JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь мы описываем 3 взрослых рыбок данио травмы модели и их совместное использование с лечение иммуносупрессивным препаратом. Мы предоставляем руководство по визуализации регенерации тканей и на нем обнаружения минерализации костей.

Аннотация

Данио рерио способны регенерировать различных органов, включая придатков (плавники) после ампутации. Это включает в себя регенерации кости, которая отрастает в течение примерно двух недель после травмы. Кроме того возможность исцелить костей быстро после трепанации черепа и ремонта трещин, которые могут быть легко введены в костлявые плавник лучи данио рерио данио рерио. Эти анализы травмы представляют собой возможные экспериментальные парадигмы для проверки влияния управляемых наркотиков на быстро формирования кости. Здесь мы описываем, использование этих моделей 3 травмы и их совместное использование с лечения системных глюкокортикоидов, который оказывает тормозящее и иммуносупрессивные эффекты кости. Мы предоставляем рабочего процесса о том, как подготовиться к иммуносупрессивным лечения взрослых рыбок данио, показывают, как выполнять плавник ампутации, трепанация черепа костей и переломы плавник и описывают, как применение глюкокортикоидов влияет на обе кости формирования остеобласты и клетки линии моноцитов/макрофагов частью врожденного иммунитета в костной ткани.

Введение

Данио рерио представляют собой мощный животных модель для изучения развития позвоночных и болезни. Это связано с тем, что они являются мелких животных, которые размножаются очень хорошо и что их геном полностью виртуализированного и поддаются манипуляции1. Другие преимущества включают возможность выполнения продолжение живых изображений на разных этапах, в том числе в vivo изображений взрослых рыбок данио2, и способности выполнять высокую пропускную способность препарата экраны в zebrafish личинки3. Кроме того данио рерио обладают высокой регенеративной способностью в различных органах и тканях, включая кости и таким образом служат полезной системы для изучения костных болезней и ремонт4,5.

Глюкокортикоидный индуцированного остеопороза (ГИО) является заболевание, которое приводит к от долгосрочного обращения с глюкокортикоидов, например в ходе лечения аутоиммунных заболеваний таких как астма или ревматоидного артрита. GIO в около 30% глюкокортикоидных лечение больных развивается и представляет основных медицинских выпуск6; Таким образом важно исследовать влияние иммуносупрессии на костной ткани в деталях. В последние годы были разработаны различные модели данио рерио, занимающихся патогенеза GIO. Глюкокортикоидный опосредованной костной потери побудило в данио рерио личинки, к примеру, которые привели к выявлению противодействующего соединений увеличения костной массы в наркотиков экран7. Кроме того, тормозящее действие глюкокортикоидов индуцированной кости были передразнил в zebrafish весы как in vitro и in vivo8,9. Эти анализы очень убедительны подходы, особенно когда дело доходит до выявления роман иммуносупрессивных и кости анаболических препаратов. Однако они лишь частично учитывать эндоскелет и не были выполнены в регенеративных контексте. Таким образом они не позволяют расследования глюкокортикоидных опосредованной эффекты во время быстрого режимов формирования взрослых, регенерации костей.

Здесь мы представляем протокол позволяет исследователям изучать глюкокортикоидных опосредованного воздействия на кости взрослых рыбок данио, прохождения регенерации. Травмы модели включают частичная ампутация данио рерио хвостового плавника, трепанация черепа, а также создание плавник Рэй переломов (рис. 1а-1 C) и в сочетании с глюкокортикоидных воздействия через инкубации (Рисунок 1E ). Недавно мы использовали часть настоящего протокола для описания последствий воздействия преднизолона, один из обычно предписываются кортикостероидных препаратов, на взрослых рыбок данио, регенерации костей черепа и плавник10. В данио рерио преднизолон администрация приводит к снижению остеобластов распространения, неполной остеобластов дифференциация и быстрой индукции апоптоза в моноцитов/макрофагов линии10. В этом протоколе мы также описывают как переломы могут быть введены в единый костлявые плавник Рэй сегментов11, как этот подход может оказаться полезным при изучении глюкокортикоидных опосредованного воздействия на кости происходя во время ремонта трещин. Представленные здесь методы поможет дальнейшего решения лежащих в основе механизмов действия глюкокортикоидов в быстро регенерации костной ткани и может также использоваться в других настройках системного лекарствами в контексте данио рерио регенерации тканей.

протокол

Все методы, описанные здесь были утверждены Landesdirektion Дрезден (разрешить чисел: AZ 24D-9168.11-1/2008-1, AZ 24-9168.11-1/2011-52, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24-9168.11-1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).

1. Подготовка материалов и решений

Примечание: Преднизолон, как другие глюкокортикоидов, приводит к иммуносупрессии. Таким образом необходимо принимать меры предосторожности для предотвращения инфекции у животных, обработанных в ходе эксперимента. Этот конец, автоклав стеклянные изделия и «рыбные воды» (т.е., вода, которая используется для заднего взрослых данио рерио) перед началом эксперимента.

  1. Рассчитайте количество данио рерио для использования в эксперименте. Убедитесь в том включать лиц, которые служат в качестве элементов управления.
  2. Автоклав 600 мл стекла мензурки, которые покрыты алюминиевой фольги с лентой автоклава. Данио рерио, будут рассматриваться в отдельности, таким образом для каждого данио рерио необходим 1 стеклянный стакан.
  3. Рассчитайте количество рыбы воды, необходимой для проведения эксперимента. 300 мл требуются на человека в день. Принимать во внимание продолжительность эксперимента (например, 1 неделя/7 дней).
  4. Заполните стеклянные бутылки с водой рыбы, закрыть их и автоклав бутылок скотчем автоклава. В идеале, использование 2 Л бутылки, но также могут использоваться другие бутылки 1 Л и 5 Л.
    Примечание: Если эксперименты длинные (например, 4 недели/28 дней) и количество стеклянных бутылок ограничено, убедитесь, что для подготовки бутылки как минимум несколько дней в то время и повторить процесс (1.3-1.4) на протяжении всего эксперимента.
  5. Подготовьте преднизолон раствор стерильной фильтрации 100 мм преднизолона в диметилсульфоксид (ДМСО). Замораживание фонда в 1 мл или 2 мл аликвоты пробки microcentrifuge.
    Предупреждение: Всегда Одежда защитная одежда когда совместно с преднизолоном (защитные перчатки, защитные очки, лаборатории пальто).
  6. В первый день эксперимента готовить растворы инкубации с преднизолоном и ДМСО, соответственно. С этой целью разморозить необходимое количество 100 мм преднизолон раствор и добавить преднизолон газобетона рыбы воду в конечной концентрации 50 мкм.
    1. Для контроля лечения добавьте соответствующий объем ДМСО газобетона рыбы воды. В качестве примера производить 2 Л преднизолона содержащих рыбы воду, добавьте 1 mL акций преднизолон 100 мм в 2 Л воды рыбы. В другой бутылка 2 Л воды рыбы добавьте 1 мл ДМСО, соответственно.
    2. Работа в соответствующее место, предназначенный для выполнения медикаментозного лечения, в идеале в комнате в 27 ° C.

2. поколение травм в Zebrafish плавники

Примечание: Нанести кости плавники данио рерио, выполняют резекцию плавника (ампутация, обычно в хвостовой плавник) или перелом отдельных костных плавник лучи (перелом модель). С этой целью сначала обезболивают взрослых рыбок данио.

  1. Ампутация
    1. Подготовить обезболивают взрослых рыбок данио, диаметром 100 мм Петри, содержащий 0,02% MS-222 (этил-3-аминобензоат Метансульфонат) в воде рыбы (эта вода не нужно быть автоклавного твердения).
      1. В то время передать один данио рерио содержащие Петри MS-222 с помощью чистой рыбы и проинкубируйте его до тех пор, пока он лежит на его стороне без движения и не реагировать на прикосновения. Проверьте последний прикоснувшись анальный плавник с тупым щипцами.
      2. Подождите, пока не будет достигнут уровень 4 анестезии, которая является соответствующий уровень для плавника резекцией12. На данном этапе уменьшается скорость opercular движения, теряется тонус мышц и рыба не двигаться после касания12.
    2. Возьмите тупым щипцы и передачи анестезированные данио рерио тщательно перевернутой крышкой 100 мм Петри. Место у рыбок данио на его боковой стороне. Убедитесь, что у рыбок данио всегда лежат в ту же ориентацию, например на их стороне правой тела. С скальпелем или лезвием бритвы иссечения 50% плавника (рис. 1A, 2A).
      Примечание: Скорость регенерации плавник данио рерио зависит от объема резекции плавник ткани, т.е. больше ткани плавника резецируется, тем быстрее плавник восстанавливает13. Таким образом чтобы свести к минимуму различия в плавник регенерации убедитесь всегда иссечения плавника на том же уровне в всех данио рерио.
    3. Передать потерпевшего данио рерио газобетона стеклянный стакан, содержащие 300 мл преднизолона или ДМСО, содержащих воду из рыбы. Покрытие стекла стакан с алюминиевой фольгой во избежание побега у рыбок данио.
    4. Повторите шаги 2.1.2 для 2.1.3, пока не будет достигнуто требуемое количество данио рерио для эксперимента.
  2. Перелом ребра
    1. Подготовьте агарозы покрытием 100 мм Петри, Отопление агарозы 2% раствор в воде рыбы или E3 (эмбриона СМИ 3, хлорид натрия 50 мм, 0,17 мм хлорид калия, хлорид кальция 0,33 мм, сульфат магния 0,33 мм). Осторожно наливайте примерно 10 – 15 мл раствора в чашке Петри. В нижней части блюда должны быть полностью покрыты. Пусть агарозы затвердеть.
    2. Обезболивают данио рерио, как описано в разделе 2.1.
    3. Возьмите тупым щипцы и передачи анестезированные данио рерио тщательно агарозы покрытием 100 мм Петри. Место у рыбок данио на его боковой стороне. Под микроскопом рассечение распространение хвостовой плавник полностью, чтобы иметь возможность определить собственный костлявые плавник лучи и плавник Рэй сегментов. Убедитесь, что у рыбок данио всегда лежат в ту же ориентацию, например на их стороне правой тела.
    4. С укол иглы (0,3 мм х 13 мм) ввести перелом в центре костлявые плавник Рэй сегмента (рис. 1B). Для этого, иглы слегка на помещается сегмента до тех пор, пока трещины появляется (стрелка на рисунке 2B). В то время как мягкое давление приводит к перелом только один из двух противоположных hemirays сильнее давление приведет к перелом обеих hemiray сегментов.
      1. Не вводить слишком много трещин в плавники, так как это будет значительно нарушить стабильность плавника. Как предложение применить переломы только в 3-5 плавник лучи.
      2. Всегда производить переломов в соответствующих сегментах через различные плавник лучи и данио рерио, например в спинном плавнике лучи 3, 7 (или 8) и брюшной плавник Рэй 3. Проксимальный и дистальный уровень перелом идеально на 3 сегментов проксимальнее плавник лучи бифуркации пункт 11.
    5. Передать потерпевшего данио рерио газобетона стеклянный стакан, содержащие 300 мл преднизолона или ДМСО, содержащих воду из рыбы. Покрытие стекла стакан с алюминиевой фольгой во избежание побега у рыбок данио.
    6. Повторите шаги 2.2.2 для 2.2.5, пока не будет достигнуто требуемое количество данио рерио для эксперимента.

3. поколение травм черепа череп (трепанации)

Примечание: Calvariae в zebrafish гомологичных подвздошную костей млекопитающих. Таким образом эти экзоскелета кости14 представляют ткани особый интерес при изучении патогенеза GIO. Травмировать черепа, трепанация выполняется путем сверлить отверстие в Фронтале ОС или ОС parietale (рис. 1 c, 2 C) с помощью microdrill11.

  1. Обезболивают данио рерио согласно разделу 2.1.
  2. Держите наркотизированных данио рерио вертикально с щипцами, так что кости черепа хорошо видны под микроскопом рассечение сверху (рис. 1 c).
  3. Найдите вращающегося microdrill в центре лобная кость (Os Фронтале) и сенсорных кости. Производимых отверстие имеет размер microdrill Берр (500 мкм, Рисунок 2 c, рисунок 3B).
    Примечание: Обязательно не переместить microdrill с боков при производстве травмы. Также остановите немедленно, когда сопротивление костей внезапно падает. Не сверлить любого дальнейшего, иначе мозг будет поврежден 15.
  4. Передать потерпевшего данио рерио клетке, заполненный водой рыбы до тех пор, пока он полностью восстанавливается от анестезии. Смотрите его внимательно.
  5. Передавать потерпевшего данио рерио рыбы воды плюс преднизолона или ДМСО, содержащий стеклянный стакан.

4. Лечение рыбок данио во время инкубации

Примечание: При применении преднизолона/ДМСО, препарат, содержащий рыба должна быть изменена ежедневно, и данио рерио нужно кормить регулярно.

  1. Изменения воды
    1. Обмен воды рыба, оттепель фондовой преднизолон 100 мм и подготовить необходимое количество 50 мкм преднизолона в газобетона рыбы воды свежие каждый день периода лечения. Подготовьте ДМСО, содержащих воду рыбы для управления данио рерио соответственно.
    2. Возьмите стеклянный стакан, содержащие один размещены данио рерио в ее решении инкубации и передачи решения, включая данио рерио в соответствующий контейнер, например клетке временного жилья.
      Примечание: Всегда использовать отдельные промежуточные контейнеры для преднизолона и ДМСО лечение данио рерио, соответственно, чтобы убедиться, данио рерио управления ДМСО не получить воздействию преднизолона и наоборот.
    3. Стеклянный стакан залейте свежий препарат, содержащий рыба (300 мл).
    4. Трансфер данио рерио из промежуточного контейнера в стеклянный стакан, содержащий свежие инкубации решения с помощью чистой рыбы. Положите обратно фольги во избежание побега у рыбок данио.
    5. Если время эксперимента превышает 2 недели, Обмен стеклянные стаканы.
  2. Питание
    1. Во время короткого лечения (на срок до 2 дней) не кормить рыбок данио. Во время больше экспериментов кормите рыбок данио. Особая осторожность во избежание загрязнения инкубации решения. Таким образом кормить с ssp. Артемия , а не с хлопьеобразный корм и только на каждый второй день.
      Примечание: Артемий используются регулярно кормить молодых рыбок данио и должна быть доступна в блоке haltering данио рерио.
      1. Примерно 2 часа перед тем, как осуществляется обмен воды рыбу, кормить рыбок данио с ssp артемии в их стеклянные стаканы. Чтобы сделать это, используйте пластиковые пипетки и кормить 0,5 – 1 мл раствора насиженным артемии в стеклянный стакан.
      2. Подождите 2 h и обмена решение инкубации с свежие препарат, содержащий воды рыбы в соответствии со статьей 4.1.

5. Анализ образцов

Примечание: После инкубации раненых данио рерио преднизолона и ДМСО, содержащих рыбы воду, соответственно, либо анализ минерализации/кальцификации костей (5.1 5.3) или осуществлять живых изображений данио рерио под микроскопом диссекции (5.4) 1011,,16. Используйте живой изображений для определения длины плавника регенерации и для выявления различий в выражении гена репортера в трансгенных данио рерио.

  1. Фиксация тканей интереса
    1. Для фиксации плавники и/или черепа подготовить параформальдегида 4% (PFA) в PBS и замерзает при-20 ° C для хранения. Использовать свежеприготовленные 4% ПФА в оттепель необходимое перед использованием или PBS. Кроме того, 2% может использоваться ПФА в PBS.
      Предупреждение: PFA токсичных и должны тщательно обрабатываться под вытяжного шкафа. Носите защитную одежду.
    2. Для фиксации плавники подготовить небольшой Петри блюдо (например, 30 мм) с холодной 4% ПФА в PBS и убедитесь, что в нижней части блюдо полностью покрыта. Для фиксации черепа, подготовить немного стеклянную банку с крышкой или трубка с холодной 4% ПФА в PBS.
      Предупреждение: Ручка PFA содержащие решения только под зонт как он токсичен. Носите защитную одежду.
    3. Урожай ткани интерес.
      1. Урожай регенерации тканей плавника или плавники с переломами обезболивают данио рерио согласно разделу 2.1 или усыпить данио рерио согласно раздел 5.1.5.
      2. Передать анестезированные данио рерио крышку чашку Петри. С помощью скальпелем или лезвием бритвы, урожай плавник регенерации. Убедитесь, что включать ткани культи в регенерации плавники для облегчения обработки собранного ткани.
    4. Исправьте плавники квартиру в PFA, содержащие Петри на 4 ° C на ночь. Плоские фиксации избегает, свернувшись калачиком плавник ткани во время фиксации.
      1. Чтобы исправить плоский, захватить ткани плавника с одной тонкой щипцы на дорсальной и вентральной краю пень и погрузите его в растворе фиксации. Grab противоположного края пень с второй штраф щипцами и слегка отожмите ткани на нижней части блюдо.
      2. Держите на 10-20 s перед выпуском. Плавник ткани не должно свернуться калачиком больше. Если это так, повторите.
    5. Усыпить данио рерио, чтобы урожай тканей потерпевшего черепа. Подготовить диаметром 100 мм Петри, содержащих 0,1% MS-222 в воде рыбы. Перенести один данио рерио одновременно содержащих Петри MS-222 с помощью рыболовной сети. При достижении уровня 6 анестезии (медуллярного коллапс), ждать по крайней мере 10 мин для обеспечения смерти образца12.
    6. С помощью скальпеля отрезали головы плюс немного ствол ткани от остальной части тела. Погружайте заготовленной ткани в приготовленный раствор 4% ПФА в стеклянную банку или пластиковой трубки. Исправление для 24 ч при температуре 4 ° C с плавное покачивание.
    7. Для хранения образцов долгосрочные после фиксации, вымыть их с PBS (3 x 20 мин на RT) и метанол лечить все серии метанола (1 x 30%, 1 x 50%, 1 x 70%, 2 x 100% метанола в PBS для 20 мин).
      1. Хранить их в 100% метанола при-20 ° C. В противном случае непосредственно приступить к пятнать кости или другие анализы после мытья с PBS.
  2. Кость, пятная методы я (ализарин красный окрашивание)
    Примечание: Это окрашивание производится согласно ван Eeden et al. 199617 и18 Уокер и Киммел 2007 с изменениями.
    1. Чтобы выполнить ализарин красный окрашивания на взрослых плавники или черепа, урожай и исправить ткани, как описано в разделах 5.1.
    2. Если образцы были сохранены в метаноле при-20 ° C, увлажняет образцы, выполнив обратное метанола серии (70%, 50% и 30% в PBS, каждый 1 x 20 минут) и мыть дважды 20 мин с PBS. Вымойте образцы для 5 минут минимум деионизированной водой.
    3. Делать ализарин красный пятнать в черепа, лечить образцы с 50 мг/мл трипсина в 30% насыщенных Na2B4O7 при комнатной температуре на ночь. Образцы в это время. Промыть образцов в 30% насыщенных Na2B4O7 решение. Вымойте пробы дейонизированной водой 2 раза за 5 мин. Этот шаг не выполняется для ткани плавника.
    4. Добавить решение ализарин красный (часть B: 0.5% ализарин красный S порошок, 10% глицерина в деионизированной воде) и рок образцов во время инкубации на RT. Check для пятнать после 1, 2, 4 часов или на ночь.
    5. Чтобы удалить образцы относиться к ним с сокращением 1% калия гидроксид: глицерин серию (3:1 ночь, ночь 1:1, 1:3 ночи).
    6. Хранение образцов в растворе 1:1 0.1% калия гидроксид: 80% глицерина и смонтировать их с 80% глицерином для воображения.
      Примечание: Для комбинированных Альциановый синий/ализарин красный пятнать лечить образцы с Альциановый синий окрашивание раствора (часть A: окончательный 0,02% Альциановый синий, 50 мм MgCl2, 70% этиловом спирте) после регидратации (раздел 5.2.2) за 2 ч на RT. лечить плавники с серией снижение этанола в 50 мм MgCl2 (70%, 50%, 30%, каждый 1 x 15 мин.) и мыть их как минимум 1 час (3 x 20 минут) в деионизированной воде. Продолжите ализарин красный окрашивание (раздел 5.2).
  3. Кости методы окраски II (Флуорексон окрашивание)
    Примечание: Чтобы обнаружить отложение кальция в плавник переломы и травмы черепа, живой рыбы инкубируют в Флуорексон, содержащий решение.
    1. Подготовьте необходимое количество Флуорексон 0,2% в деионизированной воде (рН 7,5). Убедитесь, что рН нейтральным. Используйте 1 M NaOH для регулировки рН.
    2. Инкубируйте до 3 данио рерио одновременно в 100 мл раствора Флуорексон для 20 мин в стеклянный стакан, покрытые алюминиевой фольги.
    3. Данио рерио передать стакан с водой рыбы. Пусть они плавают кратко до их перевода в новый стакан с водой рыбы. Пусть они плавают в этой новой стакан на 20 минут, чтобы мыть. Возьмите фотографии (см. раздел 5.4).
  4. Жить, Визуализация данио рерио
    1. Используйте этот подход для получения изображения регенерации костной ткани, такие как в плавник или череп на протяжении всего эксперимента без ущерба для рыбок данио. Обезболивают данио рерио согласно разделу 2.1.
    2. Чтобы получить изображения плавник регенерирует, передачи анестезированные данио рерио на агарозы покрытием Петри (см. раздел 2.2.1 и Рисунок 1B).
    3. Чтобы получить изображения регенерации костей черепа, место данио рерио upright в губки (рис. 1 d) или поместить его в агарозном покрытием блюдо, который был подготовлен провести ствол данио рерио.
    4. Получение изображений на желаемого увеличения и разрешение с использованием stereomicroscopic установки.
    5. Данио рерио вернуть контейнер с пресной или препарат, содержащий воды рыбы.

Результаты

Протокол, представленные здесь неоднократно использовались для формирования быстрого костей в ходе регенерации данио рерио ребра и череп10,11,16. В сочетании с представленным методом преднизолона администрации может о...

Обсуждение

Данио рерио оказались полезными в скелетных исследований во многих отношениях. Выбранный мутантов имитировать аспекты заболеваний человека, таких как несовершенный Остеогенез или остеоартрита23,24,25,26,

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Это исследование было поддержано Грант центр восстановительной терапии Дрезден («данио рерио как модель разгадать механизмов глюкокортикоидных индуцированной костной потери») и дополнительно грант Deutsche Forschungsgemeinschaft (Transregio 67, проект 387653785) к ФК. Мы очень благодарны Ян Kaslin и Авинаш Chekuru за их руководство и помощь на проведение трепанации calvariae и переломов в костлявые плавник лучи. Эксперименты были разработаны, выполняются и проанализированы кг и FK. FK написал рукопись. Мы также хотели бы поблагодарить Katrin Ламберт, Николь Cudak и другие члены Кнопф и бренд лабораторий для оказания технической помощи и обсуждения. Мы благодарим также Marika Фишер и Иткой Michling для ухода за отличные рыбные и Henriette Knopf и Джош карри для корректуры рукопись.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
PrednisoloneSigma-AldrichP6004
Dimethylsulfoxid (DMSO)Sigma-AldrichD8418
Ethyl-3-aminobenzoate methanesulfonate (MS-222)Sigma-AldrichA5040
Blunt forcepsAesculapBD027R
Fine forcepsDumont91150-20
ScalpelBraun5518059
AgaroseBiozym840004
Injection needle (0.3 mm x 13 mm)BD Beckton Dickinson30400
Micro drillCell Point Scientific67-1000distributed e.g. by Harvard Apparatus
Steel burrs (0.5 µm diameter)Fine Science tools19007-05
Artemia ssp.Sanders425GR
Pasteur pipette (plastic, Pastette)Alpha LabsLW4111
ParaformaldehydeSigma-Aldrich158127
Alizarin red S powderSigma-AldrichA5533
Alcian blue 8 GXSigma-AldrichA5268
CalceinSigma-AldrichC0875
TrypsinSigma-AldrichT7409
StereomicroscopeLeicaMZ16 FAwith QIMAGING RETIGA-SRV camera
StereomicroscopeOlympusMVX10with Olympus DP71 or DP80 camera

Ссылки

  1. Westerfield, M. . The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
  2. Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols. 10 (12), 2064-2073 (2015).
  3. Kaufman, C. K., White, R. M., Zon, L. Chemical genetic screening in the zebrafish embryo. Nature Protocols. 4 (10), 1422-1432 (2009).
  4. Paul, S., Crump, J. G. Lessons on skeletal cell plasticity from studying jawbone regeneration in zebrafish. Bonekey Reports. 5, 853 (2016).
  5. Witten, P. E., Harris, M. P., Huysseune, A., Winkler, C. Small teleost fish provide new insights into human skeletal diseases. Methods in Cell Biology. 138, 321-346 (2017).
  6. den Uyl, D., Bultink, I. E., Lems, W. F. Advances in glucocorticoid-induced osteoporosis. Current Rheumatology Reports. 13 (3), 233-240 (2011).
  7. Barrett, R., Chappell, C., Quick, M., Fleming, A. A rapid, high content, in vivo model of glucocorticoid-induced osteoporosis. Biotechnology Journal. 1 (6), 651-655 (2006).
  8. de Vrieze, E., et al. Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales. Osteoporosis International. 25 (2), 567-578 (2014).
  9. Pasqualetti, S., Congiu, T., Banfi, G., Mariotti, M. Alendronate rescued osteoporotic phenotype in a model of glucocorticoid-induced osteoporosis in adult zebrafish scale. International Journal Of Experimental Pathology. 96 (1), 11-20 (2015).
  10. Geurtzen, K., et al. Immune Suppressive and Bone Inhibitory Effects of Prednisolone in Growing and Regenerating Zebrafish Tissues. Journal of Bone and Mineral Research. , (2017).
  11. Geurtzen, K., et al. Mature osteoblasts dedifferentiate in response to traumatic bone injury in the zebrafish fin and skull. Development. 141 (11), 2225-2234 (2014).
  12. Matthews, M., Varga, Z. M. Anesthesia and euthanasia in zebrafish. Institute of Laboratory Animal Resources Journal. 53 (2), 192-204 (2012).
  13. Lee, Y., Grill, S., Sanchez, A., Murphy-Ryan, M., Poss, K. D. Fgf signaling instructs position-dependent growth rate during zebrafish fin regeneration. Development. 132, 5173-5183 (2005).
  14. Hirasawa, T., Kuratani, S. Evolution of the vertebrate skeleton: morphology, embryology, and development. Zoological Letters. 1, 2 (2015).
  15. Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration. Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).
  16. Knopf, F., et al. Regenerates via Dedifferentiation of Osteoblasts in the Zebrafish Fin. Developmental Cell. 20 (5), 713-724 (2011).
  17. van Eeden, F. J., et al. Mutations affecting somite formation and patterning in the zebrafish, Danio rerio. Development. 123, 153-164 (1996).
  18. Walker, M. B., Kimmel, C. B. A two-color acid-free cartilage and bone stain for zebrafish larvae. Biotechnic & Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).
  19. Kyritsis, N., et al. Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain. Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).
  20. Oppedal, D., Goldsmith, M. I. A chemical screen to identify novel inhibitors of fin regeneration in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 53-60 (2010).
  21. Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish. Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).
  22. Spoorendonk, K. M., et al. Retinoic acid and Cyp26b1 are critical regulators of osteogenesis in the axial skeleton. Development. 135 (22), 3765-3774 (2008).
  23. Gioia, R., et al. The chaperone activity of 4PBA ameliorates the skeletal phenotype of Chihuahua, a zebrafish model for dominant osteogenesis imperfecta. Human Molecular Genetics. 26 (15), 2897-2911 (2017).
  24. Fiedler, I. A. K., et al. Severely impaired bone material quality in Chihuahua zebrafish resembles classical dominant human osteogenesis imperfecta. Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).
  25. Fisher, S., Jagadeeswaran, P., Halpern, M. E. Radiographic analysis of zebrafish skeletal defects. Developmental Biology. 264 (1), 64-76 (2003).
  26. Hayes, A. J., et al. Spinal deformity in aged zebrafish is accompanied by degenerative changes to their vertebrae that resemble osteoarthritis. PLoS One. 8 (9), e75787 (2013).
  27. Mitchell, R. E., et al. New tools for studying osteoarthritis genetics in zebrafish. Osteoarthritis Cartilage. 21 (2), 269-278 (2013).
  28. Fleming, A., Sato, M., Goldsmith, P. High-throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish. Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 823-831 (2005).
  29. de Vrieze, E., Zethof, J., Schulte-Merker, S., Flik, G., Metz, J. R. Identification of novel osteogenic compounds by an ex vivo sp7:luciferase zebrafish scale assay. Bone. 74, 106-113 (2015).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

140Fin

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены