Эксплантация мембраны с круглым окном морской свинки для исследований ex vivo

Резюме

В этом протоколе описывается метод эксплантации мембраны круглого окна из височных костей морских свинок, что является ценным ресурсом для исследований ex vivo .

Аннотация

Эффективная и минимально инвазивная доставка лекарств во внутреннее ухо представляет собой серьезную проблему. Мембрана круглого окна (RWM), являющаяся одной из немногих точек входа во внутреннее ухо, стала жизненно важным объектом исследований. Однако из-за сложностей выделения RWM наше понимание его фармакокинетики остается ограниченным. RWM состоит из трех отдельных слоев: наружного эпителия, среднего слоя соединительной ткани и внутреннего эпителиального слоя, каждый из которых потенциально обладает уникальными свойствами доставки.

Современные модели для исследования переноса через RWM используют модели животных in vivo или модели ex vivo RWM, которые полагаются на клеточные культуры или фрагменты мембран. Морские свинки служат валидированной доклинической моделью для исследования фармакокинетики лекарств во внутреннем ухе и являются важной животной моделью для трансляционной разработки средств доставки в улитку. В этом исследовании мы описываем подход к эксплантации RWM морской свинки с окружающей кохлеарной костью для экспериментов по настольной доставке лекарств. Этот метод позволяет сохранить исходную архитектуру RWM и может обеспечить более реалистичное представление транспортных барьеров по сравнению с текущими настольными моделями.

Введение

Появились новые классы терапевтических средств для лечения нейросенсорной тугоухости. Трансляция этих терапевтических препаратов в клинические популяции ограничена безопасными и эффективными путями транспортировки во внутреннее ухо. Современные методы доставки in vivo в исследованиях на животных основаны либо на фенестрации во внутреннем ухе, либо на диффузии через мембрану круглого окна (RWM), бескостный барьер, который отделяет пространство среднего уха от улитки¹.

Хирургическая фенестрация и микроинъекция во внутреннее ухо являются инвазивными и могут представлять опасность для остаточной функции внутренн....

протокол

Все процедуры для животных были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию (GP18M226). В настоящем исследовании использовались морские свинки-альбиносы Хартли (как самцы, так и самки, массой 500-700 г).

1. Настройка и подготовка процедуры

1. Перед началом эксперимента простерилизуйте все инструменты окисью этилена.
2. Усыпляйте животных в соответствии с утвержденным в учреждении протоколом.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В текущем исследовании для высвобождения 100% углекислого газа (CO₂) из коммерческого баллона использовалась камера без предварительного заряда. Для регулирования потока газа испол....

Результаты

Как показано на рисунке 3А, этот метод позволяет эксплантировать неповрежденную круглую оконную мембрану морской свинки с окружающим кольцом из жесткой кости. RWM должен быть полностью соединен с костным кольцом по окружности. Переломы кохлеарной кости не должны быть оц.......

Обсуждение

При локальной доставке лекарств в ухо RWM является основным путем прохождения терапевтических препаратов во внутреннее ухо. Для лучшего понимания механизмов транспортировки и проницаемости новых средств доставки и разработки лекарств необходима точная и надежная настольная модель. В.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	1SD-G1
2 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	2SD-G1
6 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	6D-G1
ANSPACH EMAX 2 Plus System	Anspach	EMAX2PLUS	Any bone cutting drilling system will work
BD Eclipse Needle 27 G x 1/2 in. with detachable 1 mL BD Luer-Lok Syringe	Becton, Dickinson, and Co.	382903057894	Any 27-28 G needle
Gorilla Epoxy	Gorilla	4200101
Kwik-CAST	World Precision Instruments	KWIK-CAST