Для начала паразитируйте около 40 куколок Lucilia sericata на появляющихся взрослых самцах и самках ос Nasonia, спаривающихся в течение 1,5 дней. В течение 12-24 часов после паразитирования осторожно вскрывают один конец оболочки куколки с помощью стерильной рассекающей иглы. Возьмитесь за другой конец скорлупы и найдите зародыш осы.
Затем перенесите эмбрион в стерильное клеточное ситечко, смоченное PBS. После переноса от 20 до 30 эмбрионов промойте их 1000 микролитрами 10% раствора гипохлорита натрия с последующим стерильным PBS и 70% этанолом. Наконец, промойте их три раза стерильным PBS.
Затем поместите лист полипропиленовой сетки, предварительно смоченный PBS, в 24-луночную пластину. Используя стерилизованную маленькую щетку, аккуратно перенесите зародыши ос из клеточного ситечка на лист полипропиленовой сетки. Для выращивания ос добавьте по 50 микролитров подготовленного NRM в каждую лунку с листом.
Затем добавьте один миллилитр стерильной воды между каждой лункой, чтобы поддерживать влажную среду для роста. На следующий день перенесите полипропиленовую сетку, содержащую личинку, из одной лунки в другую, используя продезинфицированный спиртом пинцет, и добавьте 50 микролитров уравновешенного NRM. После девяти-11 дней кормления более 80% личинки должны превратиться в белых или желтых куколок.
Затем переложите сетку на чистую колодезную пластину. В настоящем исследовании выживаемость безмикробных ос от личинки до куколок была значительно улучшена по сравнению с выращиванием безмикробных ос с помощью третьей версии NRM. Кроме того, не было никакой разницы в периоде генерации между осами без микробов и осами, выращенными традиционным способом.
