Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Этот метод моделирует хирургию катаракты in vivo путем удаления волокон хрусталика у взрослых мышей и оставления капсульного мешка с прикрепленными эпителиальными клетками хрусталика (LEC). Затем реакция на травму оценивается в разное время после операции с использованием молекулярных и морфологических критериев.
Хирургия катаракты (КС) является эффективным методом лечения катаракты, которая является основной причиной инвалидности по зрению во всем мире. Тем не менее, ХС приводит к воспалению глаз и в долгосрочной перспективе может привести к заднему капсулярному помутнению (СПКЯ) и/или вывиху хрусталика, вызванному послеоперационным чрезмерным разрастанием эпителиальных клеток хрусталика (ЛЭК) и их превращением в миофибробласты и/или аберрантные волоконные клетки. Тем не менее, молекулярные механизмы, с помощью которых КС приводит к воспалению и ПЦО, до сих пор неясны, потому что большинство моделей in vitro не повторяют реакцию заживления ран LEC, наблюдаемую in vivo, в то время как традиционные животные модели хирургии катаракты, такие как кролики, не позволяют генетически манипулировать экспрессией генов для тестирования механизмов. Недавно наша лаборатория и другие успешно использовали генетически модифицированных мышей для изучения молекулярных механизмов, которые управляют индукцией провоспалительной сигнализации и переходом эпителия LEC в мезенхимальный, что привело к новому пониманию патогенеза ПЦЯ. В данной работе мы сообщаем об установленном протоколе моделирования хирургии катаракты у мышей, который позволяет проводить надежное транскрипционное профилирование ответа LEC на удаление клеток волокна хрусталика с помощью RNAseq, оценивать экспрессию белков с помощью полуколичественной иммунофлуоресценции и использовать современные инструменты генетики мышей для проверки функции генов, которые, как предполагается, участвуют в патогенезе острых осложнений, таких как воспаление, а также последующее преобразование LEC в миофибробласты и/или аберрантные клетки хрусталика.
Хрусталик представляет собой высокоорганизованную прозрачную ткань, которая преломляет свет для получения четко сфокусированного изображения на сетчатке глаза 1,2,3. Этот специализированный орган окружен непрерывной базальной мембраной (капсулой), которая изолирует хрусталик от других частей глаза. Внутренняя передняя поверхность капсулы закрепляет монослой эпителиальных клеток хрусталика (LECs), которые затем дифференцируются на экваторе хрусталика в клетки хрусталика, которые составляют подавляющеебольшинство хрустал....
Следующий протокол был одобрен Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Университета штата Делавэр в соответствии с протоколом #1039-2021-1. В соответствии с Ассоциацией исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO) по использованию животных в офтальмологии и исследованиях зрения24, все операции по выживанию в глазах могут быть выполнены только на одном глазу. Подробную информацию о реагентах и инструментах, используемых в этом протоколе, см. в Таблице материалов . Альтернативные подходы к извлечению волокон хрусталика и наложению швов показаны на
Основываясь на результатах этого хирургического метода, лаборатория Дункана использовала эту мышиную модель хирургии катаракты для построения временного курса реакции на травму эпителиальных клеток хрусталика после операции (Рисунок 5). Через 6 ч по?.......
Эта хирургическая техника требует продвинутого обращения с мышами и микрохирургических навыков, для развития которых требуется практика. Самым сложным для освоения является наложение тонких швов в роговицу для закрытия раны. Предположим, что экспериментатор являет.......
Лаборатория Дункана получила финансовую поддержку от Pliantx для тестирования анти-PCO терапии с использованием этой хирургической модели.
Эта работа была поддержана Национальным институтом глаза (EY015279 и EY028597) и Delaware INBRE (P20 GM103446).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USP | Baush Lomb | 24208-910-55 | |
1% Atropine sulfate ophthalmic solution | Amneal | 60219-1748-2 | |
1% Tropicamide opthalmic solution USP | Akorn | 17478-102-12 | |
10-0 Nylon suture | Ethicon | 7707G | |
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USP | Akorn | 17478-200-12 | |
26 G 1/2 Needles - straight | BD PrecisionGlide | 5111 | |
27 G 45° bent dispensing tip 1" | Harfington | ||
Balanced saline solution | Phoenix | 57319-555-06 | |
Bupranorphine (0.1 mg/kg) | APP Pharmaceticals | 401730D | |
Chlorhexidine solution | |||
Needle holder 2-110 | Duckworth & Kent | 2-110-3E | |
Noyes scissors, straight | Fine Science Tools | 12060-02 | |
SMZ800 Nikon model microscope | Nikon | ||
Sterile disposable scalpel No.11 | Feather | 2975#11 | |
Tweezers #5 Dumont | Electron Microscopy Sciences | 72700-D | |
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solution | APP Pharmaceticals | 401730D |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены