Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Мы описываем хирургическую процедуру в анестезированной модели крысы для определения мышечного тонуса и вязкоупругих свойств языка. Процедура включает в себя специфическую стимуляцию гипоглоссальных нервов и применение пассивных кривых силы / деформации Лиссажу к мышце.
Язык - это сильно иннервированный и васкуляризированный гидростат мышц на полу устья большинства позвоночных. Его основные функции включают поддержку жевания и деградации, а также вкусовые ощущения и фонетику. Соответственно, сила и объем языка могут влиять на способность позвоночных выполнять основные виды деятельности, такие как питание, общение и дыхание. Человеческие пациенты с апноэ во сне имеют расширенные языки, характеризующиеся уменьшением мышечного тонуса и увеличенным внутримышечным жиром, который можно визуализировать и количественно определять с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ). Способность измерять генерацию силы и вязкоупругие свойства языка являются важными инструментами для получения функциональной информации для корреляции с данными визуализации. Здесь мы представляем методы измерения образования силы языка у анестезированных крыс Цукера посредством электрической стимуляции гипоглобулярных нервов и для определения вязкоупругих свойств oF язык, применяя пассивные кривые силы / деформации Лиссажу.
Язык обеспечивает необходимую поддержку для жевания, дегуляции, вкуса и речи. Присутствие внешней и внутренней мускулатуры с выраженной иннервацией и анатомией / функцией объясняет уникальность этого мускульного гидростата. Недавние достижения в технике визуализации позволили более детально рассмотреть сложную анатомию 1 . Снижение функциональности языка, атрофия языка, дисфагия и речевые затруднения также являются распространенными проявлениями миопатических состояний, таких как паркинсон 2 , амиотрофический болевой склероз (ALS) 3 , миотоническая дистрофия (MD) 4 и другие миопатии.
Изменения в составе мышц, связанные с распространенными болезненными состояниями, влияют на механические и вязкоупругие свойства языка. Например, функциональный анализ силы языка обнаружил изменения в сократительных свойствах, связанных со старениемSs = "xref"> 5 , 6 , гипоксия 7 , 8 и ожирение 9 , 10 . В случае мышечной дистрофии повышенный фиброз приводит к более высокой жесткости мышц, что приводит к снижению соответствия деформации при применении протокола деформации Лиссажу 11 . И наоборот, изменения в содержании мышечного жира, как и те, которые описаны у пациентов с ожирением, изменяют как метаболические 12, так и механические свойства скелетных мышц 13 , 14 и, как прогнозируется, увеличивают соответствие мышц деформации. Повышенный жир языка также коррелирует с развитием обструктивного апноэ сна (OSA) у людей 17 путем увеличения объема языка до точки частичной окклюзии верхних дыхательных путей (апноэ) 15 , 16 . СимА также у людей, инфильтрация жировой ткани была зарегистрирована у тучных крыс Цукера 10 , что свидетельствует о том, что эта модель является ценным инструментом для изучения влияния инфильтрации жира на физиологию языка.
Измерение силы языка требует деликатных хирургических методов, чтобы изолировать и билатерально стимулировать гипоглоссальные нервы 17 , 18 . Такие методы были ранее описаны у крыс 5 , 17 , 19 , 20 , кроликов 21 и людей 22 , 23 , но с ограниченными визуальными средствами для исследователя. Благодаря высокому техническому характеру доступность подробного протокола значительно улучшит доступность и воспроизводимость этого метода. Цель нашей экспериментальной парадигмы - плохоИспользовать достоверную и надежную методику измерения прочности и вязкоупругих свойств языка в модели крысы. Для этого крыса анестезируется, появляются гипоглоссальные нервы, а трахея канюлирована, чтобы обеспечить свободный доступ к языку животного. Затем шовный шлейф соединяет кончик язычка с преобразователем силы, способным контролировать как силу, так и длину, в то время как два биполярных крюковых электрода стимулируют гипоглоссальные нервы, чтобы вызвать сжатие языка. После того, как измерение силы завершено, возможности контроля длины усилителя силы используются для быстрого изменения длины язычка в соответствии с протоколом синусоидальной волны с фиксированной амплитудой (кривые Лиссажу), длительностью и частотой, что позволяет получить Его вязкоупругие свойства 11 , 24 . Протокол будет направлять исследователя через шаги вскрытия, позиционирование животного на экспериментальной платоRm, размещение электродов и, наконец, получение и анализ данных о силе и вязкоупругости.
Все процедуры, в том числе животные, были одобрены Институтом по уходу и использованию животных (IACUC) Университета Пенсильвании (протокол № 805822). Описанная процедура является терминальной и не требует использования асептических условий или продуктов фармацевтического класса.
1. Хирургические процедуры
Рисунок 1: Хирургические процедуры.
(A) Демонтаж хирургического плана. Красная пунктирная линия указывает область разреза. Две черные линии указывают положение челюсти, а нижняя черная линия обозначает положение грудной клетки. Синяя линия указывает на подъязычную кость. (B) Воздействие заднего живота дистальной мышцы (стрелки) после тупого рассечения жировой ткани, подъязычной и подмаксильной Арильные железы. (C) Резекция заднего живота дистальной мышцы (пунктирная зеленая линия), чтобы обнажить гипоглобулярный нерв (белая стрелка). (D) Гипоглоссальный нерв (белая стрелка) очищается от окружающей фасции. (E) Трахея открывается, осторожно вытягивая вокруг нее гладкую мышцу (зеленые стрелки указывают направление прилагаемой силы) и поднимается (F), чтобы подготовиться к интубации. Звезда указывает на вставку языка на подъязычную кость. Зеленая пунктирная линия обозначает точку разреза для интубации. Белая стрелка указывает на свободный узел, подготовленный для закрепления канюли на месте после ее введения. (G) Разрез трахеи для канюлирования. (H) Катетер трахеи вставлен и закреплен на месте квадратным узлом. (I) Применение шва к языку.Target = "_ blank"> Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
2. Экспериментальная установка
Рисунок 2: Позиционирование и защита животных.
(A) Мышь расположена на экспериментальной платформе. Челюсть закреплена, и рот поддерживается открытым при приложении вертикального натяжения (зеленая стрелка). Шовный шлейф соединен с преобразователем силы (белая стрелка). (B) Электроды подключены. (C) Каждый электрод, установленный на микроманипуляторе, стабильно соединен с нервом. Инкрустация показывает завершение tОн зацепляет электрод. (D) Оптимальная длина языка измеряется суппортом Вернье, от вставки на уровне подъязычной кости до кончика языка. На этом рисунке электроды были удалены для ясности. Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Примечание. Расположите животное на спине на нагретом лотке устройства, используя следующие меры безопасности, чтобы избежать движения во время эксперимента.
3. Оптимальная длина (L 0 ) и максимальное изометрическое определение силы
4. Определение вязкоупругих свойств (кривые Лиссажу)
Рисунок 3: Представительские результаты.
(A) Примеры успешных следов твинта и тетанической силы. Соответствующая стимуляция представлена красным следом. (B) Пример неудачных тетанич?...
Предполагается, что изменения в метаболизме и / или составе языка, например, инфильтрация жировой ткани вследствие ожирения, приводят к количественным изменениям параметров, которые оцениваются по нашему протоколу. Количественная оценка силы языка представляет большой интерес, ?...
Авторам нечего раскрывать.
Это исследование было поддержано двумя национальными институтами медицинских грантов: HL089447 («Ожирение и OSA: понимание важности жирной и метаболической функции») и HL094307 («Понимание взаимосвязи между ожирением и жирным жиром»)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
SurgiSuite (heated Surgical tray) | Kent Scientific | SurgiSuite-LG | Includes heated platform |
LED Lighting and Magnification Kit | Kent Scientific | SURGI- 5003 | |
RC2 Rodent Circuit Controller | VetEquip | 922100 | |
Isoflurane | Butler Schein Animal Health Supply | 29405 | |
Alcohol Prep | Webcol | 6818 | |
Cotton-tipped applicators | MediChoice | WOD1002 | |
Hair clipper | Conair | ||
Hair remover lotion | Nair | ||
Medical tape | Transpore | 3M | |
D-PBS | Corning | 21-030-CM | |
Operating Scissors | World Precision Instruments | 503717-12 | |
Hemostatic Forceps | Merit | 97-458 | Any tissue forceps can be used instead |
Microdissecting Forceps, Angled, Serrated, 10.2 cm, SS | World Precision Instruments | 504479 | |
Suture Tying Forceps | Fine Science Tools | 18025-10 | |
Blunt Micro Hook | Fine Science Tools | 10062-12 | |
Microhemostat | Fine Science Tools | 12075-14 | |
Thermal cautery | WPI | 501292 | Disposable cauteries are available at lower cost |
IV 14g x 3.25" cannula | BD | B-D382268H | For tracheal cannulation |
Braided silk non-absorbable suture size 4-0 | Harvard Apparatus | SP104 | For stabilization of the tracheal cannula |
Braided non-absorbable silk 5/0 suture | Surgik LC, USA | ESILRC15387550 | For suturing the tongue |
Plastic-coated metal twist-tie (or electrical wire) | For securing the rat's nose to the platform | ||
Camera stick | |||
3 way-swivel and Trilene 9 Kg test monofilament line | Berkley | For securing the jaw and maintaining the mouth open | |
Camera stick with adjustable angle | For supporting the 3 way-swivel and maintaining the mouth open. | ||
in situ Muscle Test System | Aurora Scientific | 809C | This system is designed for mice and was modified by extending the platform. Alternatively the rat-specific 806D system can be used. |
Dual-Mode Muscle lever (force transducer) | Aurora Scientific | 305C-LR | 309C offers higher excursion capabilities than 305C-LR. Link for more information and specifications: http://aurorascientific.com/products/muscle-physiology/dual-mode-muscle-levers/ |
Needle Electrodes (surgical steel, 29 gauge) | AD Instruments | MLA1204 | 300C is recommended for use in mice. |
Magnetic Stands | World Precision Instruments | M10 | Used for making the bipolar stimulating hook electrodes |
Kite Manual Micromanipulator | World Precision Instruments | KITE-R and KITE-L | Require a steel plate |
Stackable Double Binding Post with Banana Jack x BNC Jack | McMaster Carr | 6704K13 | |
Carbon fiber composites digital caliper | VWR | 36934-152 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены