Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
* Эти авторы внесли равный вклад
В этой статье в качестве примера берется интегразо-опосредованный трансгенез phiC31 у дрозофил и представлен оптимизированный протокол микроинъекции эмбриона, что является важным шагом для создания трансгенных мух.
Трансгенез у дрозофил является важным подходом к изучению функции генов на уровне организма. Микроинъекция эмбриона является важным этапом для создания трансгенных мух. Для микроинъекции требуются некоторые виды оборудования, в том числе микроинъектор, микроманипулятор, инвертированный микроскоп и стереомикроскоп. Плазмиды, выделенные с помощью набора для мини-подготовки плазмид, подходят для микроинъекций. Эмбрионы на стадии пребластодермы или синцитиальной бластодермы, где ядра имеют общую цитоплазму, подвергаются микроинъекции. Клеточный фильтр облегчает процесс дехорионизации эмбрионов. Оптимальное время для дехорионации и высыхания эмбрионов необходимо определить экспериментальным путем. Чтобы повысить эффективность микроинъекции эмбриона, иглы, подготовленные пуллером, должны быть скошены игольчатой машиной. В процессе шлифовки игл мы используем ножной воздушный насос с манометром, чтобы избежать капиллярного эффекта кончика иглы. Мы обычно вводим 120-140 эмбрионов для каждой плазмиды и получаем по крайней мере одну трансгенную линию примерно для 85% плазмид. В данной статье в качестве примера берется интегразо-опосредованный трансгенез phiC31 у дрозофил и представлен подробный протокол микроинъекции эмбриона для трансгенеза у дрозофилы.
Плодовая муха Drosophila melanogaster чрезвычайно поддается генетическим манипуляциям и генетическому анализу. Трансгенные плодовые мушки широко используются в биологических исследованиях. С момента своего появления в начале 1980-х годов транспозон-опосредованный P-элементами транспозон-опосредованный был незаменимдля исследований дрозофил. В некоторых сценариях другие транспозоны, такие как piggyBac и Minos, также использовались для трансгенеза у дрозофил 2. Трансгены через транспозон случайным образом встраиваются в геном дрозофилы, и уровни экспрессии трансгенов в разных геномных ло....
1. Подготовка плазмид
Кончик инъекционной иглы скошен с помощью игольчатого станка (Рисунок 1). За час можно скосить 50-60 спиц. ДНК микроинъецируется в заднюю часть эмбриона на стадии пребластодермы или синцитиальной бластодермы, где ядра имеют общую цитоплазму (рис. 2A). Задняя ?.......
Здесь мы представляем протокол микроинъекции эмбриона для трансгенеза у дрозофилы. Для phiC31-опосредованного сайт-специфического трансгенеза мы вводили 120-140 эмбрионов в каждую плазмиду и получали, по крайней мере, одну трансгенную линию примерно для 85% плазмид (дополнительная ?.......
Авторам нечего раскрывать.
Работа выполнена при поддержке Фонда научных исследований талантов высокого уровня Университета Южного Китая.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
100 μm Cell Strainer | NEST | 258367 | |
3M double-sided adhesive | 3M | 415 | |
Borosilicate glass | SUTTER | B100-75-10 | |
Diamond abrasive plate | SUTTER | 104E | |
FLAMING/BROWN Micropipette Puller | SUTTER | P-1000 | |
Foot air pump with pressure gauge | Shenfeng | SF8705D | |
Halocarbon oil 27 | Sigma | H8773 | |
Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
Inverted microscope | Nikon | ECLIPSE Ts2R | |
Microinjection pump | eppendorf | FemtoJet 4i | |
Micromanipulator | eppendorf | TransferMan 4r | |
Micropipette Beveler | SUTTER | BV-10 | |
Microscope cover glasses (18 mm x 18 mm) | CITOLAS | 10211818C | |
Microscope slides (25 mm x 75 mm) | CITOLAS | 188105W | |
Petri dish (90 mm x 15 mm) | LAIBOER | 4190152 | |
Photo-Flo 200 | Kodak | 1026269 | |
QIAprep Spin Miniprep Kit | Qiagen | 27106 | |
Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены