Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
В протоколе продемонстрирован метод последовательного сбора крови из воротных вен и нижней полой вены у мышей для оценки производства и абсорбции микробных метаболитов кишечника.
Известно, что продукты кишечной микрофлоры действуют как локально в кишечнике, так и всасываются в кровоток, где их воздействие может распространяться на многочисленные отдаленные системы органов. Короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК) являются одним из классов метаболитов, вырабатываемых кишечными микробами во время ферментации неперевариваемых пищевых волокон. В настоящее время они признаны важными участниками того, как кишечный микробиом влияет на системы внекишечных органов через кишечник-легкие, кишечник-мозг и другие оси кишечник-орган по всему организму хозяина. КЦЖК всасываются из толстой кишки через кишечную ткань в воротную вену (ПВ). Затем они проходят через печень и потребляются в различных органах, таких как мозг, мышцы, жировая ткань и легкие. КЦЖК легче всего измеряются в выброшенном материале кала, однако более точные измерения были получены из внутрикишечного содержимого кала. В данной работе мы предполагаем, что отбор проб ПВ и системной циркулирующей плазмы одного субъекта может быть предпочтительным для изучения абсорбции, транспорта и системных уровней КЦЖК у мышей. Мы представляем новую методику эффективного забора крови из ЛВ и нижней полой вены (НПВ), которая позволяет собирать относительно большие объемы крови из портального и системного кровотока. Это достигается путем лигирования ФВ, что позволяет расширить или увеличить ФВ, поскольку она заполняется брыжеечными венами, которые впадают в нее. Используя этот метод, мы смогли улучшить скорость успешного сбора, а также общее количество собранной крови (до 0,3 мл из IVC и 0,5 мл из PV).
Короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК) являются основным классом метаболитов, вырабатываемых микробиотой кишечника. Их важнейшая роль во взаимодействии между микробиомом кишечника и другими отдаленными органамибыла подтверждена исследованиями, описывающими, как они модулируют воспаление, сигнализируют через специальные рецепторы и служат субстратами в клеточном метаболизме 2,3,4,5. Недавняя работа нашей группы показала, что КЦЖК являются ключевыми in vivo воспалительными рег....
Все шаги в этой процедуре, не связанной с выживанием, были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) при Калифорнийском университете в Сан-Франциско. В качестве мышей использовался пол и штамм мышей C57BL/6J мужского пола (массой тела 25-35 г и возрастом 12-15 недель). Также можно использовать самки и/или другие стандартные линии мышей.
1. Анестезия
Используя описанный выше метод, мы можем последовательно собирать образцы крови из НПВ и ПВ у одной и той же мыши с вероятностью успеха более 95%. Средний объем собранных образцов крови составляет 0,25 мл для НПВ и 0,35 мл для ПВ.
С помощью газовой хромато-масс.......
В данной статье описан инновационный метод in vivo для почти одновременного последовательного сбора образцов крови из НПВ и ПВ на одной и той же экспериментальной мыши. Этот метод полезен для измерения уровней продуктов, генерируемых кишечной микробиотой, таких ка?.......
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
AP финансируется за счет награды R01 от NIH/NHLBI (1R01HL146753). DM финансируется стипендией T32 от NIH и премией для стажеров/штатных пилотов от Центра медицины микробиома Бениоффа UCSF.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin) | Sigma Aldrich | T48402-25G | Anesthetic agent |
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL | PAR Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | Analgesic agent |
Dressing Forceps | Miltex | 6-100 | Dissection |
Graefe Forceps | Roboz | RS-5136 | Dissection |
Hepatin sodium 1000 USP units/mL | Hikma | NDC 0641-0391-12 | Blood sample syringes/tubes heparinization |
Prolene 7-0 | Ethicon | 8696G | Portal vein ligature |
Scissors | F.S.T | 14058-11 | Dissection |
Student Halsted-Mosquito Hemostats | F.S.T | 91308-12 | Dissection |
Surgical tape | 3M Transpore | 1527-1 | Mouse limbs fixation |
U-100 Insulin Syringe 28G1/2 | EXEL | 26027 | Blood sample collection |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены