Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В данной работе мы представляем протокол для создания мышиной модели интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) и переноса эмбрионов (ЭТ), что позволяет нам наблюдать возрастные изменения в метаболизме глюкозы, которые могут быть связаны с ИКСИ, что дает представление о его потенциальном долгосрочном влиянии на развитие человека.

Аннотация

Продолжительность человеческой жизни значительно длинна, в то время как мышиные модели могут моделировать всю продолжительность человеческой жизни за относительно короткий период, при этом один год жизни мыши примерно эквивалентен 40 человеческим годам. Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ) является широко используемой вспомогательной репродуктивной технологией в клинической практике. Однако, учитывая его относительно недавнее появление около 30 лет назад, долгосрочное влияние этого метода на развитие человечества остается неясным. В этом исследовании мы разработали метод ИКСИ в сочетании с переносом эмбрионов (ЭТ) с использованием мышиной модели. Результаты показали, что нормальная сперматозоиды мышей после культивирования in vitro и последующего ИКСИ продемонстрировала уровень оплодотворения 89,57% и двухклеточный уровень 87,38%. После ET рождаемость потомства составляла примерно 42,50%. Кроме того, по мере старения мышей наблюдались колебания уровня метаболизма глюкозы, что может быть связано с применением техники ИКСИ. Эти результаты означают, что метод ИКСИ-ЭТ у мышей обеспечивает ценную платформу для оценки влияния аномалий сперматозоидов на развитие эмбриона и их долгосрочного воздействия на здоровье потомства, особенно в отношении метаболизма глюкозы. Это исследование дает важную информацию для дальнейших исследований потенциального влияния метода ИКСИ на развитие человека, подчеркивая необходимость глубокого изучения долгосрочных последствий этой технологии.

Введение

Вопросы рождаемости стали одним из основных вопросов медицины и социологии, особенно в современном обществе, где снижение коэффициента рождаемости и растущая серьезность распространенности и тяжести бесплодия приобрели видное значение. Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) предоставляют широкий спектр возможностей для решения этих проблем, при этом интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ) обычно используется в качестве терапевтического вмешательства.

С тех пор, как в 1992 году в Палермо была достигнута первая успешная беременность с помощью интрацитоплазматическо....

протокол

Протокол ИКСИ-ЭТ, описанный ниже, соответствует руководящим принципам и был одобрен Этическим обзором животных Шанхайского института планирования семьи. Процедуры безопасности: Всегда надевайте соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ) при работе с химическими или биологическими материалами. Использование вытяжных шкафов: Выполняйте все процедуры, связанные с летучими химическими веществами или образованием аэрозоля, в сертифицированном вытяжном шкафу или шкафу биобезопасности. Для процедуры суперовуляции используйте самок мышей (6-8-недельный штамм B6D2F1).

1. ИКСИ у мышей

Результаты

В нашей лаборатории мы достигли уровня оплодотворения 89,57% и коэффициента оплодотворения 2 клеток 87,38% с использованием ИКСИ с каудальным сперматозоидом придатка яичка у мышей. Рождаемость потомства после ЭТ составляет примерно 42,50%. Примечательно, что все показатели ?.......

Обсуждение

В этом исследовании были интегрированы методы интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) и переноса эмбрионов (ЭТ) мышей, чтобы всесторонне обобщить вспомогательные репродуктивные технологии человека (ВРТ) и изучить влияние ИКСИ в сочетании с ЭТ на разви?.......

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Эта работа была поддержана Планом крупных проектов Специального фонда развития для Шанхайской национальной независимой инновационной демонстрационной зоны Чжанцзян (ZJ2022-ZD-006), Проектом целевого финансирования Шанхайской муниципальной комиссии по науке и технологиям (22DX1900400), Молодежной программой Шанхайской муниципальной комиссии по здравоохранению (20204Y0276). Национальный фонд естественных наук Китая (32070849).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)Nanjing AibeiM2960for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterileBD353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterileBD351006
Biosafety CabinetESCOclass figure-materials-658 BSCAseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 IncubatorThermo8000DHEmbryo culture
Dissection MicroscopeOlympusSZX16Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770SIGMAF3556Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometerRocheAccuChek performaBlood glucose measurement
HTFMerckMR-070-DThe EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic MicroinjectorEppendorfCellTram 4r Oil, 5196000030For sperm injection
Inverted MicroscopeNikonTI2-UMicromanipulation observation host
KSOMMerckMR-020P-D(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2MerckMR-015-DEmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
MicromanipulatorNARISHIGENTX-N4Micromanipulation arm
mineral oil SIGMAM8410Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle CutterNanjing AibeiSutter MF-800Use for fabricating micromanipulation needles
Needle PullerNanjing AibeiSutter model p-100Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSIEppendorf5195000.087Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)EppendorfEppendorf PiezoXpertUse of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic MicroinjectorEppendorfCellTram 4r Air, 5196000013For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)Nanjing AibeiM2520Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)Nanjing AibeiM2620Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
StereomicroscopeOlympusSZX7Oocyte retrieval and observation of embryo development

Ссылки

  1. Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte. Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).
  2. Flurkey, K. M., Currer, J., Harrison, D. E., Fox, J. G., et al.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены