Строительство и Имплантация Microinfusion системы для устойчивой доставки агентов Neuroactive.

Резюме

Как неврологии запросу становится все более изощренными, исследование мозговых структур и схем требует улучшения уровня точности и высокое разрешение. Мы разработали метод получения и имплантация хронических системы вливания в мозг использованием боросиликатного microcannula с наконечником диаметром 50 микрон.

Аннотация

Экспериментальные протоколы, используемые при хронических вливание средств нейроактивные в области мозга часто используют мини-осмотического насоса системы. Агенты, как правило, доставляется через канюлю нержавеющей стали с диаметром 0,30 мм или более. Системы использованием канюли такого калибра может наложить травмы область интересов в результате архитектурного повреждения, тем самым угрозу структурную целостность и нормальное функционирование. Как неврологии запросу становится все более изощренными, исследование мозговых структур и схем требует улучшения уровня точности и высокое разрешение. Мы разработали метод получения и имплантация хронических системы вливания в мозг использованием боросиликатного microcannula с наконечником диаметром 50 микрон. Этот метод уменьшает урон к местным условиям и уменьшается реактивная глиоз в месте инфузии. Конфигурация microinfusion системы также может соответствовать поверхности черепа животного, исключающее необходимость в больших черепных пьедесталы, способствуя тем самым закрытием головы разрез и снижения риска инфицирования. Мы демонстрируем надежный устойчивый доставки красителя с представителем молекулярной массой использования в модели пробирке и в естественных исследованиях на крысах.

протокол

Введение

Прямое вливание нейроактивные агентов позволяет конкретных областей мозга для изучения в обход гематоэнцефалического барьера. Применения этого подхода в области неврологии, разнообразны и включают в себя изменение уровня активности мозга в дискретных субрегионов (Беретта и др., 2004;. Глиддон и др., 2005;.. Ким и др., 2000), исследуя действия психотропных препаратов ( Клинтон и др., 2006;.. Ди Бенедетто и др., 2004), обеспечивая контролируемое моделей воспаление мозга (Гаусса-Wegrzyniak и др., 1998;. Marchalant и др., 2007;.. Рози и др., 2004), изучая механизмы наркомании (Ким и др., 2005;. Локман и др., 2005;. Чжан и др., 2006.), и позволяет длительное применение трофических факторов (Naert и др., 2006;.. Radecki и др., 2005; Такахаши и соавт., 2006).

Стандартные методы для хронических доставки агентов часто используют мини-осмотического насоса (например, Alzet Осмотические Насосы, Купертино, штат Калифорния), загружаемые с агентом нейроактивные, которая поставляется в мозг через канюлю из нержавеющей стали с диаметром, который может находиться в диапазоне от 0,25 мм (Уильямс и др., 1987.) до 0,5 мм, но чаще всего составляет около 0,3 мм (пластмассы Один из них, Роанок, Вирджиния, см. рис 6А). Хотя доставка канюли такого размера могут быть пригодны для многих приложений, в которых высокий уровень точности не требуется, и травмы микроокружения не является основной проблемой, эти канюли неоптимальных для доставки агентов для малых, тонкий сайтов, в которых Канюля сопоставима по размеру (или больше) целевых сама структура, или там, где функция не должна быть скомпрометирована травматического оскорбление.

Представленный здесь метод подготовки и внедрения системы хронических настой для доставки агентов нейроактивные в мозге использованием "microcannula" со значительно уменьшается диаметр кончика. Эта техника позволяет малым подструктур быть направлены и снижает травмы из области интереса. Настоящая процедура, таким образом, научил, как альтернативу традиционным методам для исследователей, желающих свести к минимуму нарушения в области мозга, ведется расследование.

Материалы и методы

Животные и дизайн

Восемнадцать взрослых (400-450 г) мужчин Sprague-Dawley крыс были использованы для демонстрации процедуры и тестирования функции нынешнего метода. Двенадцать животных были имплантированы microinfusion системы и способствовало временной оценке курса устойчивого функции в течение 4 дней. Шесть животных были использованы для сравнения уровня травмы и реактивной глиоз 5 дней после имплантации либо стандартный 28 га доставки канюли (N = 3) или microcannula (N = 3), подключенных к заполненные физиологическим раствором мини-осмотического насоса. Животные были помещены в прозрачные пластиковые клетки, и поддерживается на 12-часовой светлый / темный графику, с пищей и водой при условии, вволю. Все процедуры были одобрены больнице Маклина Институциональные уходу и использованию животных комитета, в соответствии с действующими федеральными и местными руководящими принципами для экспериментального использования животных.

Microinfusion сборки системы

На рисунке 1 показаны компоненты и сборку microinfusion системы. Мы рекомендуем строительства и имплантации системы с использованием стерильной техники. Кроме того, в целях предотвращения введения воздуха в системе, он собирается при погружении в солевые ванны. Пока тестов, мини-осмотического насоса (СС) были заняты (Alzet модель № 1002, г. Купертино, штат Калифорния) с 14-дневный срок, расход 0,25 мкл / ч, и заполнить мощностью 98,6 мкл. Однако, так как чрезмерный расход может потоп меньших областях, представляющих интерес в мозг и вызвать структурные повреждения, скорость потока для этих исследований была снижена до 0,125 мкл / час, покрывая половину СС с парафином в соответствии с инструкциями производителя. Для оценки местной травмы, СС были заполнены стерильным физиологическим раствором. Для оценки устойчивого функции microinfusion системы, Fast Зеленый (1% в физиологическом растворе, Fisher Scientific, Park Lane Питтсбурге, штат Пенсильвания) была выбрана в качестве тест решение из-за его низкой токсичностью, его способность к диффузии в пределах жизнеспособных тканей головного мозга, и потому, что имеет молекулярную массу (808,84) в верхней части диапазона для "малых молекул" (<1000), которые обычно представляют интерес для хронических инфузии (например мусцимола, пикротоксина, флуоксетин и др.).

Рисунок 1: АсемБлай из microinfusion системы. (А) компоненты системы размещены в их относительные положения для сборки. Обратите внимание, фланец от трубки modulater поток был разбит прочь. Мы рекомендуем выравнивание проволоки быть обеспечены непосредственно перед имплантацией (см. текст). (B) Собранный microinfusion системе до крепления проволоки выравнивание и имплантации.

Microcannula подготовки

Microcannula моделируются с использованием стандартного горизонтального или вертикального электрода съемник (Stoelting Компания Wood Dale, Иллинойс) с настройками для производства стеклянного электрода с длинными, слегка сужающийся голени (рис. 2А). Боросиликатное трубка подходит для этой цели (часть 1B100F-6, 1,0 мм, 6 в; инструменты Всемирного Precision, Inc Сарасоте, штат Флорида), так как она имеет относительно низкую температуру плавления, что позволяет последующего изгиба с целенаправленным тепла. Дистальной-самые часть прямо microcannula можно разрезать ножницами или рассечение контролируемой перерыв может быть сделан с microforceps (инструменты Всемирного Precision, Inc Сарасоте, штат Флорида), чтобы дать желаемый конечный диаметр наконечника (50 мкм для настоящих демонстраций ), и микрометра микроскопа полезна для руководства и подтвердить желаемого диаметра. Вырезать наконечник может быть кратко подогревом, или "огневой полировкой", чтобы удалить грубые или острые края. Нагревательная спираль из съемника электрода или горелки Бунзена затем используется для наложить прямым углом на microcannula на определенном расстоянии от кончика microcannula (рис. 2B), поместив боросиликатного трубы в нагревательной спирали (или пламени Бунзена ) и применяя мягкой силы в дистальной части щипцами, как трубка нагревается. Предопределено длина microcannula дистальнее введенных прямым углом решается на основе глубины головного мозга оказываются мишенью (например, 5 мм) и с учетом толщины черепа (~ 1 мм) и рабочим расстоянием выше черепа ( например, 1-2 мм). Таким образом заданное расстояние от кончика microcannula к прямым углом, введенные для настоящего демонстраций было 7-8 мм. Карандаш алмазный затем используется, чтобы сократить боросиликатного трубки примерно 8 мм проксимальнее прямым углом.

Рисунок 2: Подготовка microcannula. (А), электрод съемник (Stoelting компания Wood Dale, Иллинойс) используется для производства microcannula с длинными, сужающийся голени. (B) нагревательная спираль может быть переориентированы для простоты использования, и microcannula помещается в катушку, позволяя правом угле изгиба, который будет сформирован использованием щипцов, как стеклянные трубки нагревается.

После необходимое количество микроканюли было сделано, мы рекомендуем стерилизацию окисью этилена или использование автоклава. Дистальной-самые 1-2 мм microcannula могут быть окрашены стерильных хирургических маркера (или постоянные чернила до стерилизации), чтобы кончик microcannula легко визуализируется во время хирургической операции.

СС подготовки

СС были подготовлены в соответствии с инструкциями производителя. Короче говоря, пластиковый фланец из труб из нержавеющей стали СС ("поток модулятором") сначала удалить с помощью ножниц или rongeurs. Длина трубы из полиэтилена (пластмассы Один из них, Роанок, Вирджиния, # C312 VT; OD, 1,22 мм; ID: 0,72 мм) крепится к области трубки из нержавеющей стали, ранее занятые фланца (~ 4 мм), вставляя нержавеющей стальных труб в просвет трубы из полиэтилена и обеспечения с подходящим клеем вокруг внешней окружности соединения. LumaBond (myNeuroLab, Inc, Сент-Луис, Миссури) особенно полезен, поскольку он лечит в течение нескольких секунд под воздействием сфокусированный свет (например, от волоконно-оптических лампы). Длина труб должно быть приблизительно расстояние между основанием черепа животного и ростральной-самый аспект лопатки (например, примерно 1,5-3,0 см для лабораторных крыс). Насос заполняется в соответствии с инструкциями, а также труб из нержавеющей стали Alzet, при длине полиэтиленовой трубы прилагается к своему концу, вставляется в насос заполнен. Небольшой объем раствора от насоса будут вынуждены вокруг внешней насос-трубка интерфейс (и должны быть вонзилась в гостях), а также в проксимальной области полиэтиленовых труб. Заполненный насос с прикрепленными трубка затем инкубировали в стерильном физиологическом растворе в течение 12 часов при температуре 37 ° C. Если насос работает нормально, после этого инкубационного периода, жидкость будет видно, прошли несколько миллиметров в полиэтиленовых труб.

Строить ион microinfusion системы

Насос с приложением ее трубки погружают в 10 см, чашка Петри содержащие стерильный физиологический раствор, а оставшиеся воздуха внутри полиэтиленовой трубы удаляется с помощью шприца заполнить тем же раствором, содержащиеся в насос и который был оснащен малого диаметра трубы которые могут быть вставлены в полиэтиленовых труб. Решение может таким образом быть введен в полиэтиленовые трубы для замены воздуха. Точно так же microcannula погружается в солевой ванне и воздух удаляется путем инъекции раствора. Это легко достигается с Второе решение заполненный шприц снабжен гибким (например, силиконовые) трубки, который надевается на большой (проксимальный) конец microcannula.

Проксимальный конец трубки из боросиликатного затем вставляется в полиэтиленовую трубу. Обратите внимание, что для этого может потребоваться расширение полиэтиленовые трубы с усилием нажатия закрытыми кончиками microforceps в просвет тем самым сжигание открытия для простой вставки боросиликатного труб. Воздуха без инфузионной системы затем удаляются из солевых ванн и помещен на стерильной поверхности и мягко сухой марлей или ватным тампоном. Microcannula-полиэтиленовые трубы надежности соединения с окружной слой клея (например, LumaBond).

Если система собрана правильно, и если СС продолжает функционировать, как и положено, в течение последнего шага этой процедуры капли раствора, как правило, появляются на кончике microcannula как осмотического механизма в насос продолжает в процессе приготовления. СС расход может быть уменьшен пропорционально путем нанесения соответствующей площади поверхности с парафином в соответствии с инструкциями производителя. В настоящее демонстраций, 50% каждого СС была покрыта кратко Данкинг его в расплавленный парафин и позволяя ему остыть, тем самым уменьшая расход в два раза до 0,125 мкл / час. Завершено microinfusion система затем погружен в стерильного физиологического раствора и хранится при температуре 37 ° С до имплантации.

Имплантация microinfusion системы

Microinfusion система внедряется с использованием стандартных методов стереотаксической как описано ранее (Кули, 1990). После подготовки операционного поля, заусенцев отверстие сверлится для ввода microcannula. При желании, череп винты также могут быть расположены по стабилизации связи соединения, используемые для обеспечения microcannula. Соединения, используемые в этой лаборатории (Geribond, Den-Mat Inc, Санта-Мария, штат Калифорния) не требует дополнительного крепления, однако череп поверхность должна быть подготовлена ​​путем очистки с acetonedampened ватным тампоном. 1-2 мм в диаметре "зацепить" производится на дистальном конце выравнивания проволоки (см. рис. 1), что позволяет ему окружить изгиб боросиликатного труб. Он затем фиксируется (с использованием LumaBond), в ориентации вдоль одной оси с дистальной части microcannula (то есть быть выдвинуты в мозг, см. рис. 3B). Инфузионной системы, затем монтируются на стереотаксической носителя (рис. 3), зажимая выравнивания проволоки в держатель. Стерильные шов используется для троса инфузионного насоса в начало стереотаксического манипулятора, таким образом, приостановление его и предотвращения потери ориентации во время процедуры из-за веса (и крутящего момента) насоса (рис. 3В). Microcannula могут быть расположены в требуемом направлении (например, именно вертикальный) с помощью щипцов, чтобы аккуратно согнуть проволоку выравнивание дистальнее перевозчика зажимом. Наконечник microcannula располагается над точкой (например, брегмы или лямбда), а затем маневрировать в точке входа в головной мозг. Координат, используемых для животных в этих экспериментах были: брегмы 0,2 мм, боковые 3,2 мм, и вентральной 5,0 мм под оболочки с головой животного в череп плоский позиции.

После microcannula выдвигается на соответствующей глубине в пределах мозга, система закреплена в правильном положении с пьедестала соединения (например, Geribond). Пьедестал может быть скульптурными близко к поверхности черепа для облегчения закрытия раны. После пьедестала соединения вылечил (~ 2 мин), выравнивание проволоки режется на одном уровне с пьедестала использованием режущего диска сверлить в. Небольшое количество соединение может быть использована для покрытия и гладкой оставшиеся шип из отрубленной проволоки. СС затем вставляется под кожу, расположенную между лопатками животного. Наконец, промывали рану стерильным физиологическим раствором, а разрез закрыт с помощью шва или рана клипов (рис. 3, панель D).

croinfusion Система позиционируется для размещения и фиксации в животное. (D) дизайн microinfusion система позволяет легко закрытия разреза более низкопрофильным пьедестал, что снижает риск заражения и минимизации неудобств для животных. "Ширина =" 511 "высота =" 381 "/>
Рисунок 3: Имплантация microinfusion системы. (А) Позиционирование microinfusion системы на стереотаксического прибора. (B) СС привязанный использованием стерильных шовных, чтобы предотвратить его веса от нарушения ориентации microcannula. Microcannula позиционируется для точного вертикального вступления в мозга с помощью выравнивания проволоки. (C) microinfusion система позиционируется для размещения и фиксации в животное. (D) дизайн microinfusion система позволяет легко закрытия разреза более низкопрофильным пьедестал, что снижает риск заражения и минимизации неудобств для животных.

Подготовка и внедрение стандартной системы инфузии

Порядок подготовки стандартной системы вливания идентична той, что для microinfusion системе, за исключением microcannula заменяется "осмотического насоса разъем канюли" с диаметром 300 мкм (28 га; пластмассы Один из них, Роанок, Вирджиния, # 3300PM / SPC, см. рис 5а). Имплантация стандартная система также идентична microinfusion системы, включая прикрепление выравнивания проволоки для точной вертикальное положение канюли вступления в мозг.

Гистологии и анализ

Изучить возможность microinfusion системы обеспечить устойчивый доставки Быстрый зеленый, группами по три животных забивали через 12 ч, 1 день, 2 дня, а через 4 дня после операции. Субъекты были глубоко под наркозом с фенобарбиталом натрия (120 мг / кг, внутрибрюшинно) и transcardially перфузии 200 мл 0,1 М фосфатным буферным раствором (PBS), затем 400 мл 4% параформальдегида в буфер 0,1 М фосфат. Перфузионные растворы хранились при температуре 4 ° С, при рН 7,4 и перфузии в размере 50 мл в минуту с использованием перистальтического насоса. Для удаления канюли, не повреждая посмертных тканях, перфузия животного был зафиксирован в стереотаксической рамы, пьедестал был обеспечен с клеем для жесткой проволокой к зажим манипулятора, а череп был тщательно удалить со всего пьедестал использованием стоматологических заусенцев. Пьедестал и основные канюли были удалены таким образом по той же траектории, в которой канюля была выдвинута на размещение. Мозги затем были удалены из черепа и погружают на 12 часов в том же фиксатора.

Для оценки устойчивого вливание Быстрый зеленый, участки с толщиной 200 мкм были вырезаны использованием Vibratome (myNeuroLab, Сент-Луис, Миссури) и мокрого установлены на стеклах. Представитель разделы были обследованы использованием Canon CanoScan LiDE 600F сканера. Для оценки местного травмы и реактивной глиоз, 70μm разделы Vibratome впервые были мокрые монтаж и сфотографировали неокрашенные ткани, чтобы предотвратить искажения, которые могут произойти с гистологическим процессы, такие как сушка, окрашивание, и обезвоживание. Эти же разделы были затем высушить на их желатин покрытием стеклянные пластинки, и они были окрашены гематоксилином и эозином (H & E), обезвоживали градуированных спирты, и кавер-замазали Permount.

Прилегающие 70 разделов мкм прошли стандартные процедуры иммунофлюоресценции для выявления глиальных фибриллярный кислый белок (GFAP), которая выражается астроциты в процессе реактивной глиоз в ответ на травму (Дин и др., 2000;.. Ма и др., 1991). Одним словом, свободно плавающих разделы промывали PBS и блокировали с 10% нормальной сыворотки осла (НСР) и 3% бычьего сывороточного альбумина в 0,1 М PBS с 0,3% Тритон Х-100 (PBS / Тритон) в течение одного часа, а затем инкубировали в кролика против GFAP антител (1:500; Сигма Кемикал Ко, Сент-Луис, Миссури) в PBS / Triton с 1% НДС в течение 12 часов при температуре 4 ° C. Срезы затем промывали PBS и инкубировали с Alexa Fluor 594 ® осла antirabbit вторичных антител (1:500; Molecular Probes, Inc, Eugene, OR) в PBS с 5% НДС в течение одного часа при комнатной температуре. Срезы тщательно промыть снова PBS и контрастно с NeuroTrace ® зеленого флуоресцентного Нисслю пятно (1:500 в PBS в течение 5 минут; Molecular Probes, Inc, Юджин, OR). После окончательного полоскания с PBS, разделы были смонтированы на желатин покрытием слайды и coverslipped с медленной-Fade (Molecular Probes). Все микрофотографии были приобретены с помощью микроскопа Zeiss Axioskop с AxioVision программного обеспечения (Carl Zeiss, Inc Торнвуд, Нью-Йорк).

Результаты

В пробирке тестирования

До оценки у животных, три системы microinfusion были подготовлены, разместив свою Быстрый зеленый заполненные СС в в одном купе (15 мл коническую трубку) и размещение их в микроканюли второй отсек (1 мл Эпп Endorf труба), каждая из которых содержит стерильного физиологического раствора при температуре 37 ° C. Каждая система демонстрировала непрерывный поток красителя в течение 12 часов наблюдения. На рисунке 4 показана функция типичной системы в течение 3 часов.

Рисунок 4: В пробирке демонстрация microinfusion функции системы. (А) поток быстрых Зеленая краска легко видеть беспрепятственный от microcannula в начале в период испытаний пробирке. (Б) Как поток продолжается, резервуар раствор становится насыщенным (B), и в конечном счете непрозрачным с окраской (С).

Оценка в системе microinfusion естественных условиях

После перфузии, удалены микроканюли и их соединения были тщательно осмотрены, и все оказались совершенно нетронутыми. Таким образом, произошла поломка не боросиликатного стекла в тканях, не было никаких дефектов в связи компонентов системы. 10. L заполненные физиологическим раствором Гамильтон шприц с короткой длиной кремния трубки придает его иглы был использован для применения нежный поток обрезанный конец полиэтиленовой трубы прикреплены к microcannula. Все двенадцать микроканюли позволил продолжающийся поток и, казалось, не быть закрыты. Кроме того, после удаления каждого СС от животных, объем оставшийся раствор был измерен и признан подходящим для потока СС в скорости (0,125 мкл / ч) и количество времени, которое было разрешено функционировать.

В естественных условиях доставки

Оценка корональных участков ткани переплетаются с быстрой Зеленый проявляли большой изменчивости в распределении между животными внутри групп в любой данный момент времени (12 часов, 1 день, 2 дня, и 4 дня). Рисунок 5 иллюстрирует представитель областях Быстрый зеленый диффузии на этих временных точек показывает постепенное увеличение проникновения красителя в течение четырех дней. Обратите внимание, что до экспериментов с использованием более высоких концентраций Быстрый зеленый (например, 5 - 15%) привело к быстрому помутнение паренхимы, тем самым скрывая точной оценки функции microinfusion системы с течением времени. Хотя в полной мере на 1% красителя диффузии может быть трудно точно определить, на валовой инспекции, зоны проникновения были легко заметных на 2.5X увеличение, и обозначены пунктирными линиями на рисунке 5.

Рисунок 5: В естественных условиях demonstation устойчивого microinfusion быстрых Грин. () Двенадцать часов после intrastriatal размещения Быстрый зеленый загружены microinfusion системы, краситель видел диффундирующих в паренхиму окружающих сайта microcannula. Наблюдения на 1 день (B), 2 дня (C), и 4 дня (D) указывают на продолжающийся доставки Быстрый зеленый раствор с увеличением области проникновения красителя. Внешняя граница диффузии наблюдается при низких-силовой микроскопии и показан здесь с пунктирными линиями. Шкала бар, 2 мм.

Оценка травмы и реактивной глиоз

Валовой наблюдения свежесрезанных, неокрашенные срезах тканей показал, что microinfusion системы привело к сокращению в локализованных травм на месте доставки. Стандартные канюли неизменно видел, чтобы сорвать и заменить большую площадь ткани (рис. 6Б & C), что лучше оценены на высшие силы с H & E (рис. 6D & E). Более того, кровь часто видели, накопленных на стандартный сайт инфузии (рис. 6, г), что предполагает более высокую степень компромисса сосудистую и подразумевая снизилась целостности барьера головного мозга.

Microinfusion системы также привело к значительно уменьшается реактивная глиоз о чем свидетельствует снизилась иммунореактивности для GFAP в непосредственной близости от вливания через microcannula (рис. 6G) по сравнению с стандартной канюли (рис. 6F). Хотя microcannula вызванных GFAP окрашивания был возведен выше нормального уровня (рис. 6H), поразительное эскалации реактивной глиоз со стандартным размещением канюля и инфузионные (6F) не было видно, когда microinfusion система работала.

ivery канюлю после 5 дней солевой инфузии. (А) microcannula вытащил из боросиликатного труб с диаметром кончика 50. М позволяет бесплатно, неограниченный поток большинство агентов нейроактивные, все же 6X меньше, чем стандартный комплект поставки канюли (28 га, 0,30 мм). (В, С) Необработанный, мокрый монтирует корональных разделах (толщина, 70. М), иллюстрирующие больше местное повреждение тканей (стрелки), вызванные стандартной канюли (B) по сравнению с microcannula (С). (D, E) Повышенная мощность микрофотографии H & E окрашенных срезов показаны на В и С, соответственно. Стандартные канюли вызвано более обширные травмы, как показано на D, сместив большую площадь, ткани и вызывая большее оскорбление сосудистую о чем свидетельствует сбора крови в поражении полости (стрелка). Поражение вызвано microcannula, однако, значительно меньше и меньше вреда ткани в месте инфузии. (F, G, H) иммунофлуоресценции против GFAP демонстрирует резко возросло количество GFAP + астроцитов вокруг поражение стандартной канюли (F), когда по сравнению с microcannula (G) и нормально, unlesioned полосатого тела (H). Шкала бары: & B, 1 мм, D - H, 250 м "/>.
Рисунок 6: Локализованная травма вызвана microcannula по сравнению со стандартной канюли доставки после 5 дней солевой инфузии. () Microcannula вытащил из боросиликатного трубки с диаметром кончика 50 мкм дает возможность свободного, неограниченного потока большинство агентов нейроактивные, все же 6 раз меньше, чем стандартный комплект поставки канюли (28 га, 0,30 мм). (В, С) Необработанный, мокрый монтирует корональных секций (толщина 70 мкм), иллюстрирующие больше местное повреждение тканей (стрелки), вызванные стандартной канюли (B) по сравнению с microcannula (С). (D, E) Повышенная мощность микрофотографии H & E окрашенных срезов показаны на В и С, соответственно. Стандартные канюли вызвано более обширные травмы, как показано на D, сместив большую площадь, ткани и вызывая большее оскорбление сосудистую о чем свидетельствует сбора крови в поражении полости (стрелка). Поражение вызвано microcannula, однако, значительно меньше и меньше вреда ткани в месте инфузии. (F, G, H) иммунофлуоресценции против GFAP демонстрирует резко возросло количество GFAP + астроцитов вокруг поражение стандартной канюли (F), когда по сравнению с microcannula (G) и нормально, unlesioned полосатого тела (H). Шкала бары: & B, 1 мм, D - H, 250 мкм.

Обсуждение

Различные исследования показали, что за счет уменьшения размера доставки канюли для внутримозговых настои, ткани травмы и оскорбление барьер мозга крови уменьшается (Perry и соавт., 1993), воспаление уменьшается, и иммунной ответ ослабленного (Finsen и др. ., 1991), и реактивной глиоз уменьшается (Nikkhah и соавт....

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mini-osmotic pumps (MOPs)	Tool	ALZET	model #1002
Electrode puller	Tool	Stoelting Co.
Borosilicate tubing	Surgery	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-6
Microforceps	Surgery	World Precision Instruments, Inc.
Polyethylene tubing	Surgery	Plastics One	#C312 VT
LumaBond	Reagent	myNeuroLab, Inc