Периорбитальное размещение лазерного допплеровского зонда для мониторинга мозгового кровотока до окклюзии средней мозговой артерии на моделях грызунов

Резюме

Здесь показана минимально инвазивная хирургическая процедура, которая включает в себя размещение лазерного допплеровского зонда на черепе над дистальной областью средней мозговой артерии (МКА), периорбитальной областью, подходящей для крыс и мышей, для оценки кровотока во время транзиторной окклюзии МКА.

Аннотация

Окклюзия средней мозговой артерии (ОКАО) является золотым стандартом для доклинического моделирования ишемического инсульта у грызунов. Однако успешная окклюзия не гарантируется даже самыми умелыми хирургическими руками. Ошибки в основном возникают, когда филамент расположен не на правильной глубине, и включают случаи либо отсутствия инфаркта, либо перфорации сосуда, что может привести к смерти. Лазерная допплеровская флоуметрия (ЛДФ) является надежным методом, который обеспечивает обратную связь в режиме реального времени по регионарному мозговому кровотоку (КБШ) во время процедуры MCAO. В данной работе мы демонстрируем быструю технику периорбитального размещения лазерного доплеровского зонда для измерения CBF как у мышей, так и у крыс. Наше обоснование заключалось в том, чтобы упростить внедрение LDF, поощряя широкое использование для повышения хирургической надежности. Этот метод устраняет необходимость в истончении черепа и специализированном оборудовании, с размещением в периорбитальной области, а не в дорсальном размещении, что способствует эффективности и простоте внедрения. Описанный здесь протокол включает в себя предоперационную подготовку, установку периорбитального допплеровского зонда и послеоперационный уход. Репрезентативные результаты включают в себя визуальные изображения процедурных элементов наряду с репрезентативными трассировками LDF, иллюстрирующими успешные операции MCAO, со случаями неудачной установки филамента, приводящей к осложнениям. Протокол иллюстрирует LDF в подтверждении правильного размещения филамента и предлагает упрощенную процедуру по сравнению с альтернативными методами.

Введение

Метод окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) широко используется у грызунов с тех^{пор, как} он был представлен научному сообществу для применения к крысам в 1986^году1 с адаптацией Лонга, описанной в 1990 году2, и адаптацией для мышей^{вскоре после 3}. Хотя это не описано в публикации Лонга, использование сигнала лазерной доплеровской флоуметрии (ЛДФ) для подтверждения расположения нити вскоре было описано в литературе⁴. Использование LDF во время процедуры MCAO занимает видное место в литературе, но обозначено как необязательный шаг в текущих ....

протокол

Для иллюстрации этого протокола использовались взрослые мыши и крысы (25 г, C57BL/6J, Jackson Laboratories; 250 г, Sprague Dawley, Envigo). Процедуры обращения с животными и эксперименты проводились с одобрения и в соответствии с Комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Аризоны, национальными законами и в соответствии с принципами ухода за лабораторными животными¹¹. Крысы и мыши были размещены по графику 12 часов в светлое и темное время суток (с 7 утра до 7 вечера), а еда и вода были доступны в неограниченном количестве.

1. Предоперационная подг....

Результаты

Размещение лазерного допплеровского зонда в области MCA визуально изображено на рисунке 1, представляя собой пиктограмму сосудистой сети и служа визуальным ориентиром с сагиттальной и дорсальной перспектив. На рисунке 2 обобщены важне?.......

Обсуждение

MCAO является золотым стандартом процедуры моделирования окклюзии и реперфузии церебральных артерий у грызунов и является краеугольным камнем доклинических исследований инсульта, позволяя индуцировать фокальную ишемию у грызунов для имитации патофизиологии инсуль.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
curved spring scissors	Castroviejo	1501710
forceps #5	Fine science tools	11250-20
forceps #5/45	Fine science tools	1151-35
Forcepts Cautery tool	Conmed	M18019-01
Laboratory tape	Fisherbrand Labeling Tape	15-950
Laser Doppler Monitor	Moore Instruments	MOORVMS-LDF
LDF software	Perisoft for Windows or moorSOFT	NA
Mouse clippers	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, probe 407	Perimed	equipment no longer available
plastic wrap	Glad	press n seal
Rat clippers	oster	A5 or similar
Small rodent anesthesia	JD Medical	custom order
small scissors	excelta	362 Sissors or similar
Temperature monitor system with probe	Physitemp	TCAT-2AC Controller