adhesion on surfaces in shear flow. A model for an antibody-based microfluidic screening system. Microelectronic Eng. 98, 668-671 (2012).
  31. Perozziello, G., et al. Microfluidic devices modulate tumor cell line susceptibility to NK cell recognition. Small. 8, 2886-2894 (2012).
  32. Perozziello, G., et al. Microfluidic biofunctionalisation protocols to form multivalent interactions for cell rolling and phenotype modification investigations. Electrophoresis. , (2013).
  33. Simone, G., et al. A facile in situ microfluidic method for creating multivalent surfaces: toward functional glycomics. Lab Chip. 12, 1500-1507 (2012).
  34. Sarkar, D., et al. Engineered cell homing. Blood. 118, e184-e191 (2011).
  35. Cheng, Z., et al. Targeted Migration of Mesenchymal Stem Cells Modified With CXCR4 Gene to Infarcted Myocardium Improves Cardiac Performance. Mol. Ther. 16, 571-579 (2008).
  36. Enoki, C., et al. Enhanced mesenchymal cell engraftment by IGF-1 improves left ventricular function in rats undergoing myocardial infarction. Int. J. Cardiol. 138, 9-18 (2010).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

80MicrofluidicsHL 60P

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены