Генерация и функциональная верификация чувствительных к гипоксии химерных антигенных рецептор-Т-клеток

Ying Xue; Yunyu Mao; Qibin Liao; Chen Zhao; Xiaoyan Zhang; Jianqing Xu

doi:10.3791/66697

Method Article

Генерация и функциональная верификация чувствительных к гипоксии химерных антигенных рецептор-Т-клеток

DOI:

10.3791/66697

⸱

June 14th, 2024

Ying Xue*¹ , Yunyu Mao*² , Qibin Liao³ , Chen Zhao⁴ , Xiaoyan Zhang¹^,²^,⁴ , Jianqing Xu¹^,²^,⁴

¹Institutes of Biomedical Sciences, Fudan University, ²Clinical Center of Biotherapy at Zhongshan Hospital, Fudan University, ³Department of Oncology and Bio-therapeutic Center, Shenzhen Third People's Hospital, Southern University of Science and Technology, ⁴Shanghai Public Health Clinical Center, Fudan University

* These authors contributed equally

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Summary

В данной работе представлен протокол генерации и функциональной верификации чувствительных к гипоксии химерных антигенных рецепторов (CAR)-Т-клеток. В этом протоколе представлено поколение чувствительных к гипоксии CAR-T-клеток на основе лентивируса и их характеристика, включая валидацию гипоксически-зависимой экспрессии CAR и селективной цитотоксичности.

Abstract

Обширные исследования доказали перспективность терапии химерными антигенными рецепторами T (CAR-T) клетками в лечении гематологических злокачественных новообразований. Тем не менее, лечение солидных опухолей остается сложной задачей, о чем свидетельствуют опасения по поводу безопасности, которые возникают, когда CAR-T-клетки атакуют нормальные клетки, экспрессирующие целевые антигены. Исследователи изучили различные подходы к повышению селективности опухоли при терапии CAR-T-клетками. Одной из типичных стратегий в этом направлении является конструирование чувствительных к гипоксии CAR-T-клеток, которые сконструированы путем слияния кислород-зависимого домена деградации с CAR-фрагментом и разработаны для достижения высокой экспрессии CAR только в гипоксической среде — опухолевом микроокружении (TME). В данной работе представлен протокол генерации таких CAR-T-клеток и их функциональная характеристика, включая методы анализа изменений экспрессии CAR-клеток и убивающей способности в ответ на различные уровни кислорода, установленные в камере мобильного инкубатора. Ожидается, что сконструированные CAR-T-клетки будут демонстрировать экспрессию CAR и цитотоксичность чувствительным к кислороду образом, тем самым поддерживая их способность различать гипоксические TME и нормоксические нормальные ткани для селективной активации.

Introduction

Терапия химерными антигенными рецепторами Т-клеток (CAR-T) представляет собой значительный прорыв в лечении рака. С тех пор как в 2017 году Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) одобрило первую CAR-T-терапию для лечения прогрессирующей/резистентной лимфомы и острого лимфобластного лейкоза, ^1,2,3, 10 CAR-T-терапий, нацеленных на CD19 или антиген созревания B-клеток (BCMA), получили одобрение во всем мире⁴. Однако, несмотря на обширные исследования....