Инокуляция листьев in vivo: альтернативный метод оценки устойчивости к болезням гибридных клонов при селекции тополя Болезнь стеблевого рака

Резюме

Мы предоставляем пошаговый протокол оценки устойчивости тополя к возбудителям стеблевого рака с использованием метода инокуляции листьев in vivo . Этот метод особенно подходит для широкомасштабной оценки устойчивости к болезням Cytospora chrysosperma и Botryosphaeria dothidea в потомстве тополя в Китае.

Аннотация

Болезни стволового рака, вызванные возбудителями Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) и Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Это две основные болезни лесов на плантациях тополей в Китае, которые иногда могут уничтожить все саженцы тополя или серьезно повредить зрелые тополиные леса. Гибридная селекция является наиболее прямым и эффективным методом борьбы с болезнями деревьев. Тем не менее, оценка устойчивости к болезням или отбор устойчивых к болезням клонов на основе инокуляции стеблей in vitro является неэффективным, трудоемким и дорогостоящим, что ограничивает развитие гибридной селекции болезни стебля тополя. В этом исследовании мы предложили альтернативный метод оценки устойчивости к болезням к возбудителям стеблевого рака с помощью инокуляции листьев in vivo . Тестовые материалы, используемые в этом методе, могут быть на 1-летних саженцах тополя или однолетних ветвях многолетних тополей в теплице или поле. Важнейшим этапом этого альтернативного метода является выбор прививочных листьев:^5-7-е только что созревшие листья могут быть наиболее подходящими. Вторым важным этапом метода инокуляции листьев является нанесение ран на листьях растений через проколы иглой, обеспечивая достаточные повреждения для измерения тяжести заболевания. Для достаточного количества листьев, образующихся на ранней стадии селекции тополя, эта инокуляция листьев in vivo способствует быстрому, точному и широкомасштабному скринингу устойчивых к болезням клонов тополя на патогены стеблевого рака. Кроме того, этот метод инокуляции листьев также послужит эффективным методом скрининга патогенов стеблевого рака C . chrysosperma, B.dothidea или других патогенов стеблевого рака.

Введение

Болезни стеблевого рака тополя, вызываемые в основном двумя некротрофными возбудителями: Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. и Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. & de not., серьезно угрожают развитию и выживанию тополиных плантаций на северо-востоке, севере и северо-западе (три севера) Китая. Гибридная селекция является наиболее прямым и эффективным методом борьбы с болезнями деревьев; Тем не менее, по сравнению с прогрессом в селекции высокоурожайных, быстрорастущих или других гибридных клонов тополя, исследования по селекции устойчивости к болезни тополя скудны. Сообщалось лишь об ограниченных исследованиях....

протокол

1. Грибковая культура на возбудителя афтозного стоматита

1. Приготовьте агар картофельной декстрозы (КПК; экстракт картофеля 6,0 г, декстроза 20,0 г, агар 20,0 г) питательную среду для штаммов грибов; растворить вышеуказанные материалы в воде до 1000 мл, полностью растворить среду при 100 °С в течение 10 мин.
2. Налейте среду PDA в пробирки объемом 25 мл (каждая по 15,0 мл); стерилизовать все пробирки при температуре 121,1 °C в течение 30 минут. Разлейте среду по культуральным пластинам (диаметром 9,0 см) и охладите пластины при комнатной температуре (RT).
3. Разрезать мицелий грибкового патогена,....

Результаты

В этом протоколе схематический рабочий процесс проводился на 48 гибридных клонах тополя, инфицированных возбудителем ракообразного рака C. chrysosperma (рис. 1). Гибридные клоны тополя являются частью гибридизационного потомства P. deltoides, культивиру?.......

Обсуждение

Этот протокол обеспечивает быстрый и эффективный метод инокуляции патогенов устойчивости к тополиному раку, который подходит для областей исследований, требующих широкомасштабного скрининга устойчивости к болезням, таких как гибридное разведение устойчивости к т?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves