Мониторинг системных и печени параметров гемодинамики у мышей

Резюме

Этот фильм показывает, как приобрести системные и печеночные гемодинамики у мышей. Весь мониторинг включает приобретение жизненно важных параметров, системного артериального давления, центрального венозного давления, общего расхода артерии печени, и портал давления вены, а также скорость потока портал у мышей.

Аннотация

Использование моделей мыши в экспериментальных исследованиях имеет огромное значение для изучения печени физиологии и патофизиологии нарушений. Однако в связи с небольшим размером мыши, технические детали процедуры интраоперационного мониторинга, подходящей для мыши редко описано. Ранее мы уже сообщали процедуру мониторинга для получения гемодинамики у крыс. Теперь, мы адаптировали процедуру приобретения системных и печеночные показатели гемодинамики у мышей, вид в десять раз меньше, чем у крыс. Этот фильм демонстрирует приборов животных, а также процесс сбора данных, необходимых для оценки системных и печеночные гемодинамики у мышей. Жизненные параметры, в том числе температуры тела, частоты дыхания и частоты сердечных сокращений были записаны в течение всей процедуры. Системной гемодинамики состоят из давления сонной артерии (CAP) и центрального венозного давления (ЦВД). Печеночные показатели перфузии включают портал VEin давление (ПВП), скорость потока портала, а также скорость потока общей печеночной артерии (таблица 1). И средств сбора данных для записи нормальные значения был завершен в течение 1,5 часов. Системные и печеночные показатели гемодинамики оставались в пределах нормы во время этой процедуры.

Эта процедура является сложной задачей, но выполнимая. Мы уже подали эту процедуру для оценки печеночной гемодинамики у нормальных мышей, а также при 70% и частичной гепатэктомии в доле печени зажима экспериментов. Средний PVP после резекции (п = 20), был 11,41 ± 2,94 КМЗ ₂ O, который был значительно выше (Р <0,05), чем раньше резекции (6,87 ± 2,39 КМЗ ₂ O). Результаты доли печени зажимного эксперимент показал, что эта процедура мониторинга является чувствительным и пригодны для обнаружения небольших изменений в портального давления и скорости потока портала. В заключение, эта процедура является надежным в руках опытного микро-хирурга, но должно быть ограничено ехрeriments где мышей абсолютно необходимы.

Введение

Общая цель этого видео было продемонстрировать процедуру мониторинга в режиме реального времени для получения системных и печеночные показатели гемодинамики. Причиной разработки этой процедуры является ее большое значение для экспериментальных вмешательств у мышей, которые требуют получения системных и печеночные показатели гемодинамики. Эта процедура может быть применена к наивных животных и во время или после заданного гепато-билиарной экспериментальной хирургического вмешательства, таких как частичной гепатэктомии воротной вены, лигирование и трансплантации печени.

Приобретение печеночных гемодинамики данных у грызунов требуется предложенную инвазивные процедуры. Печени перфузии не может быть получена неинвазивным. Тем не менее, есть альтернативы для приобретения системного артериального давления. Техника мониторинга, такие как техники хвост манжеты ⁸ были использованы для приобретения кровяное давление в обоих крыс и мышей. Методика хвост манжеты могут быть применены в consciOUS животных. При измерении кровяного давления, животное должно быть размещены и закреплены в определенном неудобном положении. В руководстве по эксплуатации хвост манжеты устройства, производитель заявляет, что мыши могут стать нервным и подчеркнул, которое может снизить циркуляцию в хвосте. В соответствии с этим обстоятельством, периферической крови, приобретенный в хвосте давление может быть намного ниже, чем в центральной артериального давления.

Процедура полный мониторинг проводили с интегрированным монитором многоканальным используя серию датчиков для сбора данных. Давление крови была получена путем введения катетера в соответствующем сосуде после тщательного микрохирургической вскрытия и воздействия под микроскопом. Скорость потока была измерена путем размещения трансзвуковой зонд потока вокруг каждого судна.

Мы уже сообщали об аналогичном интраоперационной процедуру мониторинга для крыс приводит к всеобъемлющей серии физиологических гемодинамики данных, сопоставимых с одданные по сообщениям из других групп ^7. Поэтому мы считали эту процедуру, чтобы представлять хорошую основу для адаптации к мыши, вида 10 раз меньше, чем у крыс. Основное различие с процедурой, крысы является использование катетеров Миллар для получения данных артериального давления, вместо системы катетера на основе текучей среды. Поток данных были также приобретены с околозвуковых зондов потока, всего много мелких, чем за соответствующий крысы сосудов.

В связи с небольшим размером животного, приборы мышей технически сложным, но возможным. После того, как приборы завершена, сбора данных и первичный анализ данных жизнь проста, так как предопределенный файл настройки могут использоваться. Файл параметр должен быть определен один раз в начале серии экспериментов, и могут быть сохранены и использоваться для всех последующих экспериментах.

До сих пор мы применяли эту процедуру для оценки печеночные гемодинамические эффекты в острых опытах. Мы измерили CAP и ПВП до и сразу после 70% частичной гепатэктомии (PH) и в зажимные / де-зажима эксперименты. Мы зажат гепато-перстной связки правой доли составляет 20% от печени масса последующим кратким (5 минут) зажима медианы и левого бокового лепестка, представляющей совершенно 90% массы печени. Де-зажима начал с освобождения зажим с правой доле последующим освобождая средней и левой боковой лепесток. Максимальное время зажима был ниже 10 мин.

протокол

Корпус и все процедуры, проводимые были в соответствии с немецким защиты животных законодательства.

1 Датчики Калибровка (Следуйте инструкциям производителя для датчиков калибровки)

1.1) Миллар катетер калибровки. Предварительно замочить кончик катетера в стерильной водой или физиологическим раствором в течение 30 мин до сбалансировать (обнуления) и калибровки.

1. Подключите Миллар датчик к millar1 канала усилителя моста и вставьте Миллар наконечник датчика в толще воды.
2. Установите значение водяного столба до 0 КМЗ ₂ O. В анализе данных окна программы, выбрать мост усиливать и обнулить его. Базовое значение 0 КМЗ ₂ O может быть установлен.
3. Установите значение водяного столба до 20 КМЗ ₂ O. Запуск анализа данных окна программного обеспечения прогресса, и остановиться. Выберите "единицы" в окне моста усиливать, установить базовую 0 и 20 КМЗ ₂ O соответственно. Отрегулируйте "единицу", чтобы КМЗ <суб> 2 O.
4. Калибровка millar2 для измерения CAP таким же образом (установить два базовой линии 90 и 110 КМЗ ₂ O).

1.2) калибровка зонда Кровоток

1. Поставьте датчик в деионизированной воде. Подключите датчик с системой трансзвуковом зонда поток.
2. В анализе данных окне программы, выберите Ввод усиления к нулю зонд потока. Отрегулируйте единиц.
3. Нажмите кнопку "тест-канал", чтобы собрать сигнал: если сигнал имеет 3-4 баров, это означает, что сигнал хороший. В случае, если приобретается хороший сигнал, процедура может быть продолжена.
4. Нажмите кнопку "ноль канал" и масштаб канал, чтобы увидеть, был ли откалиброван значение или нет.
5. Нажмите кнопку, чтобы "мера канал" для последующего измерения.

2 Подготовьте мышь для хирургической процедуры

1. Наведите в индукционной камере и обезболить мышь с 2% изофлуран и0,3 мл / мин кислорода. Операция может быть выполнена, если схождение щепотка снятие рефлекс мыши отсутствует.
2. Бритье мех хирургических регионах, в том числе левую шею и живот.
3. Наведите на операционном столе и закрепить его с помощью ленты. Используйте ветеринар мазь на глазах, чтобы предотвратить сухость в период эксплуатации.
4. Поместите марлевую подушку под шею для оптимальной экспозиции операционного поля шеи.
5. Лечить поле работы и разместить стерилизованные сеток для покрытия мышь только оставив операционного поля открыты.

3. жизненные параметры измерения

1. Вставьте ЭКГ иглы подкожно в лапы мыши.
2. Установите датчик дыхательных в задней части мыши.
3. Поместите датчик температуры в прямой кишке мыши.
4. Температура Запись ЭКГ и частоты дыхания мыши в программное обеспечение для анализа данных.

4 шеи Операция для Systemic Сердечно-сосудистая Мониторинг

4.1) судно рассечение

1. Определить среднюю линию шеи, среднюю точку ключицы, угол нижней челюсти.
2. Сделать 2 см продольный разрез от угла нижней челюсти к средней точке ключицы, который 0,5 см с левой стороны от средней линии.
3. Проанализируйте подчелюстной слюнной железы, переверните его и покрыть ее солевого пропитанной марли.
4. Определите яремную вену, вскрыть его и поместите три 6-0 шелковые швы под вены для последующего лигирования и фиксации.
5. Определить кивательной мышцы, отделить его от верхнего чреве omohyoid и заднее брюшко двубрюшной мышцы, и вытащить его с втягивающим для легкого воздействия на сонной артерии.
6. Проанализируйте сонную артерию и поместите три 6-0 шелковые швы под артерии для последующего лигирования и фиксации.

4.2) измерение кровотока в сонной артерии

1. Поместите трансзвуковыеисследовать вокруг сонной артерии, держать его стабильным, и оптимизировать контакт с помощью ультразвука гель или физиологический раствор.
2. Запись скорость кровотока в сонной артерии, как указано на маленьком экране трансзвуковом устройства с помощью программного обеспечения для анализа данных
3. Снимите зонд после завершения измерения

4.3) для измерения давления Сонная артерия (CAP)

1. Лигировать дистальный конец сонной артерии и зажим его проксимальный конец.
2. Поместите 2 крепежных швов вокруг сонной артерии. Используйте 10-0 Prolene для пребывания шва.
3. Сделать небольшой разрез на передней стенке сосуда.
4. Вставьте Миллар катетер и исправить ее с предварительно размещены швов.
5. Запишите CAP в программное обеспечение для анализа данных.

4.4) измерение кровотока яремной вены

1. Поднимите яремную вену и поместите трансзвуковое зонд потока для измерения расхода.
2. Запишите расход в программное обеспечение для анализа данных.

4.5) измерение Центральное давление венозной (CVP)

1. Зажим проксимальный конец яремную вену и лигируют дистального конца.
2. Вырезать небольшой надрез с помощью microscissors на передней стенке сосуда.
3. Вставьте заполненный жидкостью катетер и зафиксируйте его с помощью предварительно размещены линий швов.
4. Запишите CVP в программное обеспечение для анализа данных.

5 полостной операции для приобретения печеночной гемодинамики

5.1) определение судно

1. Сделайте поперечный разрез на животе.
2. Eventerate кишечник в левую сторону и накрыть влажной марлей.
3. Определить нижнюю полую вену, в портальную вену, общей печеночной артерии и надлежащего печеночной артерии.
4. Оставьте немного теплой солевой раствор в животе и на поверхности кишечника каждые 5 мин в течение всей процедуры мониторинга.

5.2) Измерение портального кровотока

1. Проанализируйте в портальную вену.
2. Поместите 6-0 шелк под воротной вены, чтобы облегчить снятие судна при размещении зонд потока.
3. Поместите трансзвуковое зонд потока вокруг воротной вены и измерить его скорость кровотока.
4. Запишите скорость кровотока в воротной вене.

5.3) Измерение общего потока печеночной артерии

1. Проанализируйте общей печеночной артерии осторожно.
2. Поместите один 6-0 шелковой нити вокруг судна, чтобы облегчить подъем судна.
3. Поместите зонд потока вокруг артерии.
4. Измерьте свой кровоток и получения данных.

5,4) Измерение давления воротной вены (ПВП)

1. Выберите один филиал брыжеечной вены с нескольких боковых ответвлений, который истощает прямо в воротной вене.
2. Лигировать дистальный конец выбранного брыжеечной вены. Убедитесь, что лигирование близка к кишечной трубки. Лигировать свои мелкие ветки
3. Поместите 2 Fixing швов, используя 6-0 Prolene вокруг вены. Ключевым моментом этой процедуры является, не прикасаясь к брыжеечной артерии, когда лигирования вены.
4. Зажмите проксимального конца воротной вены.
5. Place 2 Stay швов, используя 10-0 Prolene. Некоторые кровотечение будет происходить с пребывание шов должен проникнуть в сосудистую стенку тонкой брыжеечной вены.
6. Сделайте небольшой надрез на ключе, используя microscissor косо под углом 45 градусов.
7. Вставьте катетер Millar через брыжеечной вены в воротной вене и исправить
8. Запишите давление воротной вены. В конце процедуры, пожертвовать мышей путем обескровливания при анестезии.

Результаты

Жизненно важные параметры, такие как мышей частоты дыхания и частоты сердечных сокращений, очевидно, значительно выше, чем у крыс. Среднее системное артериальное давление и яремной вены давление аналогичны значений крыс и даже похожи на человеческие данных.

Печеночные ...

Обсуждение

Мониторинг печеночных гемодинамики является важным инструментом исследования в гепатологии и гепатобилиарной хирургии. Приобретение печени гемодинамических данных помогает охарактеризовать действие гепатобилиарных процедур на сердечно-сосудистой системы. Приобретение печеночн?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
PowerLab 16/30	ADInstruments	PL3516
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224	Bridge amplifier
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE136
Needle Electrodes for FE136 (3 pk)	ADInstruments	MLA1213
Perivascular Flowmeter Module	Transonic	TS420
Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB	Transonic	MA0.5PSB/MA1PSB
SPR-1000 Mouse Pressure Catheter	Millar instruments	841-0001
fluid filled catheter	Terumo	SR+DU2619PX	26G, 0.64×19mm
micro scissors	F·S·L	No. 14058-09
micro serrefine	F·S·L	No.18055-05
Micro clamps applicator	F·S·L	No. 18057-14
Straight micro forceps	F·S·L	No. 00632-11
Curved micro forceps	F·S·L	No. 00649-11
needle-holder	F·S·L	No. 12061-01
6-0 silk	ethicon
6-0 prolene	ethicon
7-0 prolene	ethicon
10-0 prolene	ethicon
Tail cut-off device	Kent Scientific		www.kentscientific.com
LabChart7	ADInstruments		data  analysis software