Мониторинг уровня глюкозы в крови у потомства мышей после интрацитоплазматической инъекции сперматозоида

Резюме

В данной работе мы представляем протокол для создания мышиной модели интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) и переноса эмбрионов (ЭТ), что позволяет нам наблюдать возрастные изменения в метаболизме глюкозы, которые могут быть связаны с ИКСИ, что дает представление о его потенциальном долгосрочном влиянии на развитие человека.

Аннотация

Продолжительность человеческой жизни значительно длинна, в то время как мышиные модели могут моделировать всю продолжительность человеческой жизни за относительно короткий период, при этом один год жизни мыши примерно эквивалентен 40 человеческим годам. Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ) является широко используемой вспомогательной репродуктивной технологией в клинической практике. Однако, учитывая его относительно недавнее появление около 30 лет назад, долгосрочное влияние этого метода на развитие человечества остается неясным. В этом исследовании мы разработали метод ИКСИ в сочетании с переносом эмбрионов (ЭТ) с использованием мышиной модели. Результаты показали, что нормальная сперматозоиды мышей после культивирования in vitro и последующего ИКСИ продемонстрировала уровень оплодотворения 89,57% и двухклеточный уровень 87,38%. После ET рождаемость потомства составляла примерно 42,50%. Кроме того, по мере старения мышей наблюдались колебания уровня метаболизма глюкозы, что может быть связано с применением техники ИКСИ. Эти результаты означают, что метод ИКСИ-ЭТ у мышей обеспечивает ценную платформу для оценки влияния аномалий сперматозоидов на развитие эмбриона и их долгосрочного воздействия на здоровье потомства, особенно в отношении метаболизма глюкозы. Это исследование дает важную информацию для дальнейших исследований потенциального влияния метода ИКСИ на развитие человека, подчеркивая необходимость глубокого изучения долгосрочных последствий этой технологии.

Введение

Вопросы рождаемости стали одним из основных вопросов медицины и социологии, особенно в современном обществе, где снижение коэффициента рождаемости и растущая серьезность распространенности и тяжести бесплодия приобрели видное значение. Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) предоставляют широкий спектр возможностей для решения этих проблем, при этом интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ) обычно используется в качестве терапевтического вмешательства.

С тех пор, как в 1992 году в Палермо была достигнута первая успешная беременность с помощью интрацитоплазматическо....

протокол

Протокол ИКСИ-ЭТ, описанный ниже, соответствует руководящим принципам и был одобрен Этическим обзором животных Шанхайского института планирования семьи. Процедуры безопасности: Всегда надевайте соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ) при работе с химическими или биологическими материалами. Использование вытяжных шкафов: Выполняйте все процедуры, связанные с летучими химическими веществами или образованием аэрозоля, в сертифицированном вытяжном шкафу или шкафу биобезопасности. Для процедуры суперовуляции используйте самок мышей (6-8-недельный штамм B6D2F1).

1. ИКСИ у мышей

Результаты

В нашей лаборатории мы достигли уровня оплодотворения 89,57% и коэффициента оплодотворения 2 клеток 87,38% с использованием ИКСИ с каудальным сперматозоидом придатка яичка у мышей. Рождаемость потомства после ЭТ составляет примерно 42,50%. Примечательно, что все показатели ?.......

Обсуждение

В этом исследовании были интегрированы методы интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) и переноса эмбрионов (ЭТ) мышей, чтобы всесторонне обобщить вспомогательные репродуктивные технологии человека (ВРТ) и изучить влияние ИКСИ в сочетании с ЭТ на разви?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development