Последовательный забор крови из нижней полой вены с последующим вскрытием воротной вены для оценки микробных метаболитов кишечника у мышей

Резюме

В протоколе продемонстрирован метод последовательного сбора крови из воротных вен и нижней полой вены у мышей для оценки производства и абсорбции микробных метаболитов кишечника.

Аннотация

Известно, что продукты кишечной микрофлоры действуют как локально в кишечнике, так и всасываются в кровоток, где их воздействие может распространяться на многочисленные отдаленные системы органов. Короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК) являются одним из классов метаболитов, вырабатываемых кишечными микробами во время ферментации неперевариваемых пищевых волокон. В настоящее время они признаны важными участниками того, как кишечный микробиом влияет на системы внекишечных органов через кишечник-легкие, кишечник-мозг и другие оси кишечник-орган по всему организму хозяина. КЦЖК всасываются из толстой кишки через кишечную ткань в воротную вену (ПВ). Затем они проходят через печень и потребляются в различных органах, таких как мозг, мышцы, жировая ткань и легкие. КЦЖК легче всего измеряются в выброшенном материале кала, однако более точные измерения были получены из внутрикишечного содержимого кала. В данной работе мы предполагаем, что отбор проб ПВ и системной циркулирующей плазмы одного субъекта может быть предпочтительным для изучения абсорбции, транспорта и системных уровней КЦЖК у мышей. Мы представляем новую методику эффективного забора крови из ЛВ и нижней полой вены (НПВ), которая позволяет собирать относительно большие объемы крови из портального и системного кровотока. Это достигается путем лигирования ФВ, что позволяет расширить или увеличить ФВ, поскольку она заполняется брыжеечными венами, которые впадают в нее. Используя этот метод, мы смогли улучшить скорость успешного сбора, а также общее количество собранной крови (до 0,3 мл из IVC и 0,5 мл из PV).

Введение

Короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК) являются основным классом метаболитов, вырабатываемых микробиотой кишечника. Их важнейшая роль во взаимодействии между микробиомом кишечника и другими отдаленными органами^была подтверждена исследованиями, описывающими, как они модулируют воспаление, сигнализируют через специальные рецепторы и служат субстратами в клеточном метаболизме ^2,3,4,5. Недавняя работа нашей группы показала, что КЦЖК являются ключевыми in vivo воспалительными рег....

протокол

Все шаги в этой процедуре, не связанной с выживанием, были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) при Калифорнийском университете в Сан-Франциско. В качестве мышей использовался пол и штамм мышей C57BL/6J мужского пола (массой тела 25-35 г и возрастом 12-15 недель). Также можно использовать самки и/или другие стандартные линии мышей.

1. Анестезия

1. Протрите нижнюю половину брюшка мыши тампонами с 70% этанолом. Введение анестезии путем внутрибрюшинной инъекции трибромэтанола (250-400 мг/кг). Также может быть использована кетамин/ксилази....

Результаты

Используя описанный выше метод, мы можем последовательно собирать образцы крови из НПВ и ПВ у одной и той же мыши с вероятностью успеха более 95%. Средний объем собранных образцов крови составляет 0,25 мл для НПВ и 0,35 мл для ПВ.

С помощью газовой хромато-масс.......

Обсуждение

В данной статье описан инновационный метод in vivo для почти одновременного последовательного сбора образцов крови из НПВ и ПВ на одной и той же экспериментальной мыши. Этот метод полезен для измерения уровней продуктов, генерируемых кишечной микробиотой, таких ка?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection