JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

A reference measurement procedure for the absolute quantification of Aβ1-42 in human CSF based on solid-phase extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry is described.

Аннотация

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disease among the elderly and accounts for 60-80% of all cases of dementia. Currently, the diagnosis of AD is based on cognitive tests and mental state exams, but the peptide amyloid-beta (Aβ) in cerebrospinal fluid (CSF) is increasingly used in clinical trials and settings. As for most protein and peptide biomarkers, quantification is performed using antibody-based techniques, such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). However, intra- and inter-laboratory variability in these assays hamper its use as a diagnostic marker in clinical routine.

An antibody-independent Reference Measurement Procedure (RMP) was developed based on solid-phase extraction (SPE) and liquid chromatography (LC)-tandem mass spectrometry (MS/MS), where stable, isotope-labeled Aβ peptides were used as internal standards, enabling absolute quantification. A high-resolution quadrupole-orbitrap hybrid instrument was used for the measurements. The method allows for the quantification of CSF Aβ1-42 between 150-4,000 pg/mL.

Введение

Болезнь Альцгеймера (AD) является наиболее распространенной формой слабоумия и затрагивает около 35 миллионов человек во всем мире 1. Нейропатологических признаки болезни широко , как полагают, лежат в основе патогенеза АД являются внутриклеточными нейрофибриллярных клубки тау - белка гиперфосфорилированного 2 и внеклеточные бляшки , состоящие из агрегированного бета-амилоида (A & beta ; ) пептидов 3. В соответствии с этим, оценка патологии бляшек в естественных условиях с помощью биомаркеров недавно были включены в диагностические критерии для исследований 4 AD. Для измерений ЦСЖ A & beta ; 1-42, несколько иммунологические доступны и используются во многих клинических лабораториях 5. Концентрация Ар 1-42 в ЦСЖ у пациентов с БА примерно на 50% ниже , чем в когнитивно нормального пожилого возраста, отражающие осаждение пептида в бляшках в брайн 6, 7.

Эти биомаркеры в основном анализируются с помощью иммунологических методов (например, на основе антител методик), однако эти анализы могут быть под влиянием эффектов матрицы 8. Использование иммуноанализа на различных технологических платформах и отсутствие анализа стандартизации 9, 10 делает введение глобальных концентраций отрезными сложных 11, 12. Аналитически подтверждено РМП позволило бы равномерную калибровку различных аналитических платформ, в идеале приводит к лучшей сопоставимости данных различных аналитических платформ и лучшего контроля факторов, способствующих общей изменчивости измерений.

Абсолютное количественное определение A & beta ; 1-42 с использованием разработанного метода LC-MS / MS преодолевает многие из проблем , связанных с технич основе антителiques. Метод, перечисленные в качестве RMP Объединенного комитета по прослеживаемости в лабораторной медицине (JCTLM база данных идентификационный номер C11RMP9) путем будет использоваться для определения абсолютной концентрации A & beta ; 1-42 в качестве сертифицированного эталонного материала (CRM) для согласования CSF A & beta 1 -42 измерения всей техники и аналитических платформ. Описанный рабочий процесс должен иметь значение для развития кандидатов эталонных методов для пептидов и белков в составе других областях медицины.

протокол

Примечание: Этот протокол требует аликвоты по крайней мере, 50 мкл с концентрацией 50 мкг / мл для каждого пептида, Ар в качестве исходного материала. Пептиды A & beta; должен быть растворен в 20% ацетонитриле (ACN) и 4% -го раствора концентрированный аммиак в деионизированной воде (об / об) и хранили при температуре 80 ° С.

Внимание: Таблицу 1 для информации о безопасности полетов.

1. Приготовление растворов

  1. Приготовьте 100 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного раствора аммиака в деионизированной воде (об / об) разбавлением 20 мл ACN и 4 мл концентрированного аммиака (~ 25%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 100 мл деионизированной водой. Сделайте свежий ежедневно.
  2. Приготовьте 50 мл 5 М гуанидин-гидрохлорида растворением 26,08 г гуанидина гидрохлорида в деионизированной воде до конечного объема 50 мл. Хранить при температуре 20 ° C и сделать свежий ежемесячно.
  3. Приготовьте 200 мл 4% -ной фосфорной кислоты в деионизированной воде (об /v) путем разбавления 9,4 мл концентрированной фосфорной кислоты (~ 85%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 200 мл с помощью деионизированной воды. Хранить в холодильнике и сделать свежий еженедельно.
  4. Приготовьте 50 мл 75% ACN и 10% -ного раствора концентрированного аммиака (об / об) в деионизированной воде, разбавляя 37.5 мл ACN и 5 мл концентрированного аммиака (~ 25%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 50 мл деионизированной водой. Сделайте свежий ежедневно.
  5. Оттепель по меньшей мере, 2,5 мл человеческого CSF для калибраторов, полученных из обезличенной оставшихся образцов из обычного клинического анализа.
  6. Подготовка искусственного CSF, содержащий 150 мМ Na, 3,0 мМ K, 1,4 мМ Са, 0,8 мМ Mg, 1,0 мМ P, и 155 мМ Cl в деионизированной воде и добавляют бычий сывороточный альбумин до конечной концентрации 4 мг / мл. Только 1 мл необходимо на анализ, но подготовить большой объем, Аликвоту его, и хранить для будущего использования.

2. Получение калибраторов

  1. Приготовьте 0,5 мл 4 мкг / мл 15 NAβ 1-42 пептида путем добавления 40 мкл 50 мкг / мл 15 NAβ 142 до 0,46 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 0,5 мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Подготовка 2 мл 100 нг / мл 15 NAβ 1-42 пептида путем добавления 50 мкл 4 мкг / мл 15 NAβ 142 до 1,95 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 2-мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  3. Приготовьте шесть решений калибратора (AF) путем смешивания объемы каждого раствора , указанного в таблице 2. Используйте 0,5, 1,5, и 2 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  4. Подготовка заключительного калибратора (в дубликатах) в 0,5 мл микропробирок путем добавления соответствующих калибровочных растворов и человеческого CSF в соответствии с таблицей 3. Перемешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

3. Подготовка внутреннего стандарта

  1. Приготовьте 2 мл 0,8 мкг / мл 13 CAβ 1-42 пептида путем добавления 32 мкл 50 мкг / мл 13 CAβ 142 до 1.968 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 2-мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Подготовка 5 мл 16 нг / мл 13 CAβ 1-42 пептида добавлением 0,1 мл 0,8 мкг / мл до 4,9 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в 5 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

4. Подготовка образца Коэффициент чувствительности

Примечание: Коэффициент чувствительности (RF) , определение выполняется для определения концентрации меченого пептида , используемого для калибровки (15 NAβ 1-42). Для этого необходимо, чтобы концентрация нативной A & beta ; 1-42 пептида определена методом аминокислотного анализа (AAA). Таким образом, объем и концентрация нативных пептидных аликвот A & beta ; 1-42должны отвечать требованиям ААА.

  1. Приготовьте 0,5 мл 4 мкг / мл (родной Немеченому) A & beta ; 1-42 путем добавления 40 мкл 50 мкг / мл родной Ар 1-42 до 0,46 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 0,5 мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Приготовить 2-мл 40 нг / мл смеси нативного и 15 NAβ 1-42 добавлением 20 мкл 4 мкг / мл нативный A & beta 1-42 и 20 мкл 4 мкг / мл 15 NAβ 1-42 до 1,96 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в 2 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  3. Добавьте 20 мкл 40 нг / мл смеси до 0,38 мл искусственной спинномозговой жидкости в 0,5 мл микроцентрифужных трубки. Готовят дубликаты и перемешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

5. Подготовка проб

Примечание: Оттепель образцы должны быть измерены при комнатной температуре на валике.

  1. Добавить 0,18 мл каждого калибратора, коэффициент отклика и неизвестного образца ( в том числе контроль качества [QC] образцов, если используется) к 1 мл белка 96-артезианской пластины, в соответствии с рисунком 1 (предполагая полную тарелку используется). Убедитесь в том, чтобы добавить образцы, или близко к нижней части лунки.
  2. Добавьте 20 мкл внутреннего стандарта в каждую лунку (т.е. калибраторов, факторы отклика, Бок и неизвестных); крайне важно, чтобы освободить капли на сторону скважины близко к поверхности образца, не погружая наконечник пипетки.
  3. Добавить 0,2 мл 5 М гуанидин-гидрохлорида в каждую лунку.
  4. Поместите образец пластину на микропланшет-шейкере и смешайте образцов в течение 45 мин при 1100 оборотах в минуту. Оптимальная частота может отличаться в зависимости от измерительных приборов. Установите частоту и амплитуду миксера так, что растворы тщательно перемешивают и не выбрасывались внутреннего стандарта или CSF не оставляют несмешанные на стороне лунок.
  5. Добавить 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислотыв каждую лунку. Vortex кратко перемешать.

6. Твердофазная экстракция

ПРИМЕЧАНИЕ: Во всех стиральных, загрузка и стадий элюции, применять минимально возможную вакуум после добавления раствора и постепенно увеличивать по мере необходимости загружать или элюирования решение. Отключение вакуума между каждой загрузки и стадии элюирования.

  1. Поставьте резервуар лоток для отходов под смешанном режиме, катионообменной, 96-луночного твердофазной экстракции (SPE) пластины в коллекторе камеры экстракции пластины.
  2. Используйте кондиционер SPE сорбент, добавляя 0,2 мл метанола в каждую лунку.
  3. Равновесие сорбент, добавляя 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислоты в каждую лунку.
  4. Перенесите все образцы (около 0,62 мл в каждую лунку) из артезианской пластины к пластине SPE. Используйте пипетку восьмиканальный при передаче образцов из артезианской пластины к пластине SPE; это не имеет решающего значения для передать весь или равные объемы всех образцов, так как образцы содержат стажерааль стандарт, который будет компенсировать изменения.
  5. Промыть сорбент после того, как образцы прошли через добавлением 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислоты в каждую лунку.
  6. После промывки растворитель элюируют из сорбента, замените резервуар поднос с тарелкой для сбора или трубок.
  7. Элюции образца из сорбента дважды добавлением 50 мкл 75% ACN / 10% концентрированного раствора аммиака и отмечают, что это решение требует очень низкого вакуума, чтобы пройти через сорбент. Не забудьте отключить вакуум между каждым добавлением.
    1. ДОПОЛНИТЕЛЬНО: Уплотнение для сбора пластины или трубки и заморозить их при температуре -80 ° C. Снимите уплотнение из пластины сбора или трубок, прежде чем перейти к этапу 6.8.2.
    2. Сушат элюатов путем использования вакуумного центрифугирования (без подвода тепла); это может занять от одного до нескольких часов, в зависимости от вакуумной центрифуге.
    3. Уплотнение контейнеров и заморозить их при температуре -80 ° С.

7. Жидкость хроматография

  1. Подготовка подвижной фазы А (5% ACN , 0,3% концентрированного аммиака в деионизированной воде [об / об]), В (4% деионизированной воды и 0,1% концентрированного аммиака в ACN [об / об]), и игла стирки (50% ACN и 4% концентрированного аммиака в деионизированной воде [об / об]).
    1. Для получения 500 мл подвижной фазы А, добавляют 25 мл ACN и 1,5 мл концентрированного аммиака в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 500 мл деионизированной водой.
    2. Для получения 500 мл подвижной фазы B, добавьте 500 мкл концентрированного аммиака и 25 мл деионизированной воды к АКН. Отрегулируйте конечный объем до 500 мл с ACN.
    3. Приготовьте 250 мл иглы стирке, добавляя 120 мл ACN и 10 мл концентрированного аммиака в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 250 мл деионизированной водой.
    4. Помещенный подвижные фазы А и В и иглы Промывалки открытый в озвучивания бане в течение 20 мин перед использованием с системой LC
  2. Растворить каждую пробу с 25 мкл 20% ACN и 4% ConcentraTed раствор аммиака и поместить их на шейкере в течение 20 мин. Центрифуга вниз образцов и поместите их в автосамплера (держать на 7 ° C).
  3. Вводят 20 мкл образца на 1 х 250 мм 2 полистирол-дивинилбензола ( с обращенной фазой) монолитную колонну , поддерживаемую при температуре 50 ° C.
    1. С помощью градиента LC показано в таблице 4 со скоростью потока 0,3 мл / мин. Перенаправление первые два и последние пять минут, чтобы тратить (пост-столбец) с использованием отбракованных клапан, чтобы уменьшить загрязнение масс-спектрометра.

Анализ 8. Масс-спектрометрический

Примечание: Эти параметры использовались для квадрупольной-Orbitrap гибридном масс-спектрометр, снабженный aheated источником ионизации электрораспылением.

  1. Установите параметры для источника ионов в соответствии с таблицей 5.
  2. Установите инструмент MS , чтобы изолировать 4+ зарядовых состояния родного A & beta ; 1-42 (1,129.48 масс-к заряду [м / г]), 15 NAβ 1-42 (1,143.00 м / г), и 13 CAβ 1-42 (1,179.50 м / г) в масс - квадрупольного анализатора с шириной изоляции 2,5 м / г.
  3. Фрагментировать выделенных пептидов в клетке столкновения с энергией нормализуется столкновений (NCE) 17.0. Это может должны быть настроены для каждого инструмента, даже одного и того же типа (и особенно при использовании других типов инструментов, таких как тройной квадруполь МС).
  4. Регистрируют спектры фрагментов с разрешением 17500, с автоматической регулировкой усиления целевого 2 - х 10 5 зарядов и максимальное время впрыска 250 мс.

9. Обработка данных

  1. Используйте сумму ионов продукта (с массовым допуском ± 250 милли единиц массы [чных]) в таблице 6 для расчета хроматографических областей для каждого пептида. Обратите внимание, что типы ионов и числа приведены только для нативного A & beta; ионы 1-42 продукта, так как они одинаковы для обоих 15 NAβ 1-42 и 13 CAβ 1-42.
  2. Определить средний коэффициент чувствительности двух выборок коэффициент отклика путем деления площади под кривой (хроматографического пика) от 15 NAβ 1-42 с площадью под кривой нативного Ар 1-42.
  3. Отрегулируйте концентрацию 15 NAβ 1-42 используется для калибровки путем умножения на коэффициент отклика , рассчитанного на этапе 9.2.
  4. Построить калибровочную кривую, откладывая соотношения площади 15 NAβ 1-42 до 13 CAβ 1-42 из двух наборов калибраторов против концентрации.
  5. Вычислить наклон и перехват калибровочной кривой с использованием линейной регрессии.
  6. Вычислить отношение площадей нативного A & beta ; 1-42 к внутреннему стандарту (13 CAβ 1-42) для ипизвестные образцы.
  7. Экстраполировать концентрацию неизвестных образцов по калибровочной кривой с использованием наклона и перехватывать, полученного на стадии 9.5.

Результаты

Установка пластины на фиг.1 , используется для полной тарелкой образцов. Если необходимо проанализировать меньше неизвестных образцов, второй калибратор, наборы РФ и КК должен быть помещен после первой половины неизвестных образцов.

Обсуждение

Для описанного способа, вместо того чтобы использовать суррогатный матрицу, мы использовали суррогатного аналита подход 13, 14, 15, 16, что дает возможность калибровки в человеческом CSF. Суррогатного аналита подход включ...

Раскрытие информации

JP and EP reports no disclosures. HZ has served on the advisory boards of Roche Diagnostics, Eli Lilly, and Pharmasum Therapeutics. KB has served as a consultant or on the advisory boards for Fujirebio Europe, IBL International, and Roche Diagnostics. HZ and KB are co-founders of Brain Biomarker Solutions in Gothenburg AB, a GU Venture-based platform company at the University of Gothenburg.

Благодарности

This work was performed on behalf of the International Federation of Clinical Chemistry Working Group on CSF Proteins, which has the following composition: Kaj Blennow (Chair) and Henrik Zetterberg, Gothenburg University, Sweden; Les Shaw and Magdalena Korecka, University of Philadelphia, PA, USA; Ingrid Zegers, Institute for Reference Materials and Measurements, Geel, Belgium; Piotr Lewczuk, Universitätsklinikum Erlangen, Germany; and Rand Jenkins, PPD Bioanalytical Laboratory, Richmond, VA, USA; Randall Bateman, Washington University, MO, USA; and H Vanderstichele, Innogenetics NV, Ghent, Belgium. This work was also part of the Global Consortium for Biomarker Standardization CSF Reference Methods Working Group, which is led by Maria C. Carrillo, Ph.D., Senior Director, Medical & Scientific Relations, Alzheimer's Association. The study was supported by The Swedish Research Council (grants #14002, #521-2011-4709, and #2013-2546); the Knut and Alice Wallenberg Foundation; Demensförbundet; and Emil and Wera Cornell's, Aina Wallström and Mary-Ann Sjöblom's, Gun and Bertil Stohne's, Magnus Bergvall's, and Gamla Tjänarinnor's Foundations.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 0.5 mLEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 1.5 mLEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 2 mLEppendorf022431102
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 5 mLEppendorf0030 108.310
Eppendorf Protein LoBind Deepwell Plates 96Eppendorf951032905
Micronic 0.75 mL polypropylene tubes, V-bottomMicronicMPW32071BC3Tubes used for collecting SPE eluate, but other collection devices can be used such as 96-well plates.
Micronic Split TPE Capcluster for 96 ind. tubesMicronicMP53026Caps for Micronic tubes.
Micronic Loborack-96 white w high cover bar codedMicronicMPW51015BC3Holder for Micronic tubes.
Biohit Optifit tips 1.2 mLSartorius791210Used to reach all the way to the bottom of the LoBind deepwell plates (96-well). Other narrow tips might work as well.
Waters Oasis MCX 96-well µElution PlateWaters186001830BA 
Waters Plate manifold reservoir trayWatersWAT058942
Waters Extraction Plate Manifold for Oasis 96-Well PlatesWaters186001831
Ammonium hydroxide solution, puriss. p.a., reag. ISO, reag. Ph. Eur., ~25% NH3 basisSigma-Aldrich30501-1L-D
Acetonitrile, Far UV HPLC Gradient grade, 2.5 LFisher ScientificA/0627/17X
ortho-Phosphoric acid 85%, ACS,ISO,Reag. Ph EurMerck Millipore1005731000
Guanidine Hydrochloride, 500 gThermo Scientific24110
Thermo Scientific Q-exactive Hybrid Quadrupole Orbitrap Mass SpectrometerThermo ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZRWith bundled Dionex Ultimate 3000 LC & autosampler.
Dionex ProSwift RP-4H Monolith Column (1.0 x 250mm)Dionex066640
Bovine Serum Albumin, lyophilized powder, suitable for (for molecular biology), Non-acetylatedSigma-AldrichB6917
Beta-Amyloid (1-42), Ultra Pure, TFArPeptideA-1002-2
15N Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeledrPeptideA-1102-2
13C Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeledrPeptideA-1106-2
Microplate shakers, TiMix 2Edmund Bühler6110 000

Ссылки

  1. Querfurth, H. W., LaFerla, F. M. Alzheimer's disease. N Engl J Med. 362 (4), 329-344 (2010).
  2. Braak, H., Braak, E. Evolution of the neuropathology of Alzheimer's disease. Acta Neurol Scand Suppl. 165, 3-12 (1996).
  3. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  4. Dubois, B., et al. Advancing research diagnostic criteria for Alzheimer's disease: the IWG-2 criteria. Lancet Neurol. 13 (6), 614-629 (2014).
  5. Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat Rev Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).
  6. Buchhave, P., et al. Cerebrospinal fluid levels of beta-amyloid 1-42, but not of tau, are fully changed already 5 to 10 years before the onset of Alzheimer dementia. Arch Gen Psychiatry. 69 (1), 98-106 (2012).
  7. Olsson, B., et al. CSF and blood biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Neurology. 15 (7), 673-684 (2016).
  8. Bjerke, M., et al. Confounding factors influencing amyloid Beta concentration in cerebrospinal fluid. Int J Alzheimers Dis. , (2010).
  9. Dumurgier, J., et al. Intersite variability of CSF Alzheimer's disease biomarkers in clinical setting. Alzheimers Dement. 9 (4), 406-413 (2013).
  10. Mattsson, N., et al. CSF biomarker variability in the Alzheimer's Association quality control program. Alzheimers Dement. 9 (3), 251-261 (2013).
  11. Kang, J. H., Korecka, M., Toledo, J. B., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. Clinical Utility and Analytical Challenges in Measurement of Cerebrospinal Fluid Amyloid-beta1-42 and tau Proteins as Alzheimer Disease Biomarkers. Clin Chem. 59 (6), 903-916 (2013).
  12. Mattsson, N., et al. Reference measurement procedures for Alzheimer's disease cerebrospinal fluid biomarkers: definitions and approaches with focus on amyloid beta42. Biomark Med. 6 (4), 409-417 (2012).
  13. Ahmadkhaniha, R., Shafiee, A., Rastkari, N., Kobarfard, F. Accurate quantification of endogenous androgenic steroids in cattle's meat by gas chromatography mass spectrometry using a surrogate analyte approach. Anal Chim Acta. 631 (1), 80-86 (2009).
  14. Jemal, M., Schuster, A., Whigan, D. B. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry methods for quantitation of mevalonic acid in human plasma and urine: method validation, demonstration of using a surrogate analyte, and demonstration of unacceptable matrix effect in spite of use of a stable isotope analog internal standard. Rapid Commun Mass Spectrom. 17 (15), 1723-1734 (2003).
  15. Leinenbach, A., et al. Mass spectrometry-based candidate reference measurement procedure for quantification of amyloid-beta in cerebrospinal fluid. Clin Chem. 60 (7), 987-994 (2014).
  16. Li, W., Cohen, L. H. Quantitation of endogenous analytes in biofluid without a true blank matrix. Anal Chem. 75 (21), 5854-5859 (2003).
  17. Perret-Liaudet, A., et al. Cerebrospinal fluid collection tubes: a critical issue for Alzheimer disease diagnosis. Clin Chem. 58 (4), 787-789 (2012).
  18. Lewczuk, P., et al. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52 (2), 332-334 (2006).
  19. Pannee, J., et al. Reference measurement procedure for CSF amyloid beta (Aβ)1-42 and the CSF Aβ1-42 /Aβ1-40 ratio - a cross-validation study against amyloid PET. J Neurochem. 139 (4), 651-658 (2016).
  20. Thienpont, L. M., Van Houcke, S. K. Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes. Clin Chim Acta. 411 (23-24), 2058-2061 (2010).
  21. Vesper, H. W., Thienpont, L. M. Traceability in laboratory medicine. Clin Chem. 55 (6), 1067-1075 (2009).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

121

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены