Модель Остеогенез отвлечение мыши

Резюме

Мы представляем модель Остеогенез большеберцовых отвлечение мыши, разработанные с помощью заказной дистрактора. Использование мыши в качестве целевого объекта анализа является выгодным для продвижения научных исследований.

Аннотация

Отвлечение Остеогенез (ДУ) является хирургическая процедура, которая предполагает регенерации костной ткани без трансплантации клеток. СДЕЛАТЬ модель состоит из следующих трех этапов: этапа задержка после остеотомии и размещение внешних дистрактор; отвлечение фаза, которой заканчивается разлученных кости постепенно и непрерывно отвлекается; и на этапе консолидации. Этот заказ дистрактора для ду состоит из двух колец неполной акриловой смолы и расширение винт. Этот процесс был инициирован плесени силиконовые впечатление материалом и затем создание заказных дистрактора. Стоматологической смолы сливали в опалубке из силиконового материала впечатление, и было разрешено полимеризоваться для создания неполной смолы кольца, необходимых для заказных дистрактора. Эти кольца были исправлены с винтом расширения, с помощью прозрачной смолой. По индивидуальному заказу дистрактор, созданные с помощью такой подход был прикреплен к голени мышей. Голени было зафиксировано к аппарату, используя одну пару 25 G иглы проксимально, одна пара 27 G иглы дистально и акриловой смолы. После периода задержка 5 дней отвлечение было начато со скоростью 0,2 мм/12 ч. Удлинение было продолжено на 8 дней, что приводит к общей разрыв 3,2 мм. Мышей были принесены в жертву через 4 недели после безумия. Формирования костей в дистракционного разрыв был подтвержден с помощью радиографии и гистологии.

Введение

Отвлечение Остеогенез (ДУ) является методом установленного лечения для целого ряда скелетных расстройств, таких как несоответствия длины конечностей, костных дефектов и деформаций конечностей¹. Эта уникальная процедура стратегия основана на «принцип напряженности стресс», предложенный Илизарова. Этот метод требует несколько дней задержка, несколько недель для активного отвлечение и несколько месяцев для консолидации до зрелых кости сформированные².

Местные гипоксические условия из-за блокирования крови поток^3,4 и^5,механической стимуляции⁶ особенно важное значение в процессе заживления ДУ. Гипоксия индуцированной ангиогенеза носит кислорода, питательных веществ, растворимых факторов и клеток, необходимых для восстановления тканей локально через поток крови. Механическая стимуляция расширение операции вызывает биологические реакции, такие как дифференциация мезенхимальных стволовых клеток, формирования костей, кальцификации и реконструкции. Серийный делать лечение позволяет формирования не только твердых тканей, но и мягких тканей, в том числе нервов, мышц, кровеносных сосудов и тканей кожи, без необходимости в трансплантации стволовых клеток. Таким образом сделать модель считается прекрасной моделью для анализа регенерацию различных тканей.

Кролики и собаки являются наиболее широко используемых животных в фундаментальных исследований для ду; Однако существует несколько инструментов анализа, доступные для этих животных. Использование мыши сделать модель способствует более подробный анализ. Это особенно хорошо подходит для экспериментов с использованием маскирования мышей. Однако при использовании мыши как экспериментальное животное, устройство расширения должны создаваться. Здесь мы представляем модели мыши большеберцовых разработан с использованием заказных дистрактор, созданных с помощью инструмента зуботехнической лаборатории и техники, которая использовалась в предыдущем исследовании.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Все эксперименты проводились в соответствии с протоколами, утвержденных животных уход и использование Комитета нашего учреждения. Простерилизуйте все инструменты перед процедурой.

1. Подготовка пресс-формы для создания заказных дистрактор

1. Сделайте два неполных кольца (наружный диаметр, 20 мм, внутренний диаметр 10 мм), которые являются частью дистрактор, с одного листа парафина (145 мм x 74 мм) с помощью воска Карвер Эванс.
   1. Сделайте 4 те же произведения. Лопаточкой Воск нагревают с газовой горелкой. Стек четыре кольца толщиной 5 мм из. предоставляют пространство для расширения винт и иглы, 8 мм х 2 мм и 5 мм х 2 мм соответственно с воском Карвер Эванс (цифры 1A, 1B).
2. Внедрить восковых моделей в впечатление материал силикона и создания плесени для смолы кольца (рис. 1C).
3. После отверждения силикона впечатление материал (примерно 5 минут при комнатной температуре), удалите восковых моделей.

2. Производство заказных дистрактор

1. Применить вазелином тонко и равномерно в силиконовые формы. Смешать 3 g полимеризации стоматологической смолы и сразу налить его в силиконовые формы. Набор для 5 мин при комнатной температуре (RT).
2. Удаление полимеризованная смола кольца от плесени и отполировать с твердосплавными бар и стоматологических микромотор для удаления заусенцев (около 1 мин). Для каждый заказ дистрактор требуются два кольца смолы.
   1. Повторите эту процедуру для создания требуемое количество смолы кольца (рис. 1D).
3. Оставьте зазор около 2 мм, чтобы исправить смолы кольца с утилита воском и обеспечения внешней экспансии винт полностью прозрачной смолой. Установите смолы для 5 мин на RT. После завершения полимеризации удалите расширение винт регулятора (рис. 1E).

3. хирургический протокол

1. Используйте 8 мужчин week-old мышей.
2. Побудить анестезии с внутрибрюшинной инъекции medetomidine гидрохлорида 0,3 мг/г, мидазолама по 4 мг/кг, а Буторфанол тартрата 5 мг/кг массы тела.
   1. С осторожностью бриться и дезинфекция хирургические области с раствор 10% йода и затем управлять лидокаина гидрохлорида 0,5% на правой нижней конечности.
3. Сделайте продольные Кожный разрез (примерно 15 мм в длину) в правой голени с помощью скальпеля № 15. Тупо отдельные основные мышцы, стараясь не удалить все надкостницы. Подход от снаружи легко добраться до малоберцовой кости. Вырежьте малоберцовой кости с ножницами.
4. Захватите щиколотки с узкие тонкие стерильные щипцами и использовать стерильные иглы 27 G, чтобы сделать отверстие в кости около 5 мм от пятки. Игла должна проникнуть, кожи, костей и кожи в этом порядке. Когда игла проникает, вырежьте кончик и корень с щипцы так, чтобы игла находится около 15 мм.
   1. Сделайте еще один отверстие таким же образом, около 2-3 мм проксимальный. Держите вокруг лодыжки и пройти две иглы 25 G под колено таким же образом. После того, как иглы прорезывают, вырежьте советы и корни с щипцы (рис. 1F).
5. Место на заказ дистрактор, таким образом, что это параллельно направлению расширение. Исправить иглы и устройства с стоматологической смолы достаточно полимеризации для заполнения пазов устройства. Ждать для полимеризации для завершения (примерно 5 минут) (рис. 1G).
6. Будьте осторожны, чтобы не повредить окружающие ткани. Вырежьте в середине диафиза большеберцовой кости с помощью очень тонкой отрезного диска при применении физиологический раствор (1 – 2 мл).
7. Закройте рану с швом нейлона 4-0.
8. Дать подкожной инъекции бупренорфин (0,1 мг/кг) для обезболивания сразу же после операции. Продолжать бупренорфин каждые 12 ч, через сутки 7 и необходимости в дальнейшем.

4. отвлечение протокол

Примечание: Есть различные сообщения на уровень задержки период и отвлечение внимания, но здесь, представитель протоколы отображаются.

1. После периода задержка 5 дней запустите отвлечение со скоростью 0,2 мм/12 ч. Для расширения используйте ПИН, придает винт быстрого расширения. Переместите закрепление в направлении желтая стрелка, придает расширение винт (рис. 1E).
2. Анестезия не является необходимым во время расширения. Держите хвост с мизинец и пальмы и исправить расширения устройство с указательный палец и большой палец.
3. Выполните расширение (0,2 мм для 1/4 оборота). Далее, удлинение на 8 дней, что приведет к полной разрыв 3,2 мм.

5. анализ

1. Рентгенография анализ: после завершения расширения, оценки костной регенерации с томографии под общим наркозом с помощью изофлюрановая 2,0%.
   Примечание: Если внимание было принято в отношении положения устройства расширения, это возможность оценить его с простой рентгенография даже с устройством прилагается.
2. Гистологический анализ: Осторожно снимите аппарат чтобы не вызвать перелом дистракционного сайта во время выборки. Исправьте образца в нейтральных буферизации формалина 10% за 24 ч при комнатной температуре. Известь с решением Морзе (цитрат натрия 10%, 20% муравьиной кислоты) на ночь при 4 ° C.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Цифры 1A и 1B представляют неполные кольца (наружный диаметр, мм 20 внутренний диаметр, мм 10; толщина 5 мм) с парафина. Две модели воска были внедрены в материал силикона впечатление, и была создана форма для смолы кольца (рис. 1C). По...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Когда большое животное используется как экспериментальная модель, готовые расширение устройство может быть использовано, и это легко для получения хорошей фиксации и оценить сама операция расширения и расширения объема. Однако когда мышь используется в качестве экспериментальной мо...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paraffin wax	YAMAHACHI DENTAL MFG. CO.	-	For preparation a mold for resin rings
Labocone putty	GC Corporation	-	For preparation a mold for resin rings
Utility wax	GC Corporation	-	For preparation a mold for resin rings
Expansion screw	Ortho Dentaurum	600-301-30	Component of custom-made distractor
Unifast III	GC Corporation	-	Immediate polymerization resin Component of custom-made distractor
Ortho Crystal	NISSIN	-	Transparent resin Component of custom-made distractor
25 G needle	TERUMO	NN-2516R	For custom-made distractor
27 G needle	TERUMO	NN-2719S	For custom-made distractor
ICR mouse	Chubu Kagaku Shizai Corporation	-	Experimental animal
Somnopentyl	Kyoritsu Seiyaku	-	Pentobarbital sodium salt
Isoflurane	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation	099-06571	Isoflurane inhalation solution