JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол описывает забор крови и мочи для измерения уровней прогестерона/эстрадиола и хорионического гонадотропина для определения стадии овариального цикла. Уровни гормонов используются для прогнозирования и определения сроков овуляции, а гормоны вводятся для регулирования овариального цикла и роста ооцитов.

Аннотация

Обыкновенные мартышки – это маленькие обезьяны Нового Света. Поскольку многие из их биологических механизмов схожи с человеческими, мартышки потенциально полезны для медицинских и биологических исследований в различных областях, таких как нейробиология, регенеративная медицина и развитие. Тем не менее, существует нехватка литературы, описывающей методы многих основных экспериментов и процедур. Здесь подробно описаны методы определения уровня половых гормонов (прогестерона, эстрадиола и хорионического гонадотропина) у игрунок. Измерение этих гормонов позволяет предсказать стадию овариального цикла, которая обычно составляет 26-30 дней у мартышек; Точное определение имеет важное значение для сбора ооцитов/зигот в правильный момент времени и для подготовки самок-хозяев к созданию генетически модифицированных игрунок.

Кроме того, измерение уровня половых гормонов полезно для эндокринологии, этологии, раннего развития и исследований репродуктивной биологии. В этом протоколе подробно описаны методы забора крови из бедренной вены, разделения плазмы для измерения гормонов, измерения уровня хорионического гонадотропина с помощью мочи и плазмы, сброса овариального цикла с помощью инъекций аналога простагландина F2α для укорачивания и синхронизации цикла, а также стимулирования роста фолликулов и овуляции путем инъекции фолликулостимулирующего гормона и хорионического гонадотропина. Используя эти протоколы, можно определить стадии яичникового цикла для своевременного сбора ооцитов/зигот.

Введение

Обыкновенная мартышка (Callithrix jacchus) - маленькая обезьяна Нового Света со многими характеристиками, схожими с человеческими, а продолжительность ее овариального цикла составляет 26-30 дней 1,2. Исследования раннего развития и создания генетически модифицированных игрунок требуют сбора ооцитов и зигот на определенных этапах овариального цикла. Таким образом, точное определение стадии имеет решающее значение и может быть оценено путем измерения уровня гормонов прогестерона (P4) и эстрадиола (E2) в крови. Эти гормоны способствуют росту эндометрия, который необходим для имплантации. Р4 вырабатывается из желтого тела, которое образуется в яичниках сразу после овуляции. Е2 секретируется фолликулами яичников в ответ на фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) из гипоталамус-гипофизарного комплекса в головном мозге. Уровень Е2 увеличивается по мере созревания фолликула, достигая пика перед овуляцией3. Высокий уровень Е2 вызывает импульсное высвобождение лютеинизирующего гормона (ЛГ) через гипоталамус-гипофизарный комплекс у человека; Этот всплеск ЛГ вызывает овуляцию. Однако у мартышек ген ЛГ претерпел дегенерацию в ходе эволюции, и овуляция вместо этого индуцируется высвобождением хорионического гонадотропина (ХГ), который имеет структуру, сходную с ЛГ, из гипофиза 4,5.

Овариальный цикл можно контролировать с помощью инъекций гормонов. Инъекции ФСГ у человека действуют на рецепторы ФСГ яичников и используются для стимулирования синтеза эстрогенов и роста фолликулов6. Инъекция ХГ человека (ХГЧ) в качестве заменителя ЛГ в конце фолликулярной фазы используется для стимуляции овуляции у человека7. Инъекции КГ также используются для лечения бесплодия человека, потому что КГ стимулирует желтое тело на ранних сроках беременности, что приводит к увеличению выработки P4. Инъекции простагландина F2α (PGF2α) обнуляют овариальный цикл8. У домашнего скота инъекция PGF2α используется для сокращения лютеиновой фазы и синхронизации цикла течки для управления репродуктивной функцией.

Хотя мартышки и люди имеют схожие биологические механизмы, что делает их идеальными модельными животными, существует нехватка литературы, описывающей основные методы многих часто используемых техник. Забор крови является одним из наиболее часто используемых методов 9,10,11,12. Однако у новичков иногда возникают проблемы с поиском вены. Следовательно, в этом исследовании был проведен анатомический анализ области бедренной вены. Основываясь на анатомических наблюдениях, этот протокол вводит проксимальную область бедренного треугольника в качестве легкого места для венепункции.

протокол

Все методы с участием мартышек соответствовали высоким этическим стандартам и стандартам благополучия и были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию в Национальном центре детского здоровья и развития. Животные, используемые здесь, были однокомнатными или парными (одна самка и один самец) с 12 часами света в день.

1. Забор крови из бедренной вены

  1. Приготовьте шприц объемом 1 мл (короткий тип прост в использовании) с иглой 25 G, прикрепленной лезвием вверх. Во избежание закупорки кровью гепаринизируйте шприц, набрав в шприц 200 мкл неразбавленного раствора гепарина натрия. Равномерно смажьте внутреннюю часть шприца, несколько раз потянув его вверх и вниз; Затем вытолкните раствор гепарина из шприца.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку часто необходимо перейти на новый шприц, подготовьте несколько дополнительных гепаринизированных шприцев.
  2. Подготовьте впитывающие ватные и спиртовые тампоны. Включите регулируемую лампу, чтобы осветить область, куда будет помещена игрунка для забора крови.
  3. Подготовьте удерживающее устройство (420 x 85 x 85 мм, рис. 1A), которое имеется в продаже (подробную информацию см. в таблице материалов ). Чтобы поместить мартышку в устройство, откройте удерживающую часть с помощью губчатого ремня, который фиксирует мартышки. Вставьте мартышку в удерживающее устройство лицевой стороной вверх.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мартышки обычно спокойны в удерживающих устройствах, что может свести на нет необходимость в сдерживании, акклиматизации или дрессировке.
  4. Поймать мартышку; вставить мартышку в цилиндрическую часть; и закрепите его, прижав губчатый ремень. Положите ногу, с которой будет собираться кровь, на другую (рисунок 1A). Удерживайте ноги недоминирующей рукой; Поместите средний и безымянный пальцы внутрь каждой ноги, чтобы закрепить их, и другие пальцы снаружи каждой ноги, чтобы зафиксировать их.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При ловле мартышек рекомендуется использовать перчатки для укуса. Если удерживающее устройство отсутствует, проведите забор крови под наркозом или в присутствии другого человека, удерживающего мартышку.
  5. Проверьте, видна ли бедренная вена у основания бедра. Если нет, пропальпируйте пульсирующую артерию и используйте ее в качестве ориентира, чтобы проверить, проходит ли вена внутри нее (рисунок 1B-D).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для улучшения видимости рекомендуется использовать подсветку стола и бритье волос. Видимость также можно улучшить, протерев спиртовыми тампонами. Лимфатические узлы в треугольнике часто расположены близко к вене и показывают темно-синий цвет в виде вены. Как их отличить, описано в разделе «Репрезентативные результаты».
  6. Продезинфицируйте место прокола с помощью спиртового тампона. Вставьте лезвие иглы стороной вверх под углом 15°-20°. Чтобы игла не выскользнула из кровеносного сосуда во время забора крови, стабилизируйте руку, держащую шприц, например, уперев его в другую руку.
  7. Осторожно оттяните поршень назад, чтобы оказать отрицательное давление (Рисунок 1E). Вытолкните кончик иглы вперед. После того, как кровь попадет в шприц, сохраняйте положение кончика иглы до тех пор, пока не будет собран необходимый объем (500-700 мкл).
    1. Когда кровь не поступает в шприц, смените место прокола. Если при вытаскивании иглы вышла кровь, остановите кровотечение, придавив к месту прокола на 3 мин. После остановки кровотечения возобновите венепункцию.
    2. Если кровь, втягиваемая в шприц, перестает течь во время процесса забора, медленно толкните кончик иглы вперед, а затем потяните его назад, чтобы найти кровеносный сосуд. Это может восстановить приток крови в шприц. Если нет, вытащите иглу и проведите венепункцию с помощью нового шприца.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте бедро на другой ноге, когда трудно собрать кровь с той же стороны.
  8. Осторожно вытащите иглу, слегка надавливая на место прокола с помощью мизинца. Затем с помощью впитывающей ватной палочки немедленно надавите на место прокола на 3 минуты, чтобы остановить кровотечение. Переверните шприц, чтобы смешать кровь и гепарин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Приложите давление в течение более длительного времени (5 минут) при охлаждении при заборе артериальной крови и тщательно подтвердите кровотечение, чтобы предотвратить образование гематомы, которая иногда может привести к летальному исходу.
  9. Убедившись, что кровотечение прекратилось, снимите губчатый ремень, возьмитесь за талию животного одной рукой и поверните животное так, чтобы можно было держать подмышку животного другой рукой с тыльной стороны.
  10. Верните мартышку в клетку. Чтобы уменьшить стресс и облегчить повторный забор крови, обеспечьте мартышку его любимой едой (например, печеньем, зефиром или бисквитом). Время от времени проверяйте возникновение гематомы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Когда гематома обнаружена на ранней стадии, наложите давящую повязку, чтобы предотвратить прогрессирование гематомы. При обнаружении по прошествии длительного времени может потребоваться хирургическое удаление гематомы с перевязкой бедренной артерии и переливанием крови 9,13.
  11. Отсоедините иглу от шприца, чтобы предотвратить гемолиз. Затем медленно вытолкните собранную кровь по внутренней стенке микропробирки объемом 1,5 мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Собранная кровь может храниться при температуре 4 °C в течение 24 часов перед отделением плазмы для измерения уровней P4/E2.

2. Отделение плазмы и определение гормонального фона

  1. Центрифугируйте кровь в пробирке объемом 1,5 мл при 1100 × г в течение 5 мин при 4 °С.
  2. Переложите отделенную плазму (надосадочную жидкость) из пробирки объемом 1,5 мл в новую пробирку/чашку, тщательно избегая включения клеток крови (осадка).
  3. Измеряйте уровни P4 и E2 с помощью набора ELISA или автоматического анализатора. Если количества плазмы недостаточно для автоматического анализатора, используйте раствор для разведения пробы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для измерения с помощью автоматического анализатора требуется >175 мкл плазмы для определения только уровня P4, а для определения P4 и E2 требуется >250 мкл плазмы.

3. Измерение ЦГ мочи для определения овуляции и беременности

ПРИМЕЧАНИЕ: Уровни CG у мартышек могут быть измерены с помощью иммунохроматографического теста как для овуляции, так и для беременности. В случае овуляции положительный результат можно получить за 0-2 дня до овуляции. В случае наступления беременности положительный результат выявляется с 15-20 дня примерно до 100 дня беременности. Для проведения теста требуется небольшое количество (90 μл) мочи (одна капля мочи равна ~30 μл).

  1. Метод лотка: Если в одной клетке находится более двух животных, переместите целевую мартышку (или других животных) в другую клетку накануне. Поставьте чистый лоток на дно клетки в ночь до или перед освещением. Моча не выводится из мочевого пузыря в течение ночи. Поэтому моча обычно выделяется из мочевого пузыря вскоре после зажигания.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вход в комнату утром до зажигания солнца может нарушить цикл сна когорты. Моча обычно может быть собрана в течение примерно 30 минут после розжига.
  2. Метод отжима: Подготовьте вымытые лотки к сбору мочи. Найдя мочевой пузырь мартышки, осторожно сожмите его спереди и с обеих сторон, используя всю длину пальцев (рисунок 1F). Собирайте мочу непосредственно перед освещением комнаты утром.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если забор мочи не увенчался успехом из-за отсутствия мочи в мочевом пузыре, подождите некоторое время и повторите попытку. Будьте осторожны, не применяйте чрезмерную силу, потому что это может травмировать животное.
  3. Сразу после сбора поместите образец мочи в лунку иммунохроматографического тест-набора. Прочтите результат через 10 минут в соответствии с инструкциями производителя.

4. Контроль и определение стадии овариального цикла для сбора ооцитов, зигот и эмбрионов

  1. Забор зародышевых пузырьков (GV) из яичников
    1. Введите внутримышечно 3 мкл 0,263 мг/мл клопростенола (синтетического аналога PGF2α), разведенного в 150 мкл физиологического раствора14 (рис. 2), для сброса овариального цикла в конце лютеиновой фазы (т.е. через ≥10 дней после начала лютеиновой фазы).
      Примечание: Приготовление разбавленного раствора в большем объеме может быть удобным, так как разведенный клопростенол остается стабильным в течение как минимум нескольких недель при температуре +4 °C.
    2. На следующий день (день 1) подтвердите начало фолликулярной фазы, проверив, что уровень Р4 снизился.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Сообщалось, что инъекции клопростенола резко снижают уровень P4 (обычно <10 нг/мл) в течение 24ч3.
    3. С 1-го дня вводите ФСГ (25 МЕ, внутримышечно) один раз в 2 дня, в общей сложности 5 раз (дни 1, 3, 5, 7 и 9). На 10-й день во второй половине дня ввести ХГЧ (75 МЕ, внутримышечно).
    4. Соберите ГВ из яичников на 11 день методом фолликулярной аспирации под наркозом согласно литературе15,16.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Иногда овуляция происходит раньше, чем ожидалось. Таким образом, рекомендуется проверять уровни CG с 8 дня. Если тест CG положительный, проведите сбор GV в этот день.
  2. Сбор ооцитов, зигот и ранних эмбрионов метафазы II (MII)
    1. Сбросьте овариальный цикл с помощью клопростенола, как описано в шаге 4.1.1.
    2. На следующий день (день 1) подтвердите начало фолликулярной фазы, проверив, что уровень Р4 снизился.
    3. Для сбора зигот и эмбрионов размещают самок игрунок вместе с самцами игрунок для случки с 6 дня.
    4. Начиная с 7-го дня, проверяйте уровень P4/E2 в крови и уровень CG в моче у женщин. Обнаружение ХГ является признаком овуляции в течение нескольких дней (обычно на следующий день). В день, когда уровень Р4 повышается, а уровень Е2 снижается по сравнению с предыдущим днем, соберите ооциты MII или эмбриональные зиготы 0-го дня (Е0) из яйцеводов 17,18.
    5. Для сбора эмбрионов, как описано в литературе, проводят промывание либо из яйцеводов (Е1-Е3, 1-8 клеток)17,18, либо из матки (Е5-Е10, 8 клеток-бластоциста)19,20,21,22 в соответствующий момент времени, в зависимости от целевой стадии.

Результаты

Подробная информация о животных, использованных в этом исследовании, приведена в таблице 1.

Анатомические анализы бедренной вены
Анатомический анализ бедренной вены проводили с участием 2-летнего самца обыкновенной мартышки (I 7713M), ?...

Обсуждение

Определение местоположения вены является наиболее важным этапом сбора крови. Основываясь на анатомических наблюдениях, этот протокол вводит проксимальную область в бедренном треугольнике как легкое место для сбора крови у мартышек. Используя эту область, можно лег?...

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Чуншэнь Шена, Хироко Акуцу, Фумиё Сугики, Юну Хасимото, Хину Наритоми, Юки Сакамото и Микико Хоригомэ за их поддержку в разработке этого протокола и в повседневном уходе за мартышками; Такаюки Минэсигэ за комментарии к рукописи; Юкико Абэ и сотрудники лаборатории Aiba за обмен методами сбора зигот; CIEA за обмен информацией о содержании мартышек и экспериментах, которые они культивировали на протяжении 40 лет. Исследование было поддержано компаниями AMED, JST и KAKENHI в рамках грантов NoNo JP19gm6310010, JP20gm6310010, JP21gm6310010 и JP22gm6310010 (AMED), JPMJPR228B (JST), 20H05764, 20H03177 и 22K18356 (KAKENHI).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
AIA-360Tosoh Corporation0019945Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATETosoh Corporation0020956Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK SUBSTRATE SET IITosoh Corporation0020968Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK WASH CONCENTRATETosoh Corporation0020955Hormone measurement (P4/E2)
CMS-1CLEA JapanMarmoset food
EstrumateMSD Animal HealthPGF2alpha analog (cloprostenol)
Gonal-f Subcutaneous Injection 150Merck Biopharma Co., Ltd.FSH
Gonatropin for intramuscular injection 1000ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.872413hCG
Heparin sodium injection solution 5,000 units/5 mLMochida Pharmaceutical Co., Ltd.224122458Blood collection
Immunochromatographic Test Kit for Detection of Common Marmoset Chorionic Gonadotropin (Dual Checker)CLEA Japan, Inc.Determining CG level
Low-profile double-arm microscope illumination LPF-SDSHIOKAZE GIKENDesk lamp for blood collection
Marmoset blood collection restraint deviceJIC JapanJM-1006Blood collection
http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html
email: vi@jic-japan.jp
Metacam 0.05%Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.Hematoma treatment
Sample Cup, 3 mL, PS, for Tosoh 360 and AIA-600 II, 1000/BagGlobe Scientific110913Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2Tosoh Corporation0025224Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025324Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation0025524Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIIITosoh Corporation0025240Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025340Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation 0025540Hormone measurement (P4/E2)
Syringe with 25 G (0.50 x 25 mm) needleTERUMOSS-01T2525Blood collection
Tensolvet 5.000 I.E. gel.Dechra Pharmaceuticals14033492Hematoma treatment
TOSOH MULTI-CONTROL SETTosoh Corporation0015965Hormone measurement (P4/E2)

Ссылки

  1. Kholkute, S. D. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). Primates. 25 (1), 123-126 (1984).
  2. Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). J Med Primatol. 11 (1), 43-51 (1982).
  3. Gilchrist, R. B., Wicherek, M., Heistermann, M., Nayudu, P. L., Hodges, J. K. Changes in follicle-stimulating hormone and follicle populations during the ovarian cycle of the common marmoset. Biol Reprod. 64 (1), 127-135 (2001).
  4. Gromoll, J., et al. A new subclass of the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor lacking exon 10 messenger RNA in the New World monkey (Platyrrhini) lineage. Biol Reprod. 69 (1), 75-80 (2003).
  5. Müller, T., et al. Chorionic gonadotrophin beta subunit mRNA but not luteinising hormone beta subunit mRNA is expressed in the pituitary of the common marmoset (Callithrix jacchus). J Mol Endocrinol. 32 (1), 115-128 (2004).
  6. Pacchiarotti, A., et al. Ovarian stimulation protocol in IVF: an up-to-date review of the literature. Curr Pharm Biotechnol. 17 (4), 303-315 (2016).
  7. Ezcurra, D., Humaidan, P. A review of luteinising hormone and human chorionic gonadotropin when used in assisted reproductive technology. Reprod Biol Endocrinol. 12, 95 (2014).
  8. Lopez-Gatius, F. Ovarian response to prostaglandin F(2alpha) in lactating dairy cows: A clinical update. J Reprod Dev. 68 (2), 104-109 (2022).
  9. Marini, R. P., Wachtman, L. M., Tardif, S. D., Mansfield, K., Fox, J. G. . The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research. , (2018).
  10. Schultz-Darken, N. J. Sample collection and restraint techniques used for common marmosets (Callithrix jacchus). Comp Med. 53 (4), 360-363 (2003).
  11. Hopper, J., Kubik, M. Common marmosets. Handbook of Exotic Pet. , 27-42 (2020).
  12. Harlow, C. R., Hearn, J. P., Hodges, J. K. Ovulation in the marmoset monkey: endocrinology, prediction and detection. J Endocrinol. 103 (1), 17-24 (1984).
  13. Ludlage, E., Mansfield, K. Clinical care and diseases of the common marmoset (Callithrix jacchus). Comp Med. 53 (4), 369-382 (2003).
  14. Summers, P. M., Wennink, C. J., Hodges, J. K. Cloprostenol-induced luteolysis in the marmoset monkey (Callithrix jacchus). J Reprod Fertil. 73 (1), 133-138 (1985).
  15. Takahashi, T., et al. Birth of healthy offspring following ICSI in in vitro-matured common marmoset (Callithrix jacchus) oocytes. PLoS One. 9 (4), e95560 (2014).
  16. Tomioka, I., Takahashi, T., Shimada, A., Yoshioka, K., Sasaki, E. Birth of common marmoset (Callithrix jacchus) offspring derived from in vitro-matured oocytes in chemically defined medium. Theriogenology. 78 (7), 1487-1493 (2012).
  17. Abe, Y., et al. Efficient marmoset genome engineering by autologous embryo transfer and CRISPR/Cas9 technology. Sci Rep. 11 (1), 20234 (2021).
  18. Summers, P. M., Shephard, A. M., Taylor, C. T., Hearn, J. P. The effects of cryopreservation and transfer on embryonic development in the common marmoset monkey, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 79 (1), 241-250 (1987).
  19. Thomson, J. A., Kalishman, J., Hearn, J. P. Nonsurgical uterine stage preimplantation embryo collection from the common marmoset. J Med Primatol. 23 (6), 333-336 (1994).
  20. Hanazawa, K., et al. Minimally invasive transabdominal collection of preimplantation embryos from the common marmoset monkey (Callithrix jacchus). Theriogenology. 78 (4), 811-816 (2012).
  21. Ishibashi, H., et al. Efficient embryo transfer in the common marmoset monkey (Callithrix jacchus) with a reduced transfer volume: a non-surgical approach with cryopreserved late-stage embryos. Biol Reprod. 88 (5), 115 (2013).
  22. Kishimoto, K., et al. Establishment of novel common marmoset embryonic stem cell lines under various conditions. Stem Cell Res. 53, 102252 (2021).
  23. Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
  24. Daskalaki, M., Drummer, C., Behr, R., Heistermann, M. The use of alfaxalone for short-term anesthesia can confound serum progesterone measurements in the common marmoset: a case report. Primate Biol. 9 (2), 23-28 (2022).
  25. Hodges, J. K., Cottingham, P. G., Summers, P. M., Liang, Y. N. Controlled ovulation in the marmoset monkey (Callithrix jacchus) with human chorionic gonadotropin following prostaglandin-induced luteal regression. Fertil Steril. 48 (2), 299-305 (1987).
  26. Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. Extension of reproductive suppression by pheromonal cues in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 90 (2), 411-418 (1990).
  27. Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. Sensory cues and the suppression of reproduction in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 97 (1), 301-310 (1993).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены