JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Клинически, дефицит эстрогена у женщин менопаузы может усугубить частоту нарушения липидов и атеросклероза. Мы создали модель дефицита эстрогена in vivo путем двусторонней овариэктомии с помощью двойного торсалово-бокового разреза у апоЭ-/- мышей. Мышь модель применима для скрининга экзрогена эстроген лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы.

Аннотация

Постменопаузальные женщины подвергаются большему риску развития сердечно-сосудистых заболеваний, чем женщины в пременопаузе. Самки мышей ovariectomized (OVX) при отлятке дисплей увеличение атеросклеротических поражений в аорте по сравнению с самками мышей с нетронутой функции яичников. Тем не менее, лабораторные модели с участием эстроген-дефицитных мышей с атеросклерозом подверженных статусу отсутствуют. Этот дефицит имеет решающее значение, поскольку клинический дефицит эстрогена у женщин в период менопаузы может усугубить заболеваемость уже существующими или продолжающимися нарушениями липидов и атеросклерозом. В этом исследовании мы устанавливаем in vivo эстроген-дефицитной мыши модели двусторонней овразиэктомии через двойной престоченно-боковой разрез в аполипопротеин E (apoE)-/- мышей. Затем мы сравниваем эффекты 17-эстрадиола и псевдопротодиоскина (PPD) (фитоэстрогена) перорально вводят через фундук распространения. Мы находим, что, хотя PPD оказывает определенное влияние на снижение конечной массы тела и плазмы TG в OVX apoE-/- мышей, он имеет анти-атеросклеротические и сердечно-защитные возможности сопоставимы с его 17 "эстрадиол коллега. PPD является фитоэстрогена, который, как сообщается, оказывают противоопухолевые свойства. Таким образом, предлагаемый метод применим для скрининга фитоэстрогенов через пероральный администрации, чтобы заменить традиционную заместительную гормональную терапию у женщин в постменопаузе, которая, как сообщается, потенциально вредных tumorigenetic Емкость. Пероральная администрация с помощью распространения фундука является неинвазивным, что делает его широко применимым для многих пациентов. Эта статья содержит пошаговые демонстрации двусторонней овариэктомии через двойной торсал-боковой разрез в апоЕ-/- мышей и пероральных 17-эстрадиол или фитоэстроген гормона замены через фундук распространения. Плазменные липидные и сердечно-сосудистые функции анализируют сяокардиографию.

Введение

Эпидемиологические и клинические исследования показали, что женщины в постменопаузе подвергаются значительно большему риску сердечно-сосудистых заболеваний, чем женщины в пременопаузе1,2. Заместительная гормональная терапия (ГрЗ) может снизить относительный риск сердечно-сосудистых заболеваний до 0,37-0,793. Среди других осложнений, атеросклероз, вызванный сердечно-сосудистыми заболеваниями является ведущей причиной смерти во всем мире4. Тем не менее, лабораторные модели с участием эстроген-дефицитных мышей, представляющих атеросклероз подверженных статусне отсутствуют. Этот протокол обеспечивает in vivo эстроген дефицит мыши модель для скрининга экзрогена эстроген лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы.

Предыдущие исследования показывают, что применение OVX у атеросклеротических грызунов кормили высоким содержанием холестерина диета может имитировать женщин в постменопаузе женщин, страдающих атеросклерозом5,6,7,8. Воспроизводимая и удобная модель животных, напоминающая атеросклеротическое состояние у женщин в период менопаузы, является основой исследований экзогенного эстрогена. Здесь двойной торсал-боковой разрез двусторонней овариэктомии был применен в подверженных атеросклерозу аполипопротеина E нокаутом (apoE-/-) мышей9,10. По сравнению со средним разрезом брюшной полости или стрижкой, двойной терзательный разрез является более легким, менее трудоемким методом, который может избежать тяжелой адгностии и воспаления. Пероральный администрации через фундук распространения (см. Таблица материалов) является неинвазивным и удобным, что делает его широко применимы множеству в качестве долгосрочного режима администрирования11. Медленно-релиз гранулы имплантации также популярен6. Тем не менее, имплантаты могутуго усугублять заболеваемость инфекцией, особенно у мышей, подвергаемых OVX. Другие неинвазивные режимы администрирования, такие как устные gavage и управление водой, также имеют много недостатков. Устные gavage обычно стресс мышей и может привести к травмам пищевода. Администрирование гормона через питьевую воду является весьма полезным; однако, добавление DMSO как эмульгатор неизбежно по мере того как экзогенные эстрогены нерастворены в воде. Здесь мы выбрали пероральный 17-эстрадиол или фитоэстрогена заместительной гормональной книжки через распространение фундука для длительного введения.

В последнее время благотворное влияние ЗГТ на сердечно-сосудистую систему женщин в постменопаузе было оспорено в инициативе по охране здоровья женщин (WHI) испытаний12. С одной стороны, экзогенный эстроген сам по себе оказывает благотворное влияние на сердечно-сосудистую систему; с другой стороны, он может сочетаться с ацетатом метогидрогестерона для повышения риска сердечно-сосудистых событий. Более серьезно, ЗГТ может привести к прогрессии опухоли молочной железы и матки, и этот эффект заметно ограничил его использование13,14. Больше интереса было сосредоточено на сердечно-сосудисто-защитных эффектов экзогенных эстрогенов, не хватает митотической активности в опухолевых клетках15,16,17. Многочисленные исследования на людях и животных показывают, что фитоэстрогены со структурами, похожими на эстрогены могут играть полезную роль в сердечно-сосудистой защиты15,18.

Таким образом, целью настоящей работы является (i) построить in vivo эстроген дефицит мыши модели двусторонней ovariectomy с помощью двойного розн-бокового разреза в apoE-/- мышей и (ii) для сравнения сердечно-сосудистых защитных эффектов перорально вводят 17-эстрадиол и псевдопротодиосин (PPD), с помощью фундука распространения. 17 "эстрадиол является одним из видов экзогенного эстрогена, который принадлежит к женским половым гормонам6,11,19. PPD, стероидный сапонин и фитоэстрогены из растений Dioscorea, ранее сообщалось, оказывают противоопухолевые свойства20.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Все протоколы по уходу за животными и экспериментальные протоколы были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Китайской академии медицинских наук и Пекинским союзом медицинского колледжа (разрешение No.: SYXK (Пекин) 2013-0023). Происхождение apoE-/- мышей C57BL/6J9,10.

1. Двусторонняя обариэктомия через двойной торсально-боковой разрез в апое-/- Мыши

  1. При отъеме (возраст 28 дней) анестезируют самку апоэ-/- C57BL/6J мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитонеалли).
    ПРИМЕЧАНИЕ: 32 apoE-/- мыши были случайным образом разделены на 4 группы: SHAM, OVX, OVX/E2, и группа OVX/PPD (n - 8 в группе).
  2. Поместите животное в положение на грелку. Нанесите глазную смазку для защиты глаз во время анестезии.
  3. Поддерживайте температуру тела в пределах 36 и 0,5 градусов по Цельсию. Администрирование 5 мг/кг массы тела обезболиващее карпрофен подкожно боковой аспект шеи мыши.
  4. Бритье 3 х 5 см2 мыши области цефалика от подвздошной гребень. Перед покрытием животного с 3 х 5 см2 диафрагмы хирургический лист, очистить бритую область тщательно с йодом, а затем 70% этанола. Используйте стерильные инструменты и перчатки во время эксперимента.
  5. Используйте ножницы и щипцы, чтобы сделать разрез 1 см боковой к средней линии и 1 см боковой к костным ребрам.
  6. Грубо вскрыть подкожную ткань с помощью щипков.
  7. Используйте рассекающие очки (см. таблицуматериалов) для выявления белой жировой ткани в брюшной полости.
  8. Используйте микроскиссоры и микросиловые, чтобы сделать разрез 0,5-1 см через фасцию до тех пор, пока брюшная полость не будет достигнута.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для фиктивной группы, закрыть раны непосредственно. Шов мышечного слоя и кожи отдельно с помощью монофиломента шов.
  9. Когда белая жировая ткань в брюшной полости можно увидеть, захватить жировой ткани с помощью микроусилит и осторожно вытащить его. Розовый шелковицы формы яичника, завернутые жировой ткани в брюшной полости можно увидеть.
  10. Свайга 0,5-1 см проксимального сосуда и рог матки с помощью шва монофиламента. Удалить яичников с помощью микроскиссоров и поместить оставшиеся ткани обратно в брюшной полости.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Основными неблагоприятными симптомами операции OVX является перевязка мочеточника, которая приводит к высокой смертности у мышей, работающих на OVX. Этого можно избежать, идентифицируя ткани с помощью рассекающего очка.
  11. Закройте раны. Шов мышечного слоя и кожи отдельно с помощью монофиломента шов.
  12. Используйте ножницы и щипцы, чтобы сделать еще один разрез 1 см боковой к средней линии и 1 см боковой к костным ребрам на другой стороне. Повторите вышеупомянутую процедуру (1,5 - 1,11).
  13. Пусть животное проснется от анестезии. Отдельно держите мышь в первый день после операции.
  14. Очистите или замените клетку часто во время фазы восстановления.
  15. Приблизительно 24 ч после операции, управлять еще 5 мг/кг массы тела обезболиваще карпрофен подкожно.

2. Пероральная администрация 17-эстрадиола или PPD через спред фундука

  1. Тщательно растворите 17-эстрадиол или PPD в кунжутном масле, а затем смешайте кунжутное масло с распространением фундука (см. Таблицаматериалов). Ежедневная порция на каждые 30 г мыши содержит 3 мкг 17-эстрадиола или 15 мкг PPD, 4 л кунжутного масла и 60 мг распространения фундука. Приготовьте плацебо для каждого 30 г мыши содержит 4 л кунжутного масла и 60 мг фундука.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ежедневная административная часть 17-эстрадиола или PPDбыла основана на предыдущих исследованиях 6,11 и предварительных экспериментах.
  2. Через неделю после OVX, кормить мышей с высоким содержанием холестерина диеты (1,25% холестерина, 0% холата) в течение 12 недель. Типичная экспериментальная схема лечения, используемая в данном исследовании, иллюстрируется на рисунке 1.
  3. За 5 дней до перорального введения фундука распространяется на 4 неделе, поезд мышей есть плацебо, содержащее примерно 30 мг фундука распространения на 2-5 мышей в течение 5 дней. Тренируйте мышей группами в их домашних клетках в течение первых 3 дней. Поместите мышей в отдельные клетки на четвертый и пятый дни обучения и служить ежедневной части напоминают экспериментальную ситуацию.
  4. В течение последних 9 недель, место мышей в отдельных клетках, а затем служить ежедневночасть фундука распространения части для каждого случая кормления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подавать дневную порцию, содержащую 17-эстрадиол (0,1 мг-кг-1) или PPD (0,5 мг кг-1) через фундук распространяется в OVX/E2 и OVX/PPD группы соответственно; служить ежедневной порции, содержащей гормонов, свободного фундука распространения в группе SHAM и OVX.

3. Определение толщины Интима-медиа и сердечной дисфункции с помощью микроультрасистемы

  1. Ультрасонографическая биомикроскопия
    1. За день до прекращения, изучить интима-медиа толщина и сердечной дисфункции с помощью микроультрасистемы (см. Таблица материалов), как ранее описано21.
    2. Перед обследованием, дать каждой мыши 200 мг/кг интраперитонеальной инъекции авертина (трибромоэтанол) в качестве анестезии (n - 8 мышей на группу).
    3. Тщательно брить волосы на шее каждой мыши. Нанесите теплый гель ультразвуковой передачи либерально, чтобы обеспечить оптимальное качество изображения.
    4. Получить базовые ультрасонографические изображения корня аорты и восходящей аорты с 30 МГц сканировать голову на 12,7 мм фокус и разрешение 40 мкм.
    5. Используйте электрокардиографию с конфигурацией свинца II для мониторинга.
    6. Захват правой парастернальной длинной оси изображения восходящей аорты, аорты арки, и брахиоцефалической ветви артерии в одной плоскости в систоле(Рисунок 3).
  2. Измерения интима-медиа и максимальной толщины налета
    1. Отрегулируйте расстояние между преобразователем и артериальным местом легко получить четкие изображения.
    2. Храните 10 s cine петлю в цифровом виде для автономного рассмотрения в системе анализа изображений.
    3. Выберите оптимальное ультрасонографическое изображение замораживания кадра вручную для дальнейших измерений. Проверьте изображения в незначительной кривизне восходящей аорты. Если можно увидеть бляшки в восходящей аорте, измерьте максимальную толщину бляшки. Если бляшки в восходящей аорте не видно, измерьте максимальный IMT.
    4. Измерьте IMT (расстояние между сосудистым светило-интимным интерфейсом и медиально-авантюрным интерфейсом). Измерьте максимальную толщину налета (самое максимальное расстояние между границей сосудистого просвета и авантюрного слоя).
    5. Средние данные с трех сайтов поражения(рисунок 3).
  3. Определение сердечной дисфункции с помощью эхокардиографии
    ПРИМЕЧАНИЕ:     Изучите сердечную функцию с помощью эхокардиографии с помощью микроультрасистемы, как описано ранее22.
    1. Направьте ультразвуковой луч к сердцу, вблизи папиллярных мышц.
    2. Достижение двухмерной визуализации килогерца на основе электрокардиограммы.
    3. Выполните в vivo трансторакальной эхокардиографии левого желудочка с помощью 30 МГц сканировать голову.
    4. Измерьте параметры, связанные с сердечной функцией в цифровом виде с помощью трассировки M-mode.
    5. Среднее значение данных от трех до пяти сердечных циклов(таблица 1).
  4. Вариабельность внутри- и интернаблюдателя
    1. Для проверки изменчивости intraobserver проанализируйте данные одним оператором в двух разных случаях.
    2. Для оценки изменчивости интернаблюдателя проанализируйте данные другим оператором.

4. Еженедельное измерение веса тела и гласного общего холестерина (TC) и триглицеридов (TG) Определение

  1. Еженедельное измерение массы тела
    1. Измеряйте массу тела один раз в неделю с недели -1 до недели 12.
      ПРИМЕЧАНИЕ: n 8 мышей на группу.
  2. Плазменный препарат
    1. Перед сбором образцов крови через внутрикардийный прокол, подготовить шприцы и трубки. Используйте EDTA в качестве антикоагулянта. Добавьте 10 юл 0,5 М EDTA к каждому шприцу 2 мл, и добавьте 8 л 0,5 М EDTA к каждой трубке 1,5 мл.
    2. На 12-й неделе, после ночного поста, анестезируйте мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитоненалически).
      ПРИМЕЧАНИЕ: n - 3 мышей на группу.
    3. Подготовка брюшной области груди с 70% этанола.
    4. Используйте ножницы и щипцы, чтобы открыть грудной полости и сократить ребра, пока бьющееся сердце подвергается.
    5. Вставьте 25 G иглу в правый желудочек. Медленно аспирировать, пока кровь не начнет поступать в шприц.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мы используем одноразовые шприцы в стерильном состоянии с 25 G иглы (см. Таблица материалов).
    6. Продолжайте аспиратовать с устойчивым, даже давление. Если кровь не видна, перемещайте иглу и повторите устремление.
    7. Держите мышей глубоко обезвраженный перед сбором необходимого объема крови. Как правило, до 1 мл крови могут быть собраны. Эвтаназия мышей путем вывиха шейки матки при этом глубоком анестетике.
    8. Pipette образцы крови в 1,5 мл труб и инвертировать кровь тщательно, чтобы обеспечить смешивание ЭДТА в крови. Затем поместите образцы крови на лед немедленно.
    9. Образцы центрифуги в течение 20 мин при 400 х г при 4 кв. м в пределах 30 минут от сбора.
    10. Соберите супернатант тщательно. Aliquot и хранить образцы плазмы при -80 градусах Цельсия.
  3. Построить стандартные кривые для измерения содержимого ТС или ТГ
    1. Для стандартной кривой ТК подготовьте различные концентрации холестериновых стандартов: 0 ммоль/л, 0,52 ммоль/л, 1,03 ммоль/л, 2,07 ммоль/л, 4,14 ммоль/л, 6,20 ммоль/л, 8,27 ммоль/л и 10,34 ммоль/л. Установите средний O.D. для каждого стандарта холестерина. Как вертикальное значение (Y) оси, установите концентрацию в качестве горизонтального значения оси (X). Создайте стандартную кривую с помощью статистического программного обеспечения.
    2. Для стандартной кривой TG подготовьте различные концентрации стандартов TG: 0 ммоль/л, 0,45 ммоль/л, 0,90 ммоль/л, 1,81 ммоль/л, 3,62 ммоль/л, 5,42 ммоль/л, 7,23 ммоль/л и 9,04 ммоль/л. Установите средний O.D. для каждого стандарта TG в качестве вертикального значения оси (Y); установленная концентрация в качестве горизонтального значения оси (X). Создайте стандартную кривую с помощью статистического программного обеспечения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для построения стандартной кривой в настоящем исследовании для стандартной кривой была использована четырехпопарамическая кривая (4-пл). Проверьте стандартную кривую перед измерением образцов плазмы и убедитесь, что r2 больше, чем 0,995.
  4. Измерение содержания ТС
    1. Этикетка бутылку цветного реагента (25 мл) из Комплекта TC анализ, как "TC Рабочее решение".
    2. Vortex рефрижераторные образцы кратко. Подготовка разбавления: 20 л плазмы в 80 л дистиллированной воды. Кратко разбавления вихрей.
    3. Добавьте 2,5 л холестериновых стандартов (5,17 ммоль/л) или 2,5 л разбавленной плазмы или 2,5 л дистиллированной воды (пустой) к соответствующим скважинам 96-хорошей пластины. Рекомендуется трипликация.
    4. Ко всем скважинам добавьте 250 л цветного реагента.
    5. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 мин.
    6. Включите микроплиту и дайте 10 минут согреться.
    7. Удалите пластину (ы) из инкубатора и прочитайте считыватель микроплит на 510 нм. Убедитесь, что пузырьки или пыль не присутствуют в скважинах микротитера или в нижней части пластины, соответственно.
    8. Рассчитайте концентрацию ТС следующим образом:
      TC cont. - холестериновые стандарты cont. (плазменный образец O.D.-blank O.D)/(холестериновые стандарты O.D.-blank O.D)
  5. Измерение содержания TG
    1. Этикетка бутылку цветного реагента (25 мл) из TG анализ комплекта как "TG Рабочее решение".
    2. Vortex рефрижераторные образцы кратко.
    3. Добавьте 2,5 л стандартов TG (2,26 ммоль/л) к 2,5 л разбавленной плазмы или 2,5 л дистиллированной воды (пустой) к соответствующим скважинам 96-хорошей пластины. Рекомендуется трипликация.
    4. Ко всем скважинам добавьте 250 л цветного реагента.
    5. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 мин.
    6. Включите микроплиту и дайте 10 минут согреться.
    7. Удалите пластину (ы) из инкубатора и прочитайте считыватель микроплит на 510 нм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что пузырьки или пыль не присутствуют в скважинах микротитера или на дне пластины.
    8. Рассчитайте концентрацию TG следующим образом:
      TG cont. - TG стандарты cont. (плазменный образец O.D.-пустой O.D)/(TG стандарты O.D.-пустой O.D)

5. Ан анализ лица атеросклеротических поражений

  1. Изоляция аорты и иссечение
    1. На 12-й неделе, после ночного поста, анестезируйте мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитоненалически). Эвтаназия мышей путем вывиха шейки матки при этом глубоком анестетике.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мы использовали 3 мышей на группу.
    2. Подготовка брюшной области груди с 70% этанола. Используйте ножницы и щипцы, чтобы открыть грудной полости и сократить ребра, пока бьющееся сердце подвергается.
    3. Заполните 50 мл шприц с фосфатбуферным сольниковприпа при рН 7.4 (см. Таблицаматериалов). Вставьте 25 G иглы в левый желудочек и вырезать правое предсердие, чтобы избежать высокого давления от перфузии.
    4. Выполняйте на месте перфузию при скорости потока 0,05-0,08 мл/мин. Абсорбить перфузийную жидкость с тканями.
    5. Удалить ребра и легкие в грудной полости с ножницами и щипками. Затем откройте брюшную полость и удалите органы внутри для лучшего обзора аорты.
    6. Удалите аорту, удерживая сердце с микрофорспы и отделяя аорту от позвоночника дорсально с microscisssors до подвздошной бифуркации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При вскрытии вблизи почечной ветви предсердий, вырезать глубоко с помощью микросциссоров, чтобы избежать повреждения аорты.
    7. Исправить сердце и аорту на 48 ч в 4% параформальдегида. Храните аорты в сольнике при комнатной температуре или при температуре 2-8 градусов по Цельсию в течение нескольких часов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эта процедура облегчит очистку.
  2. Подготовка аорты
    1. Удалите сердце. Тщательно удалите авантюрные ткани из аорты с помощью микрощипнов и микросциссоров под стереомикроскоп. Используйте солин, чтобы сохранить ткань влажной во время очистки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы не рвать или ник аорты и некоторых важных ветвей, таких как неназначенная артерия, оставил общую сонную артерию, и левой подклавиане артерии.
    2. Оставьте 1 мм неноминности и оставьте общие сонных артерий и отрежьте всю левую подклавианную артерию.
    3. Отрежьте внешнюю кривизну через неназначенную артерию, затем в левую общую сонную артерию, а затем в левую подклавианную артерию.
    4. Разрежьте вдоль внутренней кривизны восходящей части к нижней части брюшной части.
    5. Прикрепите аорту на черный пластиковый лист и нанесите солен, чтобы аорты не высыхать.
  3. Изображение интимной области аорты
    1. Сфотографируйте ан лицо аорты со стерео микроскопом. Включите линейку миллиметровой шкалы в изображения для калибровки измерений.
    2. Включите арки и грудной области в том же изображении и брюшной области в другой. Сохранение изображений как JPEG или TIFF.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Область арки находится от стыка миокарда до 3 мм дистальной от левой подклавской артерии, грудная область 3 мм дистальная к левой субклавианской артерии до последней межреуальной артерии, а брюшная область является последней межреберной артерией до подвздошной артерии до подвздошной артерии Бифуркации.
  4. Количественная оценка атеросклеротического метода поражения лица
    1. Калибровки
      1. Откройте изображение с помощью программного обеспечения для анализа изображений (см. ТаблицуМатериалов), перейдите к пространственной калибровке и следуйте инструкциям.
      2. Измените эталонные единицы на мм, позиционируя линейку над линией.
    2. Измерения
      1. Установите правильную калибровку для каждого изображения.
      2. Мера 3 мм на линейке.
      3. Измерение арочной и грудной области: Очертивай область арки от стыка миокарда до 3 мм дистальной от левой субклавианской артерии и грудной области от 3 мм дистальной до левой субклавианской артерии до последней межреберной артерии. Следы поражений в арке и грудной области и смотреть на аорту через микроскоп.
      4. Измерение брюшной области: Очертание области брюшной полости от конца грудной области до подвздошной бифуркации. Следы поражения в области брюшной полости и смотреть на аорту через микроскоп.
      5. Рассчитайте область поражения относительно внутренней поверхности аорты.
      6. Проверить количественную оценку через второго наблюдателя, который слеп к исследовательским группам.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Типичная экспериментальная схема лечения, используемая в данном исследовании, иллюстрируется на рисунке 1. При отъеме (возраст 28 дней) самки апоэ-/- C57BL/6J мышей обезболилили савертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитонена). Мыши были двусторон?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Методология, описанная здесь, представляет собой модель мыши, напоминающую нарушение липидов и атеросклероз, наблюдаемый у женщин в период менопаузы. Хорошо документировано, что дефицит эстрогена у женщин в постменопаузе может усугубить заболеваемость уже существующих или текущих ги...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют о конфликте интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81202526 до J.X.), Национальным фондом естественных наук Китая (81302769 до B.S.), Пекинским муниципальным фондом естественных наук (47144226 до B.S.), Китайским постдокторским Научный фонд (20110490325 до J.X.), и Ph.D. Программы Фонда Министерства образования Китая (20121106120031 до B.S.).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
17β-estradiol, >98%Sigma-AldrichE8875-250MGEstrogen
Disposable syringes (with 25 G needles)Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd0.5*19TWLBCardiac bleeding
High-cholesterol mouse dietHuafukang Bio-TechnologyN/A1.25% cholesterol, 0% cholate
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging SystemVisualSonicsVevo®770Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction
2-Methyl-2-butanolSigma-Aldrich152463-250MLPreparation of avertin
Micro Dissecting forceps, Curved 8mmKanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Micro Dissecting forceps, Straight 8 mmKanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8 mmKanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8 mmKanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Monofilament suture 4-0 1/2 5 x 12 19 mmShanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LtdR413Suture and ligation of the tissues
Nut cream (Nutella)FerreroN/AMedium for peroral 17β-estradiol or PPD
OptiVisor optical glass binocular magnifierDohegan Optical Company Inc.N/AAssistant of identifying the tissues during ovariectomy
Phosphate-buffered saline at pH 7.4SIGMAP3813Preparing 1 L saline
Pro MultiLabel Microplate ReaderTecanInfinite M1000Plasma TC and TG determination
PseudoprotodioscinShanghai Winherb Medical S & T DevelopmentW-0427CAS registry no. 102115-79-7
Rimadyl, 50 mg/mLPfizer Pharma GmbH462986Postoperative analgesia after ovariectomy
Sesame oilSigma-AldrichS3547-1LDissolving the 17β-estradiol or PPD
Solcoseryl Eye-GelMenarini, Solco Basle Ltd.Eye protection during anesthesia
Stereo microscopeMCALONMCL-6STVImage of the intimal region of aorta
Table model high speed centrifugeSIGMA1-14KPreparation of plasma
Scissors, slight Curve (14 cm)Kanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Scissors, straight Flat (14 cm)Kanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14 cm)Kanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14 cm)Kanghua Medical Equipment Co., LtdSurgical tools
TribromoethanolSigma-AldrichT48402-5GPreparation of avertin
Triglycerides (TG) assay kitInstitute of Nanjing Jiancheng Biology EngineeringA110-1Plasma TG determination
Total cholesterols (TC) assay kitInstitute of Nanjing Jiancheng Biology EngineeringA111-1Plasma TC determination

Ссылки

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).
  2. Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).
  3. Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26 (6), 1403-1410 (1995).
  4. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420 (6917), 868-874 (2002).
  5. Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).
  6. Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).
  7. Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).
  8. Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).
  9. Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258 (5081), 468-471 (1992).
  10. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).
  11. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).
  12. Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).
  13. Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).
  14. Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).
  15. Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).
  16. Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).
  17. Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).
  18. Guivarc'h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).
  19. Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).
  20. Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).
  21. Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).
  22. Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).
  23. Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).
  24. Keaney, J. F. Jr, et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).
  25. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).
  26. Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).
  27. Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).
  28. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).
  29. Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).
  30. Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).
  31. Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

150

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены