Для этого исследования используйте небольшие коричневые кузнечики или SBPH, выращенные в рассаде риса. Как только культуры будут готовы, поместите выращенные SBPH в центрифужную пробирку и поместите их на ледяную баню на 10-30 минут. Затем поместите замороженный SBPH на предметное стекло под стереомикроскоп брюшком вверх и отрегулируйте фокус на его шести ногах.
Подготовьте два высокоточных пинцета с ультратонкими наконечниками. С помощью одного пинцета надавите на тело насекомого, чтобы удержать его на месте, и осторожно оттяните одну ногу другим пинцетом. Затем аккуратно надавите на грудную клетку насекомого, позволяя гемолимфе течь через ранку.
Чтобы собрать гемолимфу, приготовьте микропипетку, поместив одну микролитровую капиллярную трубку в колбу пипетки. Поместите капиллярную трубку близко к ране насекомого, держась за колбу микропипетки. Прикоснитесь кончиком капилляра к источающейся гемолимфе и соберите ее.
Как только капиллярная трубка достигнет желаемой линии масштабирования, слегка заблокируйте пальцем маленькое отверстие на колбе пипетки, чтобы остановить процесс всасывания. Затем выгрузите собранную гемолимфу в 100 микролитров буфера PBS. Точность сбора гемолимфы была подтверждена с помощью SDS-PAGE, который показал одинаковое содержание белка во всех трех образцах гемолимфы, собранных отдельно.
Для личинки общая концентрация белка составляла примерно 3,7 миллиграмма на миллилитр. У взрослых женщин и мужчин концентрации белка составляли около 3,5 и 3,6 миллиграмма на миллилитр соответственно, не показывая существенной разницы между тремя образцами. Личиночная гемолимфа показала гемоциты размером от двух до 20 нанометров.
Кроме того, концентрация клеток была сопоставима в трех собранных образцах гемолимфы.
