Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот метод моделирует хирургию катаракты in vivo путем удаления волокон хрусталика у взрослых мышей и оставления капсульного мешка с прикрепленными эпителиальными клетками хрусталика (LEC). Затем реакция на травму оценивается в разное время после операции с использованием молекулярных и морфологических критериев.

Аннотация

Хирургия катаракты (КС) является эффективным методом лечения катаракты, которая является основной причиной инвалидности по зрению во всем мире. Тем не менее, ХС приводит к воспалению глаз и в долгосрочной перспективе может привести к заднему капсулярному помутнению (СПКЯ) и/или вывиху хрусталика, вызванному послеоперационным чрезмерным разрастанием эпителиальных клеток хрусталика (ЛЭК) и их превращением в миофибробласты и/или аберрантные волоконные клетки. Тем не менее, молекулярные механизмы, с помощью которых КС приводит к воспалению и ПЦО, до сих пор неясны, потому что большинство моделей in vitro не повторяют реакцию заживления ран LEC, наблюдаемую in vivo, в то время как традиционные животные модели хирургии катаракты, такие как кролики, не позволяют генетически манипулировать экспрессией генов для тестирования механизмов. Недавно наша лаборатория и другие успешно использовали генетически модифицированных мышей для изучения молекулярных механизмов, которые управляют индукцией провоспалительной сигнализации и переходом эпителия LEC в мезенхимальный, что привело к новому пониманию патогенеза ПЦЯ. В данной работе мы сообщаем об установленном протоколе моделирования хирургии катаракты у мышей, который позволяет проводить надежное транскрипционное профилирование ответа LEC на удаление клеток волокна хрусталика с помощью RNAseq, оценивать экспрессию белков с помощью полуколичественной иммунофлуоресценции и использовать современные инструменты генетики мышей для проверки функции генов, которые, как предполагается, участвуют в патогенезе острых осложнений, таких как воспаление, а также последующее преобразование LEC в миофибробласты и/или аберрантные клетки хрусталика.

Введение

Хрусталик представляет собой высокоорганизованную прозрачную ткань, которая преломляет свет для получения четко сфокусированного изображения на сетчатке глаза 1,2,3. Этот специализированный орган окружен непрерывной базальной мембраной (капсулой), которая изолирует хрусталик от других частей глаза. Внутренняя передняя поверхность капсулы закрепляет монослой эпителиальных клеток хрусталика (LECs), которые затем дифференцируются на экваторе хрусталика в клетки хрусталика, которые составляют подавляющеебольшинство хрустал....

протокол

Следующий протокол был одобрен Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Университета штата Делавэр в соответствии с протоколом #1039-2021-1. В соответствии с Ассоциацией исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO) по использованию животных в офтальмологии и исследованиях зрения24, все операции по выживанию в глазах могут быть выполнены только на одном глазу. Подробную информацию о реагентах и инструментах, используемых в этом протоколе, см. в Таблице материалов . Альтернативные подходы к извлечению волокон хрусталика и наложению швов показаны на

Результаты

Основываясь на результатах этого хирургического метода, лаборатория Дункана использовала эту мышиную модель хирургии катаракты для построения временного курса реакции на травму эпителиальных клеток хрусталика после операции (Рисунок 5). Через 6 ч по?.......

Обсуждение

Эта хирургическая техника требует продвинутого обращения с мышами и микрохирургических навыков, для развития которых требуется практика. Самым сложным для освоения является наложение тонких швов в роговицу для закрытия раны. Предположим, что экспериментатор являет.......

Раскрытие информации

Лаборатория Дункана получила финансовую поддержку от Pliantx для тестирования анти-PCO терапии с использованием этой хирургической модели.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным институтом глаза (EY015279 и EY028597) и Delaware INBRE (P20 GM103446).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USPBaush Lomb24208-910-55
1% Atropine sulfate ophthalmic solutionAmneal60219-1748-2
1% Tropicamide opthalmic solution USPAkorn17478-102-12
10-0 Nylon sutureEthicon7707G
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USPAkorn17478-200-12
26 G 1/2 Needles - straightBD PrecisionGlide5111
27 G 45° bent dispensing tip 1"Harfington
Balanced saline solutionPhoenix57319-555-06
Bupranorphine (0.1 mg/kg)APP Pharmaceticals401730D
Chlorhexidine solution
Needle holder 2-110Duckworth & Kent2-110-3E
Noyes scissors, straightFine Science Tools12060-02
SMZ800 Nikon model microscopeNikon
Sterile disposable scalpel No.11Feather2975#11
Tweezers #5 DumontElectron Microscopy Sciences72700-D
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solutionAPP Pharmaceticals401730D

Ссылки

  1. Wormstone, I. M., Wormstone, Y. M., Smith, A. J. O., Eldred, J. A. Posterior capsule opacification: What's in the bag. Prog Retin Eye Res. 82, 100905 (2021).
  2. Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. Biological glass: structural determinan....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены