Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В данной статье мы представляем протокол применения наносекундного импульсного электрического поля (nsPEF) для стимуляции шванновских клеток in vitro. Способность к синтезу и секреции соответствующих факторов и изменения в поведении клеток подтвердили успешную стимуляцию с использованием nsPEF. Исследование дает положительное представление о методе регенерации периферических нервов.

Аннотация

Шванновские клетки (СК) являются миелинизирующими клетками периферической нервной системы, играющими решающую роль в регенерации периферических нервов. Наносекундное импульсное электрическое поле (nsPEF) — это новый метод, применимый в электростимуляции нервов, который продемонстрировал свою эффективность в стимулировании пролиферации клеток и других биологических процессов. С целью оценки того, претерпевают ли СК значимые изменения при нПЭФ и помогают изучить потенциал новых методов регенерации периферических нервов, культивируемые клетки RSC96 подвергали стимуляции нПЭФ при 5 кВ и 10 кВ с последующим продолжением культивирования в течение 3-4 дней. Впоследствии были оценены некоторые релевантные факторы, экспрессируемые СК, чтобы продемонстрировать успешную стимуляцию, включая специфический маркерный белок, нейротрофический фактор, фактор транскрипции и регулятор миелинизации. Репрезентативные результаты показали, что nsPEF значительно усиливает пролиферацию и миграцию СК и способность синтезировать соответствующие факторы, которые положительно влияют на регенерацию периферических нервов. В то же время, более низкая экспрессия GFAP указывала на благоприятный прогноз повреждения периферических нервов. Все эти результаты показывают, что нПСЭФ обладает большим потенциалом в качестве эффективного метода лечения повреждений периферических нервов путем стимуляции СК.

Введение

Каждый год миллионы людей страдают от повреждения нервов, затрагивающих как периферическую нервную систему (ПНС), так и центральную нервную систему (ЦНС)1. Исследования показали, что аксональная восстановительная способность ЦНС после повреждения нерва достаточно ограничена, в то время как ПНС демонстрирует повышенную способность благодаря значительной пластичности СК2. Тем не менее, достижение полной регенерации после травм периферических нервов остается трудной задачей и продолжает представлять серьезную проблему для здоровья человека 3,4. В настоящее время аут....

протокол

1. Размораживание криоконсервированных клеток RSC96

  1. Разморозьте криовиал, содержащий 1 мл клеточной суспензии, быстро встряхнув его на водяной бане при температуре 37 °С, а затем добавьте его в центрифужную пробирку, содержащую 4-6 мл готовой питательной среды, и хорошо перемешайте.
  2. Центрифугируйте при 1000 x g в течение 3-5 минут, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в 3 мл готовой питательной среды.
  3. Клеточную суспензию добавить в культуральную колбу (или чашку), содержащую 6-8 мл полной питательной среды, и инкубировать при 37 °С в течение ночи.
  4. На следующий день понаблюдайт....

Результаты

Импульсные электрические поля низкой интенсивности стимулируют пролиферацию клеток
По данным анализа CCK-8, скорость пролиферации RSC96 в группе 5 кВ/см была значительно выше, чем в клетках контрольной группы. Однако по мере увеличения параметров (20 кВ/см и 40 кВ/см) скорость проли?.......

Обсуждение

Согласно сообщениям, в последние годы наблюдается быстрый рост применения nsPEF. nsPEF оказывает высоконаправленное воздействие только на желаемую область, обеспечивая достаточное количество энергии для лечения, не вызывая дополнительных термических повреждений, что делает его более без.......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа финансировалась в рамках Национального проекта по разработке ключевых научных приборов и оборудования (NO.82027803).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Antifade mounting mediumWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1401
Anti-GFAP Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12100-100
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB14146-100
BSAWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGC305010
CoverslipJiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD10212432C
CY3-labeled goat anti-mouse IgGWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB21302
DAPI Staining ReagentWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1012
Decolorizing shakerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDDS-2S100
High Voltage Power Supply for nsPEFMatsusada Precision Inc.AU-60P1.6-L
Histochemical penWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6100
Membrane breaking liquidWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1204
Microscope slideWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6012
Palm centrifugeWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMS6000
PBS powderedWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG0002
PipetteWuhan Xavier Biotechnology Co., LTD
Positive fluorescence microscopeNikon, JapanNIKON ECLIPSE C1
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibodyBeijing Bioss Biotechnology Co., LTDBS-20563R-AF488
RSC96 Schwann cellsWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDSTCC30007G-1
scanister3DHISTECHPannoramic MIDI
Special cable for nsPEFTimes Microwave SystemsM17/78-RG217
Turbine mixerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMV-100

Ссылки

  1. Jing, W., et al. Study of electrical stimulation with different electric-field intensities in the regulation of the differentiation of PC12 cells. ACS Chem Neurosci. 10 (1), 348-357 (2018).
  2. Nocera, G., Jacob, C.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

NsPEFGFAP

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены