Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
* Эти авторы внесли равный вклад
В данной работе мы описываем экспериментальную модель инфаркта миокарда, процедуру эхокардиографии для изучения ремоделирования и функции сердца, а также процедуры количественной оценки фиброза и гипертрофии в участках, окрашенных в красный цвет и родамином, а также размер и индекс расширения инфаркта в срезах, окрашенных трихромом Массона.
Сердечно-сосудистые заболевания являются наиболее распространенной причиной смерти в западных странах, при этом наиболее распространенной формой является острый инфаркт миокарда (ИМ). В данной статье описывается протокол изучения роли галектина 3 (Gal-3) во временной эволюции заживления и ремоделирования сердца на экспериментальной животной модели ИМ.
Описанные процедуры включают экспериментальную модель ИМ с постоянной коронарной лигатурой у самцов мышей C57BL/6J (контроль) и нокаута Gal-3 (KO), процедуру эхокардиографии для изучения ремоделирования сердца и систолической функции in vivo, гистологическую оценку интерстициального фиброза миокарда с окрашенными в красный цвет пикрозириусом и окрашенными лектином родамином срезами для изучения гипертрофии миоцитов по площади поперечного сечения (MCSA), а также количественная оценка размера инфаркта и ремоделирования сердца (истончение рубца, толщина перегородки и индекс расширения) с помощью планиметриметрии в срезах, окрашенных трихромом Массона и трифенилтетразолием хлоридом. Гал-3 У мышей с КО с ИМ наблюдалось нарушение ремоделирования сердца и увеличение коэффициента истончения рубцов и индекса расширения. В начале ИМ функция миокарда и ремоделирование сердца также были серьезно нарушены. Через 4 недели после ИМ также была нарушена естественная эволюция фиброза у инфарктированных мышей Gal-3 KO.
Таким образом, экспериментальная модель ИМ является подходящей моделью для изучения временной эволюции восстановления и ремоделирования сердца у мышей с генетической делецией Gal-3 и других животных моделей. Недостаток Gal-3 влияет на динамику восстановления сердца и нарушает развитие ремоделирования и функции сердца после ИМ.
Инфаркт миокарда (ИМ) является наиболее распространенной формой сердечно-сосудистых заболеваний. После ИМ миокард претерпевает последовательные морфологические и функциональные изменения, включая заживление зоны инфаркта ИМ, ремоделирование желудочков (ВР) и дисфункцию миокарда1. Заживление ИМ является динамичным и хорошо организованным процессом, связанным с глубокой воспалительной инфильтрацией, которая заканчивается образованием фиброзного рубца 2,3. Экспериментальная модель ИМ у мышей в настоящее время используется для изучения ремоделирования сердца при патологических состояниях4,5, и осведомленность о точном хирургическом протоколе имеет важное значение для разработки воспроизводимой и эффективной процедуры индуцирования постоянной коронарной лигатуры. Этот метод необходим для изучения заживления ИМ и его значимости во временной эволюции ремоделирования левого желудочка (ЛЖР) и сердечной дисфункции, связанной с ИМ.
Галектины — это группа лектинов, которые распознают специфические углеводы во внутриклеточных лигандах, мембранных рецепторах и внеклеточных гликопротеинах. Галектин 3 (Gal-3) является членом этого семейства, который действует посредством распознавания и сшивания N- и O-гликанов в гликоконъюгатах на поверхности клеток, и широко экспрессируется в иммунной системе6. В предыдущих исследованиях изучалась роль Gal-3 в качестве регулятора воспаления и фиброза при сердечно-сосудистых заболеваниях 7,8,9,10,11,12. Поскольку нацеливание на регуляторные факторы воспаления во время заживления очень актуально, поскольку воспаление может заметно влиять на эволюцию ремоделирования, мы стремились описать протокол изучения временной эволюции ремоделирования желудочков после ИМ, а также шаги и методы для определения того, как генетическая мутация Gal-3 изменяет временную эволюцию заживления при ИМ и влияет на ремоделирование и функцию сердца у мышей.
ПРИМЕЧАНИЕ: Все эксперименты, описанные в этом протоколе, были одобрены Комитетом по уходу за животными и исследованиям Университета Буэнос-Айреса (CICUAL) в соответствии с Комитетом Национального исследовательского совета (США) по обновлению Руководства по уходу за лабораторными животными и их использованию13. Для экспериментов использовали самцов мышей C57BL/6J и Gal-3 KO соответствующего возраста (8-10 недель) весом 30-35 г, что позволяет лучше проводить хирургические манипуляции. Предоставляйте животным доступ к воде и пище в неограниченном количестве. Мышей Gal-3 KO разводили на фоне C57BL/6J на тех же биоресурсных объектах, что и контрольных мышей C57BL/6J.
1. Операционная область и инструменты
2. Анестезия и интубация
3. Дизайн исследования
4. Эхокардиография
ПРИМЕЧАНИЕ: Для эхокардиограммы мышей необходимо использовать линейные датчики с частотой более 10 МГц для правильной визуализации диаметров стенок и размеров полости. Эта процедура может быть выполнена под наркозом с внутрибрюшинным (IP) авертином в дозе 1,15 мл/кг или у животных в сознании. Тем не менее, последнее может привести к искажающим результатам у мышей с инфарктами миокарда из-за стресса и беспокойства, вызванных манипуляциями.
5. Гистологическое обследование
6. Количественное определение размеров инфаркта и планиметрия для оценки ремоделирования сердца
Выживаемость и вскрытие после ИМ
В течение 4 недель наблюдения 17% (4/23) мышей C57 против 40% (8/20) мышей Gal-3 KO были найдены мертвыми. Было проведено вскрытие; у мертвых мышей Gal-3 KO сердце было больше, чем у мышей C57 (рис. 1), а у 38% мышей C57 по срав?...
Экспериментальная модель ИМ с помощью постоянной лигатуры коронарных артерий используется для изучения широкого спектра патофизиологических механизмов восстановления и ремоделирования сердца 5,14,17. В этой статье о...
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.
Авторы с благодарностью оценивают техническую помощь Аны Кьяро. Эта работа была поддержана грантами Аргентинского агентства по содействию науке и технологиям (PICT 2014-2320, 2019-02987 и PICT 2018-03267 to VM) и Университета Буэнос-Айреса (UBACyT 2018- 382 20020170100619BA to GEG).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
8-0 silk suture | Ethicon | ||
C57BL/6J mice | Department of Bioresources of the Faculty of Veterinary of the University of Buenos Aires, Argentina | ||
Forceps | |||
Hardvard 386 respirator | Hardvard company | ||
Heating pad | maintain animal's temperature during surgery | ||
Image Pro-Plus 6.0 | Media Cybernetics | Image Analysis Software | |
Ketamine | Holiday | ||
Masson Trichrome | BIOPUR | ||
Picrosirius red | BIOPUR | ||
Retractors | |||
Rodent Ventilator Model 683 | Harvard Apparatus | Mechanical ventilator | |
Scissors | |||
Stereoscopic magnifying glass | Arcano | ||
Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Norway) | General Electric | Any tracking software can be utilized with this protocol | |
WGA no. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame | Vector Laboratories | ||
Xylazine | Pro-Ser |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены