Электропорация микобактерий

Резюме

Микобактериальные стратегиях патогенных остается мало изучен. Медленные темпы роста большинства видов, непроницаемый характер клеточной стенки, и опасности работы с патогенными микобактериями сделать трудно учиться и в значительной степени ответственны за наше плохое понимание этих организмов. В этом видео мы продемонстрируем технику электропорации, которая включает подвергая клетки к краткому высокие электрические импульсы, чтобы ввод ДНК. Это наиболее широко используемый метод для введения ДНК в микобактериальных клеток.

Аннотация

Высокая эффективность трансформации является одним из основных ограничений в изучении микобактерий. Рода Mycobacterium может быть трудным для преобразования; это в основном вызвано толстые и восковой клеточной стенки, но усугубляется тем, что большинство молекулярных методов были разработаны для отдаленно связанных видов, таких как кишечная палочка и Сенная палочка. Несмотря на эти препятствия, микобактериальные плазмиды были выявлены и трансформация ДНК многих видов микобактериальные уже были описаны. Наиболее успешным методом для введения ДНК в микобактерий электропорации. Многие параметры способствовать успешной трансформации, сюда относятся виды / напряжения, характер трансформации ДНК, селективного маркера используется, рост средний, и условия для электропорации импульса. Оптимизированные методы преобразования как медленно и быстро производитель подробно описаны здесь. Преобразование эффективности для различных видов и микобактериальные с различными выбор маркеров сообщается.